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黄芩水提液对3T3-L1脂肪细胞增殖、诱导分化及脂联素启动子荧光素酶活性的影响
目的:本研究旨在观察黄芩水提液(Scutellaria BaicalensisWater Extract,SBWE)对3T3-L1前体细胞增殖、分化,对脂肪细胞因子脂联素表达以及脂联素(Adiponectin,ADP)启动子荧光素酶活性的影响,从分子生物学角度阐述SBWE降脂作用的可能机理.方法:通过体外培养3T3-L1细胞,采用MTT法检测SBWE对3T3-L1细胞增殖能力的影响;通过诱导脂肪细胞分化成为成熟脂肪细胞,观察SBWE对脂肪形成的影响;化学发光法检测脂联素启动子双荧光素酶报告基因活性;荧光定量PCR法检测脂联素mRNA(Adipoq)表达.结果:与正常组相比,给予3T3-L1细胞0.01、0.1、1 mg?mL-1浓度的SBWE 24 h,可显著抑制细胞的增殖活性(P＜0.05);0.1、1 mg?mL-1浓度的SBWE能够降低3T3-L1细胞分化为脂肪细胞的数量,并减少细胞内脂滴聚集,但无明显剂量依赖性;0.01、0.1 mg?mL-1浓度SBWE能显著提高脂联素基因启动子荧光素酶活性,与空载体比较差异有统计学意义(P＜0.05);与正常组相比,给予3T3-L1细胞0.1 mg?mL-1SBWE 24 h,诱导前后的脂肪细胞Adipoq表达均明显增加(P＜0.05).结论:SBWE可有效抑制3T3-L1脂肪细胞的增殖、分化,同时增加脂联素基因表达,这可能是通过增强脂联素基因启动子荧光素酶活性实现,这些为黄芩水提液减肥的作用机制提供一定的基础.
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INSIG2稳定表达细胞系的建立及该基因对脂肪代谢的影响
目的 建立胰岛紊诱导基因2(INSIG2)稳定表达细胞系,观察过表达INSIG2后对脂肪代谢的影响.方法 构建INSIG2真核表达质粒,经脂质体转染313-L1细胞,RT-PCR、免疫细胞化学法鉴定INSIG2阳性细胞株及检测胰岛素诱导基因1(INSIG1)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达;ELISA检测细胞培养液中游离脂肪酸(FFA)的含量;油红"O"染色检测脂肪细胞的分化.结果 pcDNA3.1(+)-INSIG2成功转染3T3-L1细胞,过表达INSIG2后,INSIG1、FAS mRNA表达均下调,细胞培养液中游离脂肪酸含量降低,脂肪细胞分化明显抑制.结论 获得了INSIG2稳定表达细胞系,过表达INSIG2对脂肪代谢具有抑制作用.
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3T3-L1细胞与人骨髓间充质干细胞体外成脂及脂肪细胞功能的比较研究
目的:探讨3T3-L1细胞与人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外成脂及脂肪细胞功能的差异.方法:用密度梯度离心和贴壁培养的方法分离纯化人骨髓MSC,在倒置显微镜下观察细胞形态,体外向脂肪方向诱导分化,并通过油红O染色和吸光度值(OD值)检测其分化程度;qRT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂肪酸结合蛋白(FABP4)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα) mRNA表达水平;通过诱导的脂肪细胞与THP-1细胞共培养,加入1μg/ml的阿糖胞苷,在48 h测定其对肿瘤细胞的化疗抵抗作用.结果:通过油红O染色和测定吸光度值发现,3T3-L1细胞组脂质聚集量多于MSC组,且OD值大于MSC组(P＜0.05);qRT-PCR结果显示,3T3-L1来源的脂肪细胞的成脂基因PPARγ、FABP4和C/EBPα mRNA的相对表达量高于人骨髓MSC的脂肪细胞(P＜0.05);共培养实验结果表明,含脂肪细胞组THP-1细胞存活数较对照组多(P＜0.05),且3T3-L1细胞组与MSC组之间具有统计学差异(P＜0.05).结论:3T3-L1细胞的体外成脂能力比人骨髓MSC强;脂肪细胞具有促使THP-1细胞耐受化疗的作用,且在3T3-L1细胞组的作用大于人骨髓MSC组.
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肾上腺素和葡萄糖对3T3-L1脂肪细胞水孔蛋白mRNA表达的影响
目的通过细胞培养研究肾上腺素、葡萄糖对成熟脂肪细胞水孔蛋白(aquaporin adipose,AQPap) 基因表达的影响,了解AQPap基因表达的影响因素,探讨其在肥胖及糖尿病发病中所起作用. 方法用不同浓度(10-6mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L、10-9 mol/L)的肾上腺素刺激诱导分化第9天的3T3-L1细胞6 h;另以不同浓度的葡萄糖(5.6 mmol/L、11.2 mmol/L、16.8 mmol/L、 33.6 mmol/L)刺激细胞48h.提取细胞RNA,运用半定量RT-PCR技术检测AQPap mRNA表达量的变化. 结果与对照组相比,给予不同浓度的肾上腺素刺激分化成熟的3T3-L1细胞,其AQPap mRNA的表达量变化,差异无显著性意义(P>0.05).葡萄糖浓度的升高使培养细胞AQPap mRNA的表达量显著增强(P<0.05),16.8 mmol/L葡萄糖刺激培养细胞48 h,AQPap mRNA表达量约是对照组(葡萄糖浓度为5.6mmol/L)的3倍. 结论肾上腺素是一种脂解激素,它对脂肪细胞AQPap mRNA的表达无影响;高糖状态下AQPap mRNA表达明显增强.
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抵抗素结合多肽对3T3-L1脂肪细胞分化、脂代谢及葡萄糖转运体4基因表达的影响
目的 观察抵抗素结合多肽(RBP)对3T3-L1脂肪细胞分化、脂代谢及葡萄糖转运体4(GLUT-4)基因表达的影响.方法 构建大鼠抵抗素真核表达载体并转染3T3-L1前体脂肪细胞,获得稳定表达抵抗素基因细胞株;采用台盼蓝排斥试验,确定理想的RBP干预浓度,于诱导细胞分化第0天加入培养液;采用油红O染色,观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况;采用RT-PCR技术检测脂肪细胞分化标志基因及GluT-4基因表达变化;采用全自动生化仪比色法,检测脂肪细胞内TG和游离脂肪酸FFAs含量的变化.结果 (1) RBP浓度10-12mol/L时,脂肪细胞活细胞数比例较高,且细胞形态无明显改变.(2)RBP对正常脂肪细胞分化进程无明显影响,RBP虽未影响抵抗素稳定表达脂肪细胞内脂滴的出现时间,但细胞内脂滴的数目明显减少.(3)RBP对正常脂肪细胞分化标志基因及抵抗素稳定表达细胞分化早期标志基因Pref-1的表达无明显影响,但明显下调抵抗素稳定表达细胞分化中晚期标志基因C/EBPα和FAS的表达水平.(4)RBP对正常脂肪细胞内TG、FFAs含量无影响,但可显著降低抵抗素稳定表达脂肪细胞内的TG、FFAs含量.(5)RBP干预对正常脂肪细胞及抵抗素稳定表达脂肪细胞中GluT-4基因的表达水平均无显著影响.结论 RBP对正常3T3-L1脂肪细胞的分化、脂代谢、GluT-4基因表达均无明显影响,但能有效拮抗抵抗素基因,显著促进3T3-L1脂肪细胞分化及脂代谢.
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抵抗素在3T3-L1前脂细胞分化前后表达量的变化
目的 检测3T3-L1前脂细胞诱导分化为脂肪细胞前后抵抗素基因表达量的变化情况,为阐明抵抗素在细胞分化过程中所起作用并为研究其与胰岛素抵抗(IR)及2型糖尿病的相关性奠定基础.方法 用地塞米松、甲基异丁基黄嘌呤与胰岛素联合诱导法抽提诱导分化前后细胞总RNA,半定量RT-PCR检测抵抗素基因表达量.结果 抵抗素在3T3-L1细胞诱导前后表达量明显上升.结论 抵抗素在3T3-L1细胞分化过程中表达量的提高,提示其很有可能在鼠脂肪细胞产生IR的过程中发挥积极作用.
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肿瘤坏死因子α、吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响
目的 观察吡格列酮 (PIO)和肿瘤坏死因子α (TNF-α)对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响. 方法 以不同浓度PIO和TNF-α于各时段处理3T3-L1细胞,用RT-PCR技术检测各条件下脂联素mRNA的表达. 结果 (1)3T3-L1前体脂肪细胞无脂联素mRNA表达.(2)TNF-α抑制分化及成熟的3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达.(3)PIO增强分化及成熟的3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达.(4)PIO能改善TNF-α对脂联素mRNA表达的抑制. 结论 在分化及成熟的脂肪细胞中,TNF-α抑制脂联素mRNA表达,而PIO增强其表达;PIO促进前体脂肪细胞分化及激活脂联素表达;PIO改善TNF-α对成熟脂肪细胞脂联素的抑制.
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药根碱对脂肪细胞糖脂代谢的影响及其机制研究
目的 探讨黄连根茎提取物药根碱对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取、脂肪酸氧化的影响及其可能机制.方法 采用不同浓度(265.65、53.75、10.75、2.15、0.45μmol/L)药根碱作用于3T3-L1细胞不同时间(12、24、48、72h),MTT法检测药根碱的细胞毒性.以0.45 μ mol/L药根碱作用于3T3-L1细胞48h后,用[3H]2-DG标记检测胰岛素介导的葡萄糖摄取情况,14C-palmitic标记检测脂肪酸氧化情况,Real-time PCR检测PPARs基因表达情况,Western blotting检测PPARs蛋白表达情况,以PBS代替药根碱作为对照.结果 药根碱佳作用浓度为0.45μmol/L,佳作用时间为48h.与PBS对照组相比,药根碱具有促进3T3-L1细胞脂肪酸氧化、PPARα、PPARβ基因和蛋白表达的作用(P＜0.01或P＜0.05),而对PPARγ基因和蛋白表达无明显影响.结论 药根碱可显著促进3T3-L1细胞的脂肪酸氧化,其机制可能与上调PPARα、PPARβ基因及蛋白表达有关.
关键词： 药根碱 3T3-L1细胞 碳水化合物代谢 脂类代谢 过氧化物酶体增殖物激活受体 -
一类具有胰岛素增敏作用的苯并吡喃衍生物的设计和合成
在化合物1基础上设计合成了10个新型化合物,用3T3-L1前脂肪细胞对这些化合物进行了胰岛素增敏活性筛选.结果表明化合物10在3T3-L1脂肪细胞模型上表现出较强的促3T3-L1细胞分化活性, 提示其可能具有较好的胰岛素增敏作用.
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苯并吡喃类化合物的合成及生物活性研究
合成了13个苯并吡喃类化合物,用3T3-L1前脂肪细胞对这些化合物进行了促脂肪细胞分化活性筛选,并用db糖尿病小鼠模型对化合物8进行了降糖活性研究.结果表明,化合物3、8和11在3T3-L1脂肪细胞模型上表现出较强的促脂肪细胞分化活性,化合物8能显著降低db糖尿病小鼠的血糖水平.
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吲哚衍生物的设计、合成及胰岛素增敏活性
目的设计合成具胰岛素增敏活性的系列化合物.方法以具备胰岛素增敏活性的化合物为基础,运用拼合设计原理,设计合成了10个目标化合物,用3T3-L1前脂肪细胞对这些化合物进行了胰岛素增敏活性筛选.结果发现其中化合物4在3T3-L1前脂肪细胞模型上表现出较强的胰岛素增敏活性.结论该化合物可能在体内具有降糖活性,拟选送进行体内降糖活性测试.
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一类丙二酸衍生物的设计、合成及胰岛素增敏活性研究
目的 设计合成具备胰岛素增敏活性的系列化合物.方法 以具备胰岛素增敏活性的化合物为基础,根据电子等排和同系物衍生化设计原理,设计合成了19个目标化合物,用3T3-L1前脂肪细胞对这些化合物进行了胰岛素增敏活性筛选.结果 发现其中3个目标化合物在3T3-L1前脂肪细胞模型上表现出较强的胰岛素增敏活性.结论 该化合物可能在体内具有降糖活性,拟选送进行体内降糖活性测试.
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LRP16蛋白在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化中表达量的变化
目的 LRP16蛋白在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞LRP16蛋白表达的调控.方法 经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞,每天(0-8d)均留取蛋白标本.不同浓度(0、1、10、100nmol/L) 胰岛素刺激脂肪细胞24h,分别留取蛋白标本.Western-Blot方法检测样本中LRP16蛋白的表达量.结果 LRP16蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达,从诱导的第3、4天开始表达,迅速升至高峰,此后维持在高表达水平.LRP16蛋白在第6-8天之间表达水平无统计学差异(P>0.05),其余各时段间表达水平均有显著差异(P<0.01).不同浓度胰岛素刺激脂肪细胞24h,细胞中LRP16蛋白表达量与胰岛素浓度呈负相关(P<0.01).结论 LRP16蛋白随着前脂肪细胞分化的开启,表达量从无到有逐渐增加至高峰,并一直维持在高表达水平;胰岛素(INS)负调控脂肪细胞LRP16蛋白的表达.
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吡格列酮、高糖对3T3-L1细胞中p-Perilipin 1A蛋白表达的影响
目的 探讨吡格列酮和高糖对3T3-L1细胞中p-Perilipin 1A蛋白表达的影响.方法 将以3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,进行分组,设对照组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、高糖加吡格列酮组(25 mmol/L葡萄糖+100 μmol/L吡格列酮),通过测定培养基中甘油含量作为评价脂肪分解的指标,同时用Western blot检测p-Perilipin 1A蛋白表达.结果 通过甘油试剂盒监测甘油释放量,高糖组较对照组明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01),而高糖加吡格列酮组的甘油释放量较高糖组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01);同时Western blot检测结果显示,与对照组比较,高糖组p-Perilipin 1A蛋白明显上调,差异有统计学意义(P＜0.01),高糖组与高糖加吡格列酮组比较,显著抑制了p-Perilipin 1A蛋白的上调,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 吡格列酮可能通过阻止p-Perilipin 1A上调来抑制高糖刺激下的脂肪分解,减少游离脂肪酸,从而改善胰岛素抵抗.
关键词： 吡格列酮 高糖 3T3-L1细胞 p-Perilipin 1A -
GLUT4和脂联素在3T3-L1脂肪细胞中共享囊泡转运机制
目的 观察葡萄糖转运蛋白GLUT4和脂联素在3T3-L1细胞中的亚细胞分布.方法 诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,比较细胞分化前后GLUT4和脂联素的表达情况;通过蔗糖密度梯度离心比较GLUT4囊泡和脂联素囊泡的密度;采用结构照明超高分辨率显微镜(3D-SIM)观察GLUT4和脂联素在3T3-L1脂肪细胞内的分布情况.结果 3T3-L1前脂肪细胞呈梭形,胞质内无脂滴,细胞分化成熟后呈圆形,胞质内含有大量脂滴;GLUT4和脂联素在3T3-L1前脂肪细胞中不表达,在分化成熟的脂肪细胞中高表达;GLUT4囊泡和脂联素囊泡具有相似的密度;GLUT4和脂联素在细胞中共定位.结论 GLUT4和脂联素在3T3-L1脂肪细胞中分布于相似的细胞囊泡结构,共享转运机制.
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维生素D及其受体对3T3-L1前脂肪细胞分化影响的分子机制
前脂肪细胞增殖、分化过度是肥胖的一个重要病理机制.早在20多年前就已发现维生素D可以抑制3T3-L1前脂肪细胞系分化成熟,相关的分子机制近几年有了新的进展.3T3-L1分化是一个受多种基因蛋白调节的具有严格时序性的过程,现已证实维生素D与其受体结合后作用于3T3-L1分化早期的分子事件,如减少PPARγ配体形成,减少CCAAT/增强子结合蛋白β mRNA的表达,抑制C/EBPβ的转录活性,同时也作用于晚期分子事件,如抑制C/EBPα和PPARγ的mRNA表达等,通过影响这些重要分子发挥其抑制作用.
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锌α2糖蛋白真核表达载体的构建和体外表达鉴定
目的 构建小鼠锌α2糖蛋白(mZAG)真核表达载体,在体外培养细胞中鉴定其mRNA和蛋白水平表达.方法 提取小鼠肝组织总RNA,采用RT-PCR法扩增mZAG全基因表达序列,酶切法将mZAG cDNA全序列插入表达质粒载体pcDNA3.1(-)中构建pcDNA3.1(-)-mZAG真核表达质粒.采用阳离子脂质体转染法将不同浓度mZAG表达质粒(0、0.4、0.8、1.6ug)pcDNA3.1(-)-mZAG和4对mZAG小干扰RNA(siRNA)序列转染到3T3-Ll前脂肪细胞中,实时荧光定量RT-PCR测定mZAG mRNA表达水平,Western blot检测mZAG蛋白表达情况.结果 测序鉴定证实成功构建mZAG真核表达质粒pcDNA3.1(-)-mZAG.实时荧光定量RT-PCR检测结果显示,0.4、0.8、1.6μg mZAG转染组3T3-Ll细胞中的mZAGmRNA表达水平分别是0μg mZAG转染组的2.58(P=0.002)、3.67(P=0.000)、5.19倍(P=0.001);mZAG-siRNA1组和mZAG-siRNA4组小鼠3T3-L1细胞中的mZAG mRNA表达水平显著减少,分别是不转染mZAG siRNA干扰序列对照组的49%(P=0.002)和41%(P=0.000).Western blot检测结果显示,0.8μg mZAG质粒转染组的体外mZAG蛋白表达水平是不转染mZAG质粒对照组的2.75倍(P=0.017);mZAG-siRNA1和mZAG-siRNA4干扰序列转染组的体外mZAG蛋白表达水平仅为对照组的55%(P=0.004)和62%(P=0.025).结论 成功构建mZAG真核表达载体,该载体能够在体外细胞中良好表达.筛选出能够显著抑制mZAG表达的siRNA1和siRNA4,为今后进一步深入研究ZAG提供了有用工具.
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脂肪因子chemerin对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响
目的 探讨脂肪因子chemerin对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响及可能机制.方法 制备小鼠chemerin过表达及RNA干扰重组慢病毒,感染3T3-L1细胞.实验设chemerin基因沉默组、沉默空载体对照组、过表达组、过表达空载体对照组.另在细胞增殖实验中增设细胞外信号调节激酶(ERK)阻断剂组.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法联合5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法观察chemerin对3T3-L1细胞增殖的影响;实时定量PCR检测chemerin、ERK1/2及细胞周期蛋白(cyclin)D1基因mRNA表达;Western印迹法检测chemerin、ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白水平.结果 MTT及BrdU掺入实验结果显示:与过表达对照组相比chemerin过表达后吸光度(A)值升高(1.09±0.08比0.90±0.09,P＜0.05),BrdU掺入量增加[(126.5±14.6)％比(100.0±7.0)％,P＜0.05],此效应可被ERK1/2信号通路阻滞剂PD98059抑制,A值(0.91±0.13)及BrdU掺入量(104.3±10.7)％降低,与过表达组相比差异均有统计学意义(均P ＜0.05);与沉默对照组相比,chemerin基因沉默后A值降低(0.72 ±0.11比0.90 ±0.09,P＜0.05),BrdU掺入量减少[(77.6±11.8)％比(99.7±6.3)％,P＜0.05];实时定量PCR结果显示:chemerin过表达后与其空载对照组相比chemerin、ERK1/2、cyclinD1表达上调(2.77 ±0.31比1.01 ±0.12,1.39±0.19比0.76±0.30,1.46±0.14比0.88±0.14,1.44±0.17比1.03±0.15,均P＜0.05);chemerin基因沉默后均表达下调(0.35±0.12比1.25±0.31,0.64±0.15比1.03±0.14,0.56±0.10比1.06±0.29,0.66 ±0.13比1.09±0.19,均P＜0.05);Western印迹结果显示:chemerin过表达后与其空载对照组相比chemerin、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平增加(2.18±0.32比1.18±0.14,1.37±0.05比0.97±0.12,1.06±0.09比0.56 ±0.08,均P＜0.05),chemerin基因沉默后与其对照组相比chemerin、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平降低(1.00±0.07比1.40±0.17,0.87±0.15比1.20 ±0.12,0.49±0.07比0.91±0.11,均P＜0.05).结论 chemerin可促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,其机制可能是通过上调ERK1/2信号通路实现.
关键词： 脂肪因子类 3T3-L1细胞 细胞增殖 慢病毒属 丝裂原活化蛋白激酶1 -
替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体 γ信号通路的影响
目的 观察替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路的影响,探讨替米沙坦延缓2型糖尿病病程的作用机制.方法 诱导3 T3-L1前脂肪细胞至80％成熟(对照组),加入50 ng/ml肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激1 h(TNF-α组),分别以0.1、5、10μmol/L替米沙坦加入培养基干预24 h,即T0.1,T5和T10组.应用Western印迹检测PPARγ及其磷酸化水平、细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)表达变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测培养基中脂联素含量.短发夹RNA(shRNA)沉默未分化3T3-L1的PPARγ,筛选PPARγ丝氨酸突变型3T3-L1细胞系即S273A、S112A、S186A,以进一步确定磷酸化位点.shRNA沉默CDK5,油红O染色、异丙醇萃取检测分化效率,以10μmol/L替米沙坦干预成熟3T3-L1,Western印迹检测pPPARγ/PPARγ,ELISA检测培养基脂联素含量.结果 TNF-α刺激及替米沙坦干预后各组CDK5表达差异均无统计学意义(均P>0.05).与TNF-α组相比,T5组、T10组pPPARγ/PPARγ降低,脂联素含量增加,差异均有统计学意义(均P<0.05),T0.1组差异均无统计学意义(均P>0.05).与3T3-L1野生型(WT)相比,S186A、S112A组加入TNF-α后pPPARγ/PPARγ升高,脂联素降低,加入替米沙坦后pPPARγ/PPARγ降低,脂联素含量增加,差异均有统计学意义(均P<0.05),S273A组pPPARγ/PPARγ、脂联素差异均无统计学意义(均P>0.05).异丙醇萃取显示沉默CDK5组(shCDK5)与随机对照(shCon)组相比3T3-L1分化差异无统计学意义(P>0.05),Western印迹显示与shCDK5组相比,shCon组加入替米沙坦后pPPARγ/PPARγ降低,脂联素增加,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 替米沙坦能够缓解因TNF-α刺激导致的PPARγ磷酸化水平升高,上调脂联素含量.CDK5介导了替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞PPARγ信号通路的影响.替米沙坦的作用位点为PPARγ第273位丝氨酸,PPARγ第273位丝氨酸上游激酶为CDK5.
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多不饱和脂肪酸对小鼠瘦素表达的影响
目的 探讨多不饱和脂肪酸(PUFAs)对瘦素表达的影响.方法 使用4 w龄C57BL/ 6J 雌性小鼠,分别给予不同种类高脂饲料(18% 脂肪,供能比为36%)喂养 ( 高脂豆油饲料、高脂鱼油饲料和高脂豆油:鱼油(5:1)混合饲料,以正常饲料(6% 脂肪来自豆油,供能比为12%)为对照,小鼠自由进食,喂养时间为4 个月.同时进行了PUFAs对体外培养3T3-L1细胞分化的干预实验,在细胞被诱导分化D5 ,在培养基中分别加入油酸(OA, C18:1n-9)、花生四烯酸(AA, C20:4n-6)、二十碳五烯酸(EPA, C20:5n-3)和二十二碳六烯酸(DHA, 22:6n-3,0.125 mmol/L)培养12 h.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)观察小鼠血浆和细胞培养基中瘦素及瘦素受体(sOB-R)表达的变化.结果 鱼油组、豆油:鱼油组以及豆油组之间血浆瘦素水平(15.97±1.41, 10.37±0.98和5.81±2.95 μg/L)均存在显著性差异(鱼油＞豆油:鱼油＞豆油);与正常对照组(14.96±6.62 μg/L)比,鱼油组血浆瘦素水平未发生明显变化.血浆sOB-R水平在4组饲料之间未见显著性差异.细胞培养显示,与对照组(18.70±0.67 μg/g prot)比,在培养基中加入EPA和DHA后瘦素表达量(30.19±7.11和28.18±4.87 μg/g prot)明显增多;而加入OA和AA对瘦素表达(19.75±6.11和24.48±9.84 μg/g prot)无影响.值得注意的是,未能检测到细胞培养基中sOB-R的表达.结论 饲料PUFAs对小鼠瘦素表达具有调节功能,但鱼油n-3 PUFAs和豆油n-6 PUFAs的作用不同.
关键词： n-3多不饱和脂肪酸 瘦素 小鼠 3T3-L1细胞
