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儿茶素和咖啡碱组合对3T3-L1细胞增殖及脂肪代谢的影响
目的 研究对儿茶素和咖啡碱对3T3-L1细胞的增殖及脂肪代谢的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测对3T3-L1细胞增殖的影响；3T3-L1细胞诱导分化8d后,对各组细胞进行油红O染色并测定细胞内甘油三酯(TG)含量；细胞分化12d后,添加儿茶素和咖啡碱组合或同时添加去甲肾上腺素(NA)作用24h,分析各组细胞内脂肪分解.结果 儿茶素能明显抑制3T3-L1细胞的增殖;儿茶素和咖啡碱组合能明显抑制3T3-L1细胞分化后,细胞内TG的沉积,且在相同儿茶素浓度下,咖啡碱浓度越高抑制效果越明显.咖啡碱明显提高NA诱导成熟脂肪细胞脂解的能力,且呈剂量效应关系.结论 儿茶素和咖啡碱组合能够抑制脂肪细胞增殖和甘油三酯积聚,咖啡碱促进激素诱导脂肪细胞中脂肪分解.
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PCAF通过调控FOXO1活性参与3T3-L1前脂肪细胞分化
目的：在3T3-L1细胞模型中，探讨组蛋白乙酰转移酶PCAF对脂肪细胞分化调控的分子机制。方法：应用Real-time PCR和Western blot检测PCAF在3T3-L1细胞分化过程中的表达；应用重组慢病毒感染细胞，shRNA干扰或过表达PCAF，通过Oil-Red-O染色法观察PCAF表达量变化对细胞分化的影响；应用ChIP on chip和PCR array的方法筛选PCAF调控的下游基因和通路；应用Western blot和ChIP qPCR对潜在目的基因进行验证。结果：PCAF在3T3-L1细胞分化过程中表达升高；PCAF表达下调会抑制脂肪细胞的分化；PCAF可以在细胞分化不同时间点诱导PDPK1和FOXO1的表达，并间接影响了FOXO1磷酸化。结论：组蛋白乙酰转移酶PCAF通过胰岛素通路（PI3K/PDPK1/AKT/FOXO1）参与对脂肪细胞分化的转录调控。
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不同频率间歇低氧对3T3-L1脂肪细胞炎症因子和脂肪因子的影响
目的:测定不同频率间歇低氧处理的脂肪细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和瘦素、脂联素水平的变化.方法:以分化成熟的3T3-L1脂肪细胞为研究对象,随机分为8组,即4个不同频率间歇低氧组(IH1-4,处理方案为分别循环充入1.5％ O245s和21％O22min15s、4min15 s、5min 45 s和8rmin45 s,每组60个循环)和各自的正常氧对照组(SC1～4,分别给予相应时间的21％O2处理).完成暴露后收集培养基,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定脂肪细胞上清液中TNF-α、IL-6、瘦素和脂联素的水平.结果:各间歇低氧组脂肪细胞上清液内TNF-α、IL-6和瘦素的水平均明显高于各自的正常氧对照组(P＜0.05或P＜0.01),且IH3组显著高于其余IH组(P＜0.05或P＜0.01)；各间歇低氧组脂肪细胞上清液内脂联素的水平均明显低于各自的正常氧对照组(P＜0.01),且IH3组显著低于其余IH组(P＜0.05或P＜0.01).结论:间歇低氧可以导致体外培养的脂肪细胞TNF-α、IL-6、瘦素和脂联素的分泌异常,脂肪细胞的内分泌功能紊乱可能参与了阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者的胰岛素抵抗的发生.
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小鼠前脂肪细胞3T3-L1培养与四联诱导分化方法的探讨
目的：改进小鼠前脂肪细胞3T3-L1的培养并诱导分化为成熟脂肪细胞的方法。方法使用含有10％胎牛血清（FBS）的高糖型DMEM液体培养基常规培养小鼠前脂肪细胞，2~3 d换液1次。细胞按诱导分化方式的不同分为三联诱导组和四联诱导组。三联诱导组诱导分化培养基Ⅰ成分为常规培养基基础上加用人胰岛素10 mg/L，1-甲基-3-异丁基黄嘌呤（IBMX）0.5 mmol/L，地塞米松（DEX）1.0μmol/L；四联诱导组诱导分化培养基Ⅰ的成分为在三联诱导组基础上加入吲哚美辛0.1 mmol/L。2组均诱导分化培养基Ⅰ培养2 d，连续诱导2次后换用诱导分化培养基Ⅱ，成分为：高糖型DMEM培养基含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素混合液，人胰岛素10 mg/L。培养2 d，连续诱导2次。倒置显微镜和油红O染色观察诱导前及诱导后2组细胞的形态变化。结果小鼠前脂肪细胞3T3-L1状态良好，呈现铺路石状生长，均匀布满培养瓶底，2 d传代1次。四联诱导组诱导分化结果优于三联诱导组。三联诱导剂诱导前脂肪细胞后，细胞形态并未发生明显变化。四联诱导剂诱导前脂肪细胞后，可达到90％以上的成熟脂肪细胞。成熟的脂肪细胞呈圆形，有大量脂滴聚集，油红O染色显现橘红色。结论在三联诱导基础上加入吲哚美辛的四联诱导法可以更好地促进脂肪前体细胞分化。
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五味清浊散对3T3-L1细胞TNF-α浓度和基因表达的影响
目的:观察五味清浊散(WQS)对脂肪细胞血糖浓度和TNF-α水平及其mRNA其表达的影响.方法:药物处理48h后,采用GOD-POD法检测3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型培养液中葡萄糖浓度,ELISA法检测TNF-α浓度,RT-PCR法检测TNF-α基因mRNA的表达.结果:WQS使脂肪细胞IR模型培养液葡萄糖、TNF-α浓度降低,并下调TNF-α基因mRNA的表达.结论:WQS有显著的降糖作用,并下调TNF-α水平.
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杜仲对脂肪细胞糖代谢的影响
目的:观察杜仲及其单体化合物对脂肪细胞糖代谢的影响.方法:检测药物处理24h和48h后3T3-L1脂肪细胞对培养液中的葡萄糖消耗量,以2-脱氢-3H-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率.结果:在高糖培养液中,杜仲提取物有显著的降糖作用,且降糖作用呈剂量依赖性.各浓度药物可使3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖转运率明显降低.结论:杜仲提取物能显著增加脂肪细胞的葡萄糖转运和消耗.
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通过对3T3-L1细胞的作用探讨山楂叶总黄酮调脂机制
目的:观察山楂叶总黄酮对前脂肪细胞3T3-L1增殖、分化和分泌Leptin、PAI-1的影响,探讨其调脂作用的可能机制.方法:培养3T3-L1细胞,并用不同浓度的山楂叶总黄酮进行干预,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,用油红O染色和染色比色法分析脂肪细胞的分化程度.用ELISA法检测细胞培养上清中Leptin、PAI-1的含量.结果:山楂叶总黄酮中浓度组能促进前脂肪细胞的增殖,但抑制其向成熟脂肪细胞分化,山楂叶总黄酮对成熟脂肪细胞分泌Leptin、PAI-1有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.结论:山楂叶总黄酮可能通过抑制前脂肪细胞分化和影响其分泌因子而达到调脂作用.
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3T3-L1前脂肪细胞与蚕丝支架的体外共培养
蚕丝具各较好的力学性能,生物相容性优于传统的人工合成的可降解高分子材料.实验拟观察蚕丝对3T3-L1前脂肪细胞吸附作用及对细胞形态和功能的影响.将原料蚕丝与经胰蛋白酶消化后的原料蚕丝制成蚕丝复合物三维支架:制备3T3-L1前脂肪细胞悬液,调整细胞浓度为6×1010 L1;将3T3-L1前脂肪细胞悬液接种在支架上,培养1～4周,倒置显微镜观察可见3T3-L1前脂肪细胞伸出细长的突起沿着蚕丝不断向前迁移延伸,细胞首尾相互融合,渐渐连成一片分布于蚕丝网眼内;扫描电镜观察可见细胞与支架紧密贴附,适度伸展,并有基质分泌.结果表明蚕丝复合物三维支架对3T3-L1前脂肪细胞具有良好的吸附作用,并能维持3T3-L1前脂肪细胞正常形态和功能.
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JAZF1基因抑制对3T3-L1脂肪细胞糖、脂代谢的影响
目的 探讨JAZF1基因抑制对3T3-L1脂肪细胞糖、脂代谢相关基因的影响.方法 构建JAZF1小发夹RNA (shRNA)表达载体并转染3T3-L1细胞,实时荧光定量PCR(RT-QPCR)和蛋白印迹法检测JAZF1 mRNA和蛋白水平的表达；氢三放射示踪法检测3T3-L1细胞糖摄取率；蛋白印记法检测糖、脂代谢相关基因蛋白水平；油红O染色检测脂肪细胞甘油三酯(TG)含量变化.结果 成功构建JAZF1-shRNA；转染脂肪细胞48 h后,JAZF1 mRNA和蛋白水平明显低于对照组(P＜0.05)；氢3放射性示踪法显示转染组葡萄糖摄取率明显降低(P＜0.05)；PPAR-γ蛋白表达升高(P＜0.05),激素敏感脂肪酶(HSL)、内脏脂肪素(Visfatin)、胰岛素诱导基囚-2 (Insig-2)蛋白表达降低(均P＜0.05)；油红O染色显示JAZF1转染组细胞内脂质积聚明显,比对照组升高约25％(P＜0.05).结论 JAZF1基因抑制可减少基础糖转运,增加脂质与胆固醇合成,减少脂质分解并减少相关脂肪细胞因子的表达.
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辣椒碱对3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖摄取的影响
目的:探讨辣椒碱对3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖摄取的影响.方法:不同浓度的辣椒碱作用于3T3-L1前脂肪细胞,采用MTT测定细胞活性,GLU Test试剂盒法测定葡萄糖摄取,Western Blot法检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)表达的变化.结果:25 μM辣椒碱作用72h和50μM、100 μM辣椒碱作用48h、72 h,可显著抑制3T3-L1细胞增殖,6.25、12.5、25μM辣椒碱作用可显著促进3T3-L1细胞的葡萄糖摄入,Western Blot结果显示辣椒碱能够显著增加GLUT1蛋白表达量,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:低剂量辣椒碱具有降糖作用,其作用机制可能与增加GLUT-1蛋白表达有关.
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熊果酸对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型CAP表达的影响
目的:观察熊果酸对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗、摄取及细胞分化的影响,并探讨其作用机制.方法:将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,用高糖、高胰岛素联合诱导胰岛素抵抗模型.使用葡萄糖氧化酶法检测3T3-L1细胞葡萄糖消耗量,氚标葡萄糖法检测其葡萄糖摄取量,以评价模型建立情况.用四唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测不同浓度熊果酸对3T3-L1脂肪细胞活力的影响以确定实验药物浓度.加入不同浓度熊果酸分组干预,用氚标葡萄糖法检测脂肪细胞葡萄糖摄取量；用油红O染色法检测3T3-L1脂肪细胞分化情况；用实时荧光定量聚合酶链反应法、蛋白质印迹法分别观察熊果酸对3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型细胞分化相关蛋白脂肪细胞脂类结合蛋白、基质金属蛋白酶1和原癌基因Cb1相关蛋白(c-Cbl-associated protein,CAP)表达的影响.结果:在成功建立胰岛素抵抗模型的基础上,使用MTT法检测细胞活力,确定熊果酸的作用浓度在4～20μmol/L.与模型组相比,低、高剂量熊果酸组(10、20 μmol/L)及罗格列酮组(5 μmol/L)葡萄糖摄取均明显升高(P＜0.01);低、高剂量熊果酸组3T3-L1脂肪细胞分化程度低干对照组和罗格列酮组.熊果酸可明显上调3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型CAP mRNA及蛋白的表达(P＜0.01).结论:熊果酸改善3T3-LI脂肪细胞胰岛素抵抗模型糖代谢的同时可抑制其分化,这一机制可能与熊果酸上调脂肪细胞CAP的表达有关.
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未知功能基因JAZF1过表达对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响
目的 观察JAZF1基因(Juxtaposed with another zincfinger gene 1)过表达对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢相关基因的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-QPCR)法检测JAZF1 mRNA在健康C57BL/6J小鼠多种组织表达分布情况;构建JAZF1真核表达载体并瞬时转染3T3-L1细胞,RT-QPCR法检测JAZF1、糖脂代谢相关基因mRNA的表达;用Western印迹法测定各组细胞JAZF1蛋白水平;油红O染色比色法检测细胞内脂质积聚的变化.结果 转染48 h后,JAZF1转染组脂肪细胞中,JAZF1 mRNA及蛋白表达明显高于阴性对照和空载组,激素敏感脂肪酶(HSL)mRNA表达水平明显增加(P<0.05),脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、类固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)mRNA相对表达量明显降低(均P<0.01),脂肪细胞甘油三酯酶(ATGL)、葡萄糖转运子1(GLUT1)、GLUT4 mRNA表达并无明显改变;油红O染色显示JAZF1转染组细胞内脂质积聚明显降低(P<0.05).结论 JAZFl在C57BL/6J小鼠多种组织均有表达,提示其可能在维持正常生理功能中起着一定作用.3T3-L1细胞过表达JAZF1可减少脂质合成、增加脂解,并可明显改善脂质积聚,可能是肥胖和糖尿病治疗的一个潜在靶点.
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游离脂肪酸调节脂肪细胞脂联素受体基因的表达
采用RT-PCR法检测以游离脂肪酸(FFA)孵育的(前)脂肪细胞中脂联素受体(AdipoR)mRNA的表达规律.结果表明3T3-L1脂肪细胞AdipoR1和AdipoR2基因表达呈分化依赖性增强.油酸仅对前脂肪细胞AdipoR的表达起抑制作用,而高浓度棕榈酸能抑制(前)脂肪细胞AdipoR的表达.
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TNF-α对3T3-L1脂肪细胞PPAR-γ2 mRNA表达及脂联素分泌的影响
用肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别处理未分化、已分化的3T3-L1细胞,检测培养细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPAR-γ2)mRNA的表达和脂联素的分泌.结果表明TNF-α可明显抑制3T3-L1脂肪细胞的PPAR-γ2 mRNA表达和脂联素的分泌(P＜0.05或P＜0.01),提示TNF-α可能通过PPAR-γ影响脂联素的分泌.
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吡格列酮和肿瘤坏死因子α对3T3-L1脂肪细胞脂联素受体mRNA表达的影响
观察吡格列酮(PIO)和TNF-α对3T3-L1脂肪细胞中两种脂联素受体(AdipoR)mRNA表达的影响,发现AdipoR mRNA在3T3-L1细胞分化过程中的表达呈逐渐上调趋势;PIO能增加未分化和已分化3T3-L1细胞的AdipoR mRNA表达,且其促进效应与时间、剂量呈依赖关系;TNF-α对AdipoR mRNA的表达无影响.
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胰岛素上调3T3-L1细胞apelin基因表达的初步观察
Northern印迹法证实apelin在分离的小鼠脂肪细胞上有表达,其表达量随3T3-L1细胞分化而渐增.胰岛素上调3T3-L1脂肪细胞apelin的表达,提示脂肪细胞apelin的表达可能与肥胖、胰岛素抵抗、高血压相关.
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胰岛素、葡萄糖对3T3-L1脂肪细胞脂肪水孔蛋白表达的调节
利用半定量RT-PCR技术及Western印迹法研究胰岛素、葡萄糖对成熟脂肪细胞脂肪水孔蛋白(AQPap)基因表达的影响.结果表明,胰岛素对AQPap的表达具有抑制作用;而高浓度葡萄糖则对AQPap的表达具有促进作用.
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在大鼠脂肪组织及3T3-L1细胞中甘丙肽对抵抗素基因表达的影响
目的了解甘丙肽对脂肪组织及3T3-L1细胞抵抗素表达的影响.方法应用RT-PCR、原位杂交的方法验证甘丙肽及其受体在大鼠脂肪组织及脂肪细胞中的表达.应用Northern印迹的方法观察甘丙肽对抵抗素表达的影响.结果甘丙肽及其受体1和2在大鼠脂肪组织中均有表达,相对于甘丙肽受体2,受体1表达的丰度较高.给SD大鼠注入不同剂量甘丙肽4 h后,抵抗素基因表达下降.诱导成熟的脂肪细胞加入甘丙肽后,在2 h,4 h,抵抗素的表达无明显的改变,但24 h可见抵抗素的表达受到抑制.结论甘丙肽可以在体内及体外抑制抵抗素的表达,提示在大鼠脂肪组织中表达的甘丙肽可能在能量代谢及胰岛素抵抗中起到一定的作用.
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葛根素对3T3-L1细胞PPAR-γ mRNA表达的影响
大量研究表明,葛根素(puerarin,Pue)可明显改善实验性糖尿病胰岛素抵抗,近年来临床上也有了Pue改善糖尿病患者胰岛素敏感性的报道[1,2],但是葛根素对糖尿病胰岛素抵抗的作用及其分子机制研究迄今尚未见详细报道.
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蛋白酪氨酸磷酸酶1B在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中表达的变化
目的:观察在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)mRNA表达及其蛋白水平的变化,探讨PTP1B与脂肪细胞分化的关系.方法:体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在3T3-L1前脂肪细胞分化成熟过程中(第1～10日),采用油红O染色及RT-PCR法检测过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)基因表达评价脂肪细胞分化成熟情况,RT-PCR法及Western印迹法检测脂肪细胞分化过程中PTP1B mRNA表达及其蛋白水平的变化.结果:随着脂肪细胞诱导分化逐步深入,油红O染色显示其中脂滴形成逐渐增多,至占全视野90%以上;同时PPARγ2基因表达逐步增多,均提示脂肪细胞分化逐步成熟,至终分化为成熟脂肪细胞.PTP1B mRNA和蛋白水平在前脂肪细胞中表达较高,随着脂肪细胞的逐步成熟,其表达逐渐降低,至分化成熟时表达水平降至低.结论:在3T3-L1前脂肪细胞分化成熟过程中,PTP1B mRNA及其蛋白表达水平逐渐减低,PTP1B可能参与了脂肪细胞分化.
