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DNA甲基化转移酶1介导体外高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤的实验观察
目的 研究高糖刺激对体外培养的小鼠足细胞DNA甲基化转移酶(Dnmts)表达的影响及Dnmt1在高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤中的作用. 方法 以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,分为正常糖对照组、高糖刺激组、甘露醇组及高糖+干预组(DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷,Dnmt1-siRNA),培养48 h,RT-PCR检测其Dnmts mRNA表达;免疫印迹检测Dnmt1、nephrin及podocin蛋白表达;Transwell转板迁移实验观察不同处理后足细胞迁移数目. 结果 与正常糖对照组比较,高糖刺激组足细胞Dnrnt1 mRNA及蛋白表达增加(P＜0.01),Dnmt3a及Dnmt3b mRNA表达未见明显改变.经5-氮杂-2'脱氧胞苷或Dnmt1-siRNA处理48 h后,高糖刺激组导致Dnmt1高表达得到抑制,降低的足细胞裂孔膜蛋白podocin、nephrin表达增加(P＜0.01). 结论 高糖上调足细胞Dnmt1蛋白表达,Dnmt1参与体外高糖诱导的小鼠足细胞损伤.
关键词： 足细胞 高糖 DNA甲基转移酶1(Dnmt1) DNA甲基化抑制剂 -
RNA干涉抑制肺癌细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达
目的:通过抑制肺癌细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达,从而部分恢复抑癌基因的表达.方法:采用RNAi技术来抑制DNMT1的活性.应用体外转录的方法,共合成了5个针对DNMT1不同靶位的siRNA序列,并转染人肺癌细胞NCI-H157.采用MSP-PCR、COBRA等方法对抑癌基因RASSF1A进行甲基化分析,半定量RT-PCR检测DNMT1 mRNA的敲降与RASSF1A基因的表达.结果与结论:5个靶位的siRNA序列中有两个靶位能够有效地抑制DNMT1的表达,且呈剂量依赖效应.人肺癌细胞NCI-H157中抑癌基因RASSF1A发生了高度甲基化,在抑制DNMT1活性后, RASSF1A基因去甲基化而恢复表达.
关键词： DNA甲基转移酶1(Dnmt1) 甲基化 RNA干涉 RASSF1A -
siRNA沉默膀胱癌T24细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的研究
目的 研究siRNA对膀胱癌细胞T24 DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的沉默作用.方法 将筛选出的siRNA转染入膀胱癌T24细胞分为空白组、脂质体组、阴性对照组和siRNA组,分别运用RT-PCR、Western blot检测转染后不同时段DNMT1 mRNA水平、蛋白水平变化.结果 筛选出的siRNA转染膀胱癌T24细胞DNMT1 24 h开始出现mRNA减少,24 h、48 h、72 h分别降至(66.05±4.87)％、(39.36±4.53)％和(40.86±4.81)％(P＜0.05).转染后24 h、48 h、72 h蛋白水平分别降至(90.21±3.68)％、(71.45±3.44)％和(67.74±3.38)％(P＜0.05).结论 siRNA能有效地沉默膀胱癌细胞T24 DNMT1的表达.
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DNMT1基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义
采用 Real-Time PCR 检测 DNA 甲基转移酶-1（DNMT1）mRNA 在20例口腔正常黏膜组织及43例口腔鳞状细胞癌（OS-CC）组织中的表达，用免疫组织化学法和 Western blot 分别检测 DNMTl 蛋白在组织样本中的表达。结果显示 DNMTl mRNA 在 OS-CC 中高表达（Z ＝－2．028，P ＜0．05），43例 OSCC 组织中，DNMTl 蛋白阳性表达率为81％，而在20例口腔正常黏膜组织中的阳性表达率为25％（P ＜0．05）。DNMTl 有可能参与 OSCC 的发生发展。
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玻璃化冷冻对乳鼠卵巢Dnmt1和Grb10的影响研究
目的 探索玻璃化冷冻对乳鼠卵巢Dnmt1和Grb10mRNA和蛋白表达的影响.方法 26只出生10d的C57BL/6雌性小鼠,每只乳鼠双侧卵巢均分成新鲜组和玻璃化冷冻组.免疫组织化学法检测Dnmt1蛋白在玻璃化冻融前、后卵巢组织卵泡中的表达变化;通过qRT-PCR检测Dnmt1和Grb10 mRNA在玻璃化冻融前、后卵巢组织中的表达变化;通过Western blotting方法检测Dnmt1和Grb10蛋白在玻璃化冻融前后卵巢组织中的表达变化.结果 Dnmt1在玻璃化冻融前、后的乳鼠卵巢组织各级卵泡的颗粒细胞及卵母细胞胞核表达.与新鲜组相比,玻璃化冷冻组卵巢内Dnmt1蛋白和mRNA表达水平均显著下调(P＜0.05);Grb10蛋白和mRNA表达水平均显著上调(P＜0.05).结论 玻璃化冷冻复苏过程导致卵巢内Dnmt1表达降低,使印记基因Grb10过表达,可能使配子糖代谢性表观遗传信息紊乱的的风险增加.
