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IL-17/Th17细胞在1型糖尿病中的潜在致病作用
胰岛 β 细胞的自身免疫破坏与T细胞的免疫耐受破坏有关,其中辅助性T细胞17型(Th17)细胞是重要的分泌白介素17(IL-17)的促炎性CD4+T细胞亚群.Th17细胞在T1DM病因中起重要作用,指定阻断Th17细胞分化的小分子是T1DM的潜在治疗剂.本文对IL-17/Th17细胞在T1DM中的潜在致病作用进行评述.
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肺炎支原体感染儿童血外周血辅助性T细胞17型和白细胞介素-17变化及其临床意义
目的 探讨外周血辅助性T细胞(Th)17型和白细胞介素(IL)-17在肺炎支原体(MP)急性感染儿童体内变化及其临床意义.方法 选择2009年6月至2010年12月在南通市第一人民医院儿科接受住院治疗并确诊为肺炎支原体肺炎(MPP)的32例患儿为研究对象,并纳入MPP组,平均年龄为(9.3±2.5)岁.将其进一步按照感染症状分为MPP亚组1(普通肺炎症状,n=18)和MPP亚组2(肺炎合并肺外症状,n=14);选择同期于该院门诊行健康体检儿童纳入对照组(n=26)(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象监护人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书).MPP组与对照组、MPP亚组1与MPP亚组2受试者的年龄、性别等比较,差异无统计学意义(P＞0.05).常规分离外周血单核细胞(PBMC),采用流式细胞术(FACS)检测各组外周血Th17;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清细胞因子IL-17水平.结果 ①MPP亚组1与MPP亚组2的外周血Th17频率均高于对照组[(2.05±0.65)％ vs.(1.21±0.36)％,(2.98±0.72)％vs.(1.21±0.36)％;P＜0.01];MPP亚组2外周血Th17频率均高于MPP亚组1[(2.98±0.72)％vs.(2.05±0.65)％,P＜0.01].②MPP亚组1与MPP亚组2血清IL 17水平均高于对照组[(11.62±5.37) pg/mL vs.(6.45±1.62) pg/mL,(17.34±7.45)pg/mL vs.(6.45±1.62)pg/mL;P＜0.01];MPP亚组2血清IL-17水平高于MPP亚组1[(11.62±5.37) pg/mLvs.(17.34±7.45)pg/mL; P＜0.01].结论 MP感染患儿体内Th17频率明显改变,且伴炎症性细胞因子IL-17水平升高,Th17频率异常在MP感染的发病机制中起重要作用.
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重组IL-12表达载体构建及对妊娠期哮喘小鼠气道炎症的调节与免疫应答影响
目的:构建携带IL-12重组基因的真核表达载体,探讨其对妊娠期哮喘小鼠气道炎症的免疫调节作用及其可能机制.方法:PCR扩增mIL-12基因cDNA,利用DNA重组技术将线性化片段定向插入载体pcDNA3.1(+)质粒中,经酶切和测序鉴定,通过脂质体介导瞬时转染P815细胞,观察荧光蛋白在细胞中的表达和定位.以鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立妊娠期哮喘小鼠模型,通过气道内灌注:妊娠期哮喘(AP)+ pcDNA3.1(+)-mIL-12组(AP1组)、单纯哮喘(ANP)+ pcD-NA3.1(+)-mIL-12组(ANP1组)给予50μl pcDNA3.1(+)-mIL-12/脂质体混合液；AP+ pcDNA3.1(+)组(AP2组)、ANP+pcDNA3.1(+)组(ANP2组)给予50μl pcDNA3.1(+)/脂质体混合液；单纯妊娠组(HP组)、阴性对照组(HNP组)给予50μlPBS.于末次激发24小时后,观察肺泡灌洗液(BALF)炎性细胞计数及肺组织HE染色以评价小鼠气道炎症程度；RT-PCR、Western blot鉴定小鼠肺组织匀浆中IL-12蛋白及mRNA表达；流式细胞术检测小鼠脾细胞IL-17+及IFN-γ+分泌水平；ELISA测定小鼠外周血上清中细胞因子含量变化.结果:成功构建重组pcDNA3.1(+)-mIL-12真核表达载体,并在P815细胞中获得高效表达.与HP、HNP组相比,AP1、ANP1组BALF中白细胞总数及Eos,Neu,Lym占细胞总数百分比均显著低于AP2、ANP2组,但高于HP和HNP组,AP1与ANP1组间尤以AP1组降低显著(P＜0.05),且肺组织炎症细胞浸润明显减轻,炎症反应明显轻微.肺组织标本中,AP1、ANP1组IL-12蛋白含量及mRNA表达水平在重组质粒干预后显著高于AP2、ANP2组.脾组织标本中AP1、ANP1组IFN-γ+含量明显升高,而CD4+ IL-17+明显降低(P＜ 0.05)；IFN-γ+与CD4+ IL-17+比例高于AP2、ANP2组(P＜0.05)；此变化趋势AP1组比ANP1组更为明显(P ＜0.05)；HP组IFN-γ+及IL-17+含量变化与HNP组组间差异不显著.外周血上清中细胞因子检测结果AP1、ANP1组IFN-γ明显升高,IL-4、IL-17显著降低(P＜0.05).结论:构建的pcDNA3.1(+)-mIL-12真核表达载体能够在明显改善妊娠期哮喘小鼠气道炎症反应的同时上调IFN-γ表达,使Th2、Th17型细胞分化和增殖功能受抑,证实IL-12表达上调参与了妊娠期哮喘的发生发展.
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约氏疟原虫感染小鼠树突状细胞对Th17分化和功能的调控作用
目的 探讨约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)17XL株(Py17XL)感染小鼠过程中树突状细胞(DCs)对辅助性T细胞17型(Thl7)细胞分化和功能的调控作用及机制. 方法 将12只雌性BALB/c小鼠随机分为感染组(Py17XL)、Toll样受体4(TLR4)阻断组(Py17XL+TLR4)、Toll样受体9(TLR9)阻断组(Py17XL+ TLR9)和TLR4联合TLR9阻断组(Py17XL+ TLR4+ TLR9),每组3只.感染前1d,腹腔注射10μg抗-TLR4单抗(TLR4阻断组)或50 μg抗-TLR9单抗(TLR9阻断组)阻断DCs的功能,注射体积为0.4 ml,对照组注射等量的PBS.4组小鼠均腹腔注射1×106 Py17XL感染的红细胞.感染后第0、3和5天计数红细胞感染率,同时制备脾细胞悬液,流式细胞仪检测脾脏细胞中CD1 1c+ TLR9+和Th17细胞数量变化,ELISA检测脾细胞培养上清中干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-10(IL-10)水平的变化. 结果 流式细胞仪检测表明,DCs阻断模型构建成功.感染后第5天,感染组、TLR4阻断组、TLR9阻断组和TLR4联合TLR9阻断组小鼠原虫血症分别为28.0％、29.0％、31.0％和16.3％;感染后第7天,原虫血症分别为43.3％、47.5％、32.5％和8.0％,感染组和TLR4阻断组小鼠全部死亡,其余阻断组小鼠于感染后第6天开始出现死亡.与感染组比较,TLR9阻断组和TLR4联合TLR9阻断组小鼠原虫血症上升缓慢,生存期明显延长至11 d和15 d.流式细胞仪检测结果显示:感染后第5天,TLR9阻断组和TLR4联合TLR9阻断组Th17细胞数量分别为1.2％和1.4％,与感染组(1.9％)相比,数量明显减少(P＜ 0.05,P＜0.01).ELISA检测结果显示:感染后第5天,TLR4联合TLR9阻断组小鼠IFN-γ和IL-10水平分别为(232.4±15.5) pg/ml和(1 791.2±58.2) pg/ml,与感染组[(90.7±50.1) pg/ml和(962.6±409.0) pg/ml]相比,差异有统计学意义(P＜ 0.05,P＜ 0.01). 结论 Py17XL感染小鼠过程中DCs调控了Thl7细胞的分化和功能.DCs阻断(Py17XL+ TLR4+ TLR9)后,感染小鼠原虫血症降低,生存期延长.
