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模拟肽L-4F对动脉粥样硬化小鼠的保护作用及机制
目的:观察载脂蛋白A-1 (Apo A-1)模拟肽L-4F(L-4F)与辛伐他汀比较对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠动脉粥样硬化及胆固醇流出率的影响,并探讨其可能的机制.方法:研究对象为8周龄雄性Apo E-/-小鼠,分为3组:①动脉粥样硬化组:以单纯高脂饮食；②辛伐他汀组:高脂饮食基础上予辛伐他汀治疗；③L-4F组:高脂饮食基础上予L-4F治疗.在实验第16周末取标本.用自动生化仪测定小鼠血脂水平,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ApoA-1浓度；油红O染色分析主动脉粥样斑块面积；同时用液闪计数仪检测胆固醇流出率；并采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹标记法(Western blot)分析肝脏三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BI)和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G1(ABCG1)mRNA和蛋白表达水平.结果:16周末血脂变化:与动脉粥样硬化组比较,辛伐他汀组血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平明显降低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显升高(P＜0.05～0.01)；而L-4F组较动脉粥样硬化组的ApoA-1水平明显升高(P＜0.05),差异均有统计学意义.胆固醇流出率:L-4F组与辛伐他汀组、动脉粥样硬化组比较胆固醇流出率均增高(P＜0.001),而辛伐他汀组与动脉粥样硬化组相比胆固醇流出率也增高(P＜0.001),差异均有统计学意义.主动脉粥样斑块面积:与动脉粥样硬化组相比,辛伐他汀组、L-4F组斑块面积均明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.001).肝脏3种蛋白的表达:辛伐他汀组较动脉粥样硬化组ABCA1、ABCG1蛋白表达增加(P＜0.001),L-4F组较动脉粥样硬化组ABCA1、SR-BI和ABCG1蛋白表达增加(P＜0.001),差异均有统计学意义.结论:L-4F可能通过上调肝脏ABCA1、SR-BI和ABCG1的mRNA和蛋白表达,促进巨噬细胞胆固醇流出,有效发挥抗动脉粥样硬化作用.
关键词： 动脉粥样硬化 胆固醇流出率 载脂蛋白A-1模拟肽 高密度脂蛋白 -
热休克蛋白65对Jurkat细胞增殖和胆固醇流出的影响
目的 探讨动脉粥样硬化中的重要炎性物质—热休克蛋白65(HSP65)诱导活化的Jurkat细胞发生增殖、免疫活化反应时胆固醇流出率的改变,并揭示其可能的分子机制.方法 Jurkat细胞经刀豆蛋白A(ConA)活化48 h后,与不同浓度HSP65孵育24 h,CCK-8检测细胞增殖能力,ELISA测定上清液中炎症因子干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)含量,液闪计数仪检测Jurkat细胞胆固醇流出率;RT-PCR检测胆固醇相关转运蛋白,包括ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和G1(ABCG1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)的表达.结果 5 mg/L ConA与Jurkat细胞孵育48 h后可显著促进细胞增殖,HSP65呈剂量依赖性促进ConA诱导的Jurkat细胞增殖(P ＜0.001).以0.5、1 mg/L HSP65分别处理Jurkat细胞后,Jurkat细胞胆固醇流出率和IL-10含量均呈浓度依赖性下降,IFN-γ含量则逐渐升高(P＜0.01),细胞ABCA1、ABCG1、SR-B Ⅰ、PPARγ、LXRα的mRNA表达水平呈剂量依赖性降低(P＜0.01).结论 在0.5～1 mg/L浓度范围内,HSP65不仅可促进T细胞增殖、加剧细胞免疫反应,还可引起胆固醇流出率降低,其机制可能与下调胆固醇转运相关蛋白ABCA1、ABCG1、SR-B Ⅰ、PPARγ、LXRα的基因表达相关.
