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单羧酸转运蛋白基因对肿瘤细胞内pH值及生长特性的调节作用
目的 以反义技术抑制肿瘤细胞的单羧酸转运蛋白基因第一亚型(MCT1)表达,观察其对肿瘤细胞内pH值(pHi)调节、乳酸转运及生长性质的影响.方法 (1)应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从人肺癌细胞系A549中扩增MCT1目的 基因片段,将克隆的基因片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN,构建反义表达重组载体pLXSN-MCT1,并对其进行DNA测序验证.(2)通过电穿孔法将pLXSN、重组载体pLXSN-MCT1转染于肺腺癌细胞系A549中,经G418筛选转染细胞阳性克隆.用PCR方法 鉴定pLXSN-MCT1重组载体在基因组的转染整合及表达;以分光光度法测定细胞内pH及乳酸含量变化,并以细胞生长曲线研究细胞的生长情况.结果 (1)对所构建的重组载体进行双酶切电泳分析及DNA序列分析证明反义载体构建成功.(2)与未转染的A549细胞比较,转染MCT1反义表达重组体的细胞pHi降低、乳酸显著升高(P＜0.001);且细胞的生长受到明显抑制.结论 单羧酸转运蛋白MCT1基因在肿瘤细胞pHi调节、乳酸转运及细胞的生长中起着重要的调节作用.
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抑制人肺腺癌细胞MCT1基因的表达对其增殖、凋亡的影响
目的:研究抑制单羧酸转运蛋白第1亚型(MCT1)基因的表达对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法:用电穿孔法将MCT1反义基因表达载体转染进人肺腺癌A549细胞中,以抑制MCT1基因表达.经G418筛选阳性克隆.用PCR,RT-PCR方法鉴定MCT1反义基因与A549基因组的整合;用分光光度法和生物发光法分别测定细胞内pH(intracellular pH,pHi)、乳酸含量和ATP含量.用原位凋亡试剂盒测定细胞凋亡情况,并接种转染MCT1反义基因的细胞和A549细胞于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长.结果:与A549细胞比较,转染MCT1反义基因的细胞pHi降低(P＜0.05)、乳酸显著升高(P＜0.001),ATP含量明显降低(P＜0.05).转染MCT1反义基因的细胞凋亡率明显高于A549细胞(P＜0.01).接种转染MCT1反义基因的细胞移植瘤明显比接种A549细胞的轻且小(P＜0.001).结论:MCT1基因对肿瘤细胞增殖凋亡具有重要的调节作用.
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联合抑制人肺腺癌细胞的MCT1基因及NHE1基因表达对其增殖生长的影响
背景与目的:以往的研究中我们发现,用反义基因分别抑制肿瘤细胞膜上的单羧酸转运蛋白第1亚型(monocarboxylatetransporter-1,MCT1)基因和Na+/H+交换蛋白第1亚型(Na+/H+exchanger-1,NHE1)基因的表达,可使肿瘤细胞内pH(intracellular pH,pHi)降低,细胞酸化死亡.而同时抑制这两种基因的表达,对肿瘤细胞pHi及其增殖生长的影响尚不清楚.方法:用电穿孔法将MCT1基因及NHE1基因相应的反义基因表达载体pLXSN-MCT1和pLXSN-NHE1同时转染于人肺腺癌细胞系A549中,经G418筛选阳性克隆,用PCR及RT-PCR方法鉴定MCT1和NHE1的反义基因与A549基因组的整合.pHi及乳酸含量用分光光度法测定;细胞生长周期用流式细胞仪测定;并将联合转染反义基因的细胞、转染MCT1反义基因的细胞、A549细胞分别接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长.结果:与A549细胞比较,联合转染反义基因的细胞pHi降低、乳酸显著升高(P<0.001),细胞周期阻滞在G0-G1期.接种联合转染反义基因细胞和转染MCT1反义基因细胞的裸鼠移植瘤明显比接种A549细胞的轻且小(P<0.001).结论:MCT1基因和NHE1基因可能通过影响pHi对肿瘤细胞的增殖生长起重要的调节作用.
关键词： 单羧酸转运蛋白基因 Na+/H+交换蛋白基因 肺肿瘤 -
单羧酸转运蛋白反义基因转染人肺腺癌细胞对其生物学特性的影响
目的 研究单羧酸转运蛋白基因第一亚型（MCT1）反义表达载体转染肿瘤细胞对其细胞内pH(pHi)调节、乳酸转运及生长性质的影响。方法 通过电穿孔法将单羧酸转运蛋白MCT1基因反义表达重组子pLXSN-MCT1转染于肺腺癌细胞系A549中，经G418筛选转染细胞阳性克隆。用PCR方法鉴定MCT1反义表达重组载体在基因组的转染整合；以分光光度法测定pHi及乳酸含量变化，并以细胞生长曲线研究细胞的生长情况。结果 与未转染的A549细胞比较，转染MCT1反义表达重组载体的细胞pHi降低、乳酸显著升高（P<0.001）；且细胞的生长受到明显抑制。结论 单羧酸转运蛋白MCT1基因在肿瘤细胞pHi调节、乳酸转运及细胞的生长中起着重要的调节作用。
