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脱氢表雄甾酮对慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活性钾通道的作用
目的研究钾通道开放剂脱氢表雄甾酮(DHEA)对慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活性钾通道(KCa)的作用和缺氧性肺动脉高压的降压作用.方法 50只Wistar大鼠随机分为对照组(A组,10只)和慢性缺氧组(B组),B组又随机分为B1、B2、B3、B4组(每组各10只),B组大鼠均以常压缺氧3周建立大鼠慢性缺氧肺动脉高压模型.采用急性酶分离法分离得到大鼠肺动脉平滑肌细胞(SMCs).应用膜片钳技术,在对称性高钾溶液中,于急性分离的大鼠肺动脉平滑肌细胞的内面向外式膜片(inside-out patch)上,分离出KCa电流.比较A组和B1组KCa电流活性;观察DHEA对B1组KCa通道电流的激活作用.应用右心插管技术,测定给药前后B2、B3、B4组大鼠平均肺动脉压(mPAP)和平均体动脉压(mSAP)等血流动力学指标.结果 B组大鼠肺动脉平滑肌细胞KCa活性比A组大鼠显著降低(P＜0.01).DHEA可明显激活慢性缺氧所抑制的B1组大鼠肺动脉平滑肌细胞的KCa电流.给缺氧大鼠静脉注射DHEA可明显降低其mPAP(P＜0.01),而对mSAP无明显作用(P＞0.05).结论缺氧对KCa通道的抑制作用在缺氧3周大鼠缺氧性肺动脉高压发病中起着重要作用;DHEA可直接激活KCa活性而拮抗慢性缺氧对KCa的抑制作用;DHEA对大鼠慢性缺氧性肺动脉高压可产生明显的降压作用而对体动脉压影响小.
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中电导钙激活性钾通道在人多发性骨髓瘤细胞增殖中的作用
目的 探讨中电导钙激活性钾通道(intermediate-conductance Ca2+-activated K+channels,IKCa1)在人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞增殖中的作用.方法 通过台盼蓝拒染法检测IKCa1阻滞剂CLO对MM细胞株RPMI 8226和U266生存活力的影响,应用流式细胞仪检测CLO作用于RPMI 8226和U266细胞后细胞周期分布及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)变化.结果 CLO以浓度依赖方式显著抑制RPMI 8226和U266细胞生长,10 μmoL/L CLO作用48 h后,RPMI 8226细胞和U266细胞周期明显被阻滞于G0/G1期,S期显著减少.10 μmol/L CLO作用1min后,RPMI 8226和U266细胞内Fluo-3/AM荧光强分别为(448.3 ±32.8)和(675.9 ±45.8),分别与对照组(56.5±7.2)和(31.8±4.5)相比具有显著差异(P＜0.05).结论 钙激活性钾通道阻断剂克霉唑抑制MM细胞增殖,其机制可能与CLO通过调节细胞内钙水平引起细胞周期阻滞于G0/G1期有关.
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脱氢表雄甾酮对COPD大鼠支气管平滑肌细胞钙激活性钾通道的激活作用
目的:对比研究正常及慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠支气管平滑肌细胞钙激活性钾(KCa)通道的活性,观察脱氢表雄甾酮(DHEA)对COPD大鼠支气管平滑肌细胞KCa通道的作用.方法:38只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=20)和COPD组(n=18),在相对密闭舱内吸入纸烟建立COPD动物模型,采用急性酶分离法分离大鼠支气管平滑肌细胞,应用膜片钳技术,在对称性高钾溶液中,于急性分离的大鼠支气管平滑肌细胞的内面向外式膜片上,分离出KCa电流,比较COPD和对照组的活性,记录DHEA对COPD大鼠支气管平滑肌细胞膜KCa通道活性的激活作用.结果:COPD组KCa活性明显比正常组低(P<0.01),DHEA可明显激活COPD组大鼠支气管平滑肌的KCa电流(P<0.01).结论:COPD大鼠支气管平滑肌细胞KCa通道活性降低可能在COPD发病机制中起着一定作用,DHEA可以直接激活COPD大鼠支气管平滑肌KCa活性,松驰COPD大鼠支气管平滑肌.
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钙激活性钾通道在缓激肽选择性开放血脑肿瘤屏障中的作用
目的探讨钙激活性钾通道(KCa)在缓激肽(bradykinin,BK)选择性开放血脑肿瘤屏障(blood-brain tumor barrier,BTB)中的作用.方法建立脑胶质瘤大鼠模型,颈内动脉灌注BK后采用免疫组化ABC法和Western blot法测定肿瘤组织KCa通道蛋白的分布和含量的变化,以t检验进行统计分析.结果脑胶质瘤大鼠模型经颈内动脉灌注BK后,其肿瘤内血管内皮细胞的KCa通道蛋白增加,且以灌注后10 min增加为显著.结论KCa通道的表达增多是BK选择性开放BTB机制中的一个重要环节.
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11,12-表氧化二十碳三烯酸对COPD大鼠气道平滑肌细胞钙激活性钾通道的作用
目的 观察COPD大鼠气道平滑肌细胞(ASMCa)的钙激活性钾通道(KCs>)的活性变化,以及11,12-表氧化二十碳三烯酸(11,12-EETs)对气道平滑肌细胞KCa的作用.方法 40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组和COPD组,每组20只.在相对密闭舱内吸入纸烟建立COPD动物模型,采用急性酶分离法分离大鼠ASMCs,应用膜片钳技术,分离出KCa电流,测定KCa开放概率(Po)、平均开放时间(To)和平均关闭时间(To).比较COPD组和正常对照组KCa上述活性指标的变化,以及应用3μmol/L的11,12-EETs对COPD组ASMCs细胞进行灌流后KCa活性的变化.结果 与正常对照组比较,COPD组ASMCs的KCa通道Po明显降低(0.084±0.028比0.198±0.029,P<0.01),To显著缩短[(0.732±0.058)ms比(1.648±0.152)ms,P<0.01],Tc显著延长[(12.259±2.612)ms比(6.753±1.237)ms,P<0.01].而用11,12-EETs灌流ASMCs细胞后可明显激活KCa活性,Po增加(0.227±0.059比0.084±0.028,P<0.01),To延长[(2.068±0.064)ms比(0.732±0.058)ms,P<0.01],Tc缩短[(4.273±0.978)ms比(12.259±2.612)ms,P<0.01].结论 COPD大鼠ASMCs细胞KCa通道活性降低可能在COPD发病机制中起着一定作用,11,12-EETs可以直接激活COPD大鼠ASMCs细胞KCa活性,提高膜电位稳定性,从而松弛COPD大鼠气道平滑肌.
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甘氨脱氧胆酸对肝细胞钙激活性钾通道的影响
目的观察甘氨脱氧胆酸(GDC)对大鼠肝细胞钙激活性钾通道(KCa)开放概率的影响.方法体外培养大鼠肝细胞,以GDC为处理因素,应用膜片钳技术通过贴附式和内面向外式膜片测定大鼠KCa开放概率.结果①细胞贴附式膜片下,浴液中Ca2+浓度10-7mol/L,GDC终浓度为50,100,250μmol/L时,概率由0.038±0.09分别增加到0.620±0.338,0.591±0.163,0.895±0.176(n=4,P均＜0.01).浴液中不加GDC,改变Ca2+浓度(10-7、10-6、10-5mol/L),KCa的开放概率并不发生明显改变,而在此液中加入GDC(终浓度100μmol/L),KCa开放概率由0.042±0.015增加到0.385±0.330和0.551±0.163(n=4,P均＜0.05).浴液中不含Ca2+,并加入EGTA,GDC浓度为50,100,250μmol/L,KCa开放概率显著增加(n=4,P均＜0.05),但比浴液中有Ca2+时增加程度小.②内面向外式膜片下,浴液中无Ca2+,加入GDC(10,50,100,250μmol/L),KCa开放概率无明显改变(n=2,P＞0.05).结论①GDC对KCa有明显的激活作用,并有浓度依赖性.②GDC既有引起胞外Ca2+内流,也能诱导内贮Ca2+的释放.③GDC对KCa的激活是通过Ca2+实现的.
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钙激活性钾通道是人小肠上皮细胞的容积调节性通道
目的: 研究细胞容积调节机制,探讨人类小肠上皮细胞调节性容积减小(RVD)过程中离子通道的作用及其种类. 方法: 膜片钳全细胞记录和单通道记录法记录培养的人类小肠上皮细胞RVD 过程中电流的变化,细胞容积测定法观察RVD 过程中特异性钙激活性钾通道阻断剂(clotrimazole) 的作用.结果:全细胞记录法证实细胞RVD过程中K+ 通道和Cl- 通道电流同时被激活,该K+ 通道电流具有明显的钙依赖性并可被clotrimazole阻断.单通道记录法进一步证实RVD过程中激活的K+ 通道为Intermediate-conductance 钙激活性钾通道.结论:人类小肠上皮细胞在低渗溶液作用下具有RVD过程,钙激活性钾通道在RVD过程中具有十分重要的作用.
关键词： 全细胞记录 单通道记录 钙激活性钾通道 调节性容积减小(RVD)
