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长链非编码RNA Dancr在糖异生相关模型中的表达规律以及与糖异生的可能调控关系
目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)Dancr在肝脏中的时空表达规律,探索其与糖异生的可能调控关系与分子机制.方法 建立小鼠饥饿-再喂养模型、高脂饮食诱导的肥胖(high-fat diet,HFD)模型,并以磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、葡萄糖-6-磷酸酶为阳性对照,检测Dancr在两组模型小鼠肝脏中的表达;分离小鼠主要脏器组织,检测不同组织中Dancr的表达量;运用NCBI、UCSC、RegRNA、TargetScan等数据库,分析Dancr的序列特征,预测与其相互作用的miRNA,并对miRNA下游靶基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书分析.采用Student-t检验分析各组之间差异的显著性,采用单因素方差分析比较多组间差异.结果 Dancr的表达量随饥饿进程持续升高,并在16 h达到高,再进食后迅速恢复正常水平(4.20±0.27比1.00±0.23,t=22.10,P<0.01).在HFD小鼠肝脏中Dancr表达量同样显著升高(1.69±0.30比1.00±0.25,t=4.33,P<0.01).Dancr在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、骨骼肌、小肠、胃、白色脂肪组织、棕色脂肪组织和脑组织中表达差异有统计学意义(F=180.32,均P<0.01),Dancr在肝脏中的表达量显著高于除脾、肺外的其余组织(t=6.03～36.19,均P<0.01).在线分析Dancr位于chr5:74,093,083-74,090,355,全长1060 bp,由2个外显子构成,可能存在9个与之相互作用的miRNAs(mmu-let-7i-5p、mmu-miR-134-5p、mmu-miR-326-5p、mmu-miR-433-5p、mmu-miR-497-5p、mmu-miR-504-3p、mmu-miR-1906、mmu-miR-432、mmu-miR-5620-5p),调节下游2124个靶基因,其中多条基因与糖异生调控相关.结论 Dancr的表达受生理及病理性糖异生信号影响,可能介导肝脏糖异生的调控,且生物信息学分析为后续实验提供了一定的数据支持,有助于我们进一步了解Dancr在糖异生调控中的分子机制.
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长链非编码RNA DANCR促进滑膜间充质干细胞向软骨细胞的增殖与分化
背景:多项研究表明,长链非编码RNA DANCR可通过Wnt/β-catenin信号通路在多种病理生理过程中发挥重要作用.目的:探究长链非编码RNA DANCR在滑膜间充质干细胞向软骨细胞增殖与分化过程中的作用.方法:取第3代人滑膜间充质干细胞,分别以pcDNA3.1-GP质粒和pcDNA3.1-GP(DANCR Homo)质粒转染滑膜间充质干细胞,分别设为对照组和实验组,培养7 d内,检测两组细胞增殖曲线;培养14 d后,组织学观察两组细胞成软骨能力;qRT-PCR检测两组成软骨分化后细胞的软骨特异性基因表达.结果与结论:①细胞增殖曲线:两组细胞增殖曲线大致呈"S"型,一二天内细胞处于相对停滞期,从第3天开始细胞进入快速增殖时期,实验组细胞增殖速度明显快于对照组;②组织学观察:两组细胞外基质均呈蓝色,符合软骨细胞特征,实验组细胞外基质蓝染强于对照组;③qRT-PCR检测:成软骨诱导14 d后,实验组软骨特异性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖、Sox9基因表达显著高于对照组(P<0.05);④结果表明:长链非编码RNA DANCR可促进滑膜间充质干细胞向软骨细胞的增殖与分化,并加强软骨特异性基因的表达.
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长链非编码 RNA DANCR 促滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化作用的研究进展
长链非编码RNA（ long non-coding RNA， lncRNA）是一类转录本长度大于200 nt，不具有翻译成蛋白质能力的RNA。 lncRNA DANCR是一种近年来在肝细胞癌中发现的特异性高表达的长链非编码RNA，具有高度调控细胞分化的作用。新研究表明， lncRNA DANCR在关节软骨损伤修复中也起着重要的调控作用，并有望成为促进滑膜间充质干细胞（ synovi-um-derived mesenchymal stem cells，SMSCs）向软骨细胞增殖和分化的关键调控位点。文中就近年来DANCR促进SMSCs向软骨细胞增殖和分化过程中的作用及未来可能的研究热点进行综述。
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应用双靶标CRISPR慢病毒载体在间充质干细胞中稳定敲除lncRNA DANCR基因
[目的]应用CRISPR/Cas9方法,构建特异性靶向长链非编码RNA DANCR基因两端的双靶标慢病毒载体,稳定敲除间充质干细胞(MSC)中的DANCR基因,为研究DANCR的生物学功能奠定基础.[方法]首先设计靶向DANCR的5'和3'端的sgRNA (single-guide RNA),转染293FT细胞,提取293FT细胞基因组DNA,验证靶向序列的有效性.然后通过gateway和酶切连接的方法,将分别靶向5'和3'端的两条有效sgRNA序列连接至同一慢病毒CRISPR载体.终使用293FT进行慢病毒包装,收获病毒感染MSC,检测MSC中DANCR敲除效率.[结果]在证明靶向DANCR基因两端的sgRNA序列均单独有效的基础上,将靶向5'和3'端的sgRNA进行组合,成功构建靶向DANCR的双靶标慢病毒载体.将载体进行慢病毒包装后感染MSC,成功获得DANCR敲除的MSC.[结论]应用CRISPR方法成功构建敲除DANCR的慢病毒载体,能高效稳定地敲除MSC中的DANCR基因.
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DANCR在不同子宫内膜病变组织中的表达及意义
目的:探讨在子宫内膜癌和子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织中DANCR的表达及意义.方法:收集2016年手术切除的子宫内膜癌组织55例、正常子宫内膜标本30例以及子宫内膜非典型增生组织7例,运用实时PCR技术分别检测DANCR在不同子宫内膜病变组织中的表达情况,并分析其与临床病理参数以及预后的关系.结果:子宫内膜癌组织中DANCR的表达水平高于子宫内膜非典型增生及正常子宫内膜组织,3组间差异有统计学意义(P＜0.05),并且在正常子宫内膜组织、子宫内膜非典型增生以及子宫内膜癌中呈逐渐上升趋势;DANCR在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达高于Ⅱ型子宫内膜癌,差异具有统计学意义(P＜0.05);结论:DANCR在子宫内膜癌中显著性高表达,可能与子宫内膜癌的发展有关;DANCR可能对子宫内膜癌病理分型有标志性的意义.
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长链非编码RNA DANCR在关节软骨损伤修复中作用机制的研究进展
长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200个核苷酸但缺乏蛋白质编码功能的RNA,在许多细胞生物过程中发挥重要的调控作用.关节软骨损伤修复一直是关节外科的热点与难点.近研究表明lncRNA DANCR在间充质干细胞(MSCs)向软骨细胞分化和增殖过程中发挥重要作用.lncRNA DANCR可能通过断裂为miRNA、结合或竞争mR?NA/miRNA、增加胞质内β?catenin等途径发挥促软骨损伤修复作用.本文就lncRNA DANCR的结构、功能及在关节软骨损伤修复过程中的可能作用机制作一综述.
