首页 > 文献资料
-
自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2构象表位多肽研究1型糖尿病B和T淋巴细胞交流途径
目的研究T细胞与胰岛素瘤相关蛋白2（IA-2）构象限制性表位之间的相互作用，比较IA-2表位空间构象和氨基酸一级序列在B-T细胞相互作用中所起作用的差别。方法设计合成四种IA-2843-855表位多肽，分别为β折叠结构的野生亲本多肽、改变氨基酸排列顺序得到的α螺旋结构（构象变异性）、改变氨基酸排列顺序得到的无规则卷曲结构（无序结构型）以及通过引入3个疏水氨基酸得到的更具有β折叠结构的多肽（序列变异型），选取IA-2抗体阳性的1型糖尿病（T1DM）、2型糖尿病（T2DM）患者各12例及健康志愿者12名为研究对象，采取外周血单个核细胞并给予四种不同结构IA-2843-855刺激，分别计算各组的刺激指数（SI）及各组细胞被刺激后分泌细胞因子白细胞介素（IL）4及IL-2的水平，组间比较采用t检验。结果与T2DM组比较，IA-2843-855多肽、α螺旋结构、无规则卷曲结构、更具β折叠结构的刺激指数在T1DM组升高，差异均有统计学意义（分别为1.33±0.05比1.13±0.06，1.27±0.06比1.19±0.05，1.31±0.07比1.21±0.05，1.20±0.07比1.11±0.05，t=-11.60~-2.71，均P<0.05），T1DM组与健康对照组相比较亦升高，差异亦有统计学意义（t=-12.60~-2.12，均P<0.05）；四种多肽刺激T1DM组T淋巴细胞分泌IL-4水平较T2DM组及健康对照组均降低，差异均有统计学意义（t=2.43~11.75，均P<0.05）；同时这四种多肽刺激T1DM组T淋巴细胞分泌IL-2水平与T2DM组及健康对照组比较均升高，差异均有统计学意义（t=-7.20~-2.14，均P<0.05）；序列变异型多肽对T1DM组淋巴细胞的增殖影响与其他三组比较均有所下降(t=2.41~3.72，均P<0.05），刺激T细胞分泌细胞因子IL-2与其他三组比较均有所下降(t=2.09~4.91，均P<0.05），刺激T细胞分泌细胞因子IL-4的水平与其他三种多肽相比较均有所升高(t=-11.9~-6.09，均P<0.05），差异有统计学意义。结论四种不同空间构象的多肽，均可与T1DM患者B细胞受体特异性结合从而提呈至T细胞发挥作用，但更具β折叠结构的序列变异型多肽与野生亲本多肽作用存在差异，提示氨基酸一级序列可能在B-T细胞相互作用中起主要作用。
-
葡萄糖及细胞因子对胰岛素瘤相关蛋白-2表达水平的影响
目的探讨葡萄糖、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ对胰岛细胞自身抗原胰岛素瘤相关蛋白(IA)-2表达水平及胰岛素分泌水平的影响.方法以不同浓度的葡萄糖(3、7、11、30 mmol/L)、10 ng/mlIFN-γ及100ng/ml TNF-α分别刺激胰岛细胞系RIN5F 24 h和48 h,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组RINSF细胞中IA-2的mRNA表达水平,并用放射免疫法检测上清中胰岛素的浓度.结果RT-PCR结果显示以不同浓度葡萄糖(3、7、11、30 mmol/L)分别刺激RIN5F细胞系后IA-2 mRNA水平呈浓度依赖性和时间依赖性增加;TNF-α可抑制IA-2 mRNA的水平,并且作用48 h后IA-2表达水平显著降低(P＜0.05);IFN-γ作用24 h及48 h均可显著抑制IA-2的表达(P＜0.05).TNF-α或IFN-γ刺激RINSF细胞系后,上清中胰岛素水平均较基础值降低,并且作用48 h后差异有统计学意义(P＜0.05).结论葡萄糖可使IA-2的mRNA水平呈剂量依赖性和时间依赖性增加,TNF-α、IFN-γ可抑制IA-2的mRNA表达和胰岛素分泌浓度.
-
葡萄糖、促炎症因子和生长因子影响胰岛自身抗原的表达
目的:探讨葡萄糖、细胞因子TNF-α,IFN-γ和生长因子IGF-1,EGF,FGF对胰岛细胞自身抗原IA-2表达水平及胰岛功能的影响.方法:以不同浓度的葡萄糖(3,7,11和30 mmol/L)、IFN-γ(10 ng/ml)、TNF-α(100ng/ml)及IGF-1,EFG,FGF-10(10ng/ml),分别刺激胰岛细胞系RIN5F 24 h和48 h,用RT-PCR方法检测各组BIN5F细胞中IA-2的mRNA表达水平,用放射免疫法检测上清中胰岛素的浓度,3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物(MTS)法检测细胞生长速率.结果:RT-PCR结果显示以不同浓度葡萄糖(3,7,11和30 mmol/L)分别刺激RIN5F细胞系后,IA-2 mRNA水平呈浓度依赖性和时间依赖性增加;TNF-α、IFN-γ可抑制IA-2 mRNA的水平(P＜0.05),IGF-1、FGF使IA2的表达增加(P＜0.05).TNF-α或IFN-γ刺激RIN5F细胞系后,上清中胰岛素水平均较基础值降低,并且作用48h后差异有显著性(P＜0.05).IGF-1,bFGF作用于RIN5F细胞系48 h,上清中胰岛素较基础值显著增加(P＜0.05).MTS结果显示IGF-1使胰岛细胞增殖速率显著增加(P＜0.01).结论:葡萄糖、TNF-α、IFN-γ和一些生长因子可改变胰岛自身抗原的表达,参与1型糖尿病的发病.
