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肝X受体激动剂可改善间充质干细胞移植治疗小鼠急性心肌梗死的疗效
目的 探讨肝X受体(LXR)激动剂对脂肪来源的间充质干细胞移植治疗小鼠急性心肌梗死(MI)的影响.方法 酶消化法分离出稳定表达报告基因萤火虫荧光素酶( firefly luciferase,Fluc)小鼠的脂肪间充质干细胞(AD-MSCFluc+),流式细胞术检测CD90、CD44、CD34、CD45等细胞表面标志物.雄性近交系小鼠(无报告基因表达)随机分成以下4组(每组10只):(1)假手术组；(2)MI+ PBS组；(3)MI+ AD-MSCFluc-组；(4) MI+ AD-MSCFluc++ LXR激动剂(T0901317)干预组,每组分别进行相应的干预.生物发光成像( BLI)检测移植后AD-MSC的存活情况,小动物超声检查评价小鼠心脏功能.结果 流式细胞术结果显示脂肪间充质干细胞CD44、CD90阳性,CD34、CD45阴性.光学成像结果显示AD-MSCFluc+的光学信号强度与细胞数量呈正相关(r2=0.98).术后在体生物发光成像结果显示术后第7、14、21、28天MI+ AD-MSCFluc++T0901317组BLI信号强度依次为(1.60±0.11)×105、(0.93 ±0.08)×105、(0.55±0.07)×105和(0.27±0.05) ×105 p· s-1· cm-2·sr-1,MI+AD-MSCFluc+组的BLI信号强度依次为(1.28±0.08)×105、(0.56±0.07)×105、(0.25±0.05)×105和(0.05±0.03) ×105 p·s-1·cm-2·sr-1,MI+ AD-MSCFluc++ T0901317组BLI信号强度明显强于MI+ AD-MSCFluc+组相同时间点(P均＜0.05).小动物超声检测结果显示术后第28天,MI+ PBS组、MI+ AD-MSCFluc+组和MI+ AD-MSCFluc++T0901317组小鼠LVEF依次为(27.87±1.81)％、(30.33±1.06)％和(40.49 ±1.31)％,FS依次为(16.54±0.83)％、(17.83±1.01)％和(25.24 ±0.99)％,MI+AD-MSCFluc++ T0901317组小鼠LVEF和FS均明显高于其他两组(P均＜0.05).结论 LXR激动剂T0901317可提高移植到小鼠梗死心肌的AD-MSCFluc+的存活率,并能明显改善心功能.
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LXR异常激活上调p27蛋白致胰岛β细胞周期阻滞
目的 探讨肝X受体(liver X receptors,LXR)激动剂对小鼠胰岛β细胞系MIN6的作用.方法 LXR激动剂T0901317作用于MIN6细胞后,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量RT-PCR法检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)和p27 mRNA的表达水平;western blot检测Skp2和p27蛋白的表达情况.结果 与control组相比,1、5和10 μmol/L药物处理后的细胞存活率分别为(98.54±0.94)％、(87.03±0.93)％和(75.57±1.85)％,各组间差异有统计学意义(F=301.90,P＜0.01).与control组G1期(35.93±2.25)％和S期(52.87±1.19)％相比,1、5和10 μmol/L药物处理组G1期细胞比例分别为(38.45±0.91)％、(45.46±1.34)％和(53.28±1.14)％,差异有统计学意义(F=80.83,P＜0.01).S期细胞比例分别为(48.65±0.85)％、(36.31±1.37)％和(31.45±1.22)％,差异有统计学意义(F =221.30,P＜0.01).10 μmol/LT0901317处理组p27蛋白表达水平(2.84±0.14)明显高于control组(2.28±0.10),差异有统计学意义(t=4.54,P＜0.05).但两组间p27 mRNA水平差异无统计学意义(t=0.28,P＞0.05).10 μmol/L T0901317下调Skp2 mRNA(0.52±0.02,t=29.22,P＜0.01)和蛋白质水平(相对灰度值为0.98±0.12,control组为1.89±0.01,t=10.98,P＜0.01).以对照组(100％)为参照,转染组、药物处理组和干扰组的细胞存活率分别为(100.97±1.08)％、(75.03±1.83)％和(86.67±2.45)％,与对照组比较,转染组间差异无统计学意义(t =1.542,P＞0.05),药物处理组细胞活力下降(t=23.58,P＜0.01);药物处理组和干扰组间差异亦有统计学意义(t =7.77,P＜0.01).结论 LXR异常激活可导致胰岛β细胞增殖抑制,p27蛋白表达量增加,其机制可能为降解调控p27蛋白的Skp2 mRNA和蛋白质表达水平下降.
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肝X受体激动剂对EGFR下游通路的抑制作用?
表皮生长因子受体?酪氨酸激酶抑制剂（ EGFR?TKI）是目前应用广泛的肺癌靶向药物，但几乎所有治疗有效的患者终都会对EGFR?TKI产生继发耐药，耐药机制主要为EGFR下游通路被再度激活。肝X受体（ LXR）属于核受体家族，多项研究表明LXR激动剂对EGFR重要的下游通路PI3K／AKT／NF?κB多个主要环节均有不同程度的抑制作用。因此， LXR激动剂可能是逆转EGFR?TKI继发耐药的新选择。本文主要对近年来LXR激动剂对PI3K／AKT／NF?κB通路的抑制作用进行综述。
关键词： 肺癌 表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂 耐药 肝X受体激动剂 逆转耐药 -
肝X受体激动剂TO -901317对急性肺损伤炎症 反应中NF - κB信号通路的影响
目的 探讨肝X受体激动剂TO-901317在大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中对NF - κB信号通路中可能的调控作用.方法 将60只雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、赋形剂组、TO-901317组.用肝X受体激动剂TO-901317和赋形剂灌胃一周后,LPS尾静脉注射赋形剂组和激动剂组复制大鼠ALI模型,对照组注射等量生理盐水.分别在LPS处理1、2、4、8h后处死大鼠.观察肺组织病理形态学的改变,测定动脉血气和肺组织W/D值以及支气管肺泡灌洗液NF - κB蛋白含量.结果 与赋形剂组小鼠相比,TO-901317组大鼠肺组织病理改变明显减轻；W/D均明显降低；动脉血氧分压(PaO2)均显著升高；支气管肺泡灌洗液NF -κB蛋白含量明显降低.结论 肝X受体激动剂TO-901317能抑制NF-κB信号传导通路,从而减轻ALI.
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肝X受体激动剂对 RAW264.7细胞摄取Ac-LDL能力的影响
目的:研究肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯(MHEC)和T-0901317对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)能力的影响.方法:以5×105/孔培养的RAW264.7细胞为巨噬细胞模型,实验分为5组:①空白对照组;②MHEC组;③MHEC+9-顺式视黄酸(9-cRA)组;④T-0901317组;⑤T-0901317+9-cRA组.药物终浓度均为10 μmol·L-1,作用24h,用Dil荧光标记的Ac-LDL(Dil-Ac-LDL,10 mg·L-1)孵育RAW 264.7细胞4 h,应用流式细胞仪检测RAW 264.7细胞的荧光强度.结果:MHEC和T-0901317均可抑制RAW264.7细胞对Ac-LDL的摄取.维甲酸X受体(RXR)激动剂9-cRA与T-0901317联合作用时,RAW 264.7细胞对Ac-LDL的摄取受到更明显的抑制.结论:肝X受体激动剂MHEC和T-0901317均可抑制巨噬细胞对Ac-LDL的摄取.
关键词： 肝X受体激动剂 RAW264.7细胞 低密度脂蛋白 -
肝X受体激动剂对RAW 264.7细胞ABCA1蛋白表达和TNF-α、IL-6产生和分泌的影响
目的:研究肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和(MHEC)T-0901317对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达和TNF-α、IL-6产生和分泌的影响.方法:应用免疫细胞化学染色法检测RAW264.7细胞ABCA1蛋白表达的影响;应用夹心法ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6的浓度,分析肝X受体激动剂对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞TNF-α、IL-6产生和分泌的影响.结果:3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317均可显著促进RAW264.7细胞ABCA1蛋白的表达;与维甲酸X受体激动剂9-顺式视黄酸联合作用时,ABCA1蛋白表达增加更为显著.氧化低密度脂蛋白可促进RAW264.7细胞TNF-α、IL-6的产生和分泌,而这一促进作用可部分地被3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317所抑制.结论:肝X受体激动剂MHEC和T-0901317均可上调RAW264.7细胞ABCA1蛋白表达,并可减少氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞中TNF-α、IL-6的产生和分泌.
关键词： 肝X受体激动剂 巨噬细胞 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 TNF-α IL-6 -
T0901317对apoE基因敲除小鼠肝脂质蓄积及肝固醇调节元件结合蛋白-1c表达的影响
目的 本文研究肝X受体(LXR)激动剂T0901317对apoE基因敲除小鼠肝脏脂质蓄积及肝脏固醇调节元件结合蛋白1-c(SREBP-1c)表达的影响.方法 52只雄性apoE基因敲除小鼠被随机分成4组:基础组(n=10)对照组(n=14)、LXR激动剂治疗组(n=14)、d.LXR激动剂预防组(n=14).各组小鼠均被给予高脂/高胆固醇饲料喂养;基础组小鼠被赋形剂灌胃处理8周;对照组小鼠被赋形剂灌胃处理14周;LXR激动剂治疗组小鼠在前8周被赋形剂灌胃处理,后6周被19901317灌胃处理:LXR激动剂预防组小鼠被T0901317灌胃处理14周.使用HE和油红O染色方法观察小鼠肝脏脂质蓄积情况:采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法分别检测肝脏SREBP-1c mRNA和蛋白质的表达.结果 实验结果显示LXR激动剂治疗组和预防组小鼠肝脏脂质滴较对照组明显增多,组织结构排列逐渐紊乱(P＜0.05);LXR激动剂治疗组和预防组小鼠肝脏SREBP-1c mRNA和蛋白质表达上调(P＜0.05).结论 LXR激动剂T0901317能增加高脂高胆固醇饲料喂养的apoE基因敲除小鼠肝脏脂质蓄积并上调SREBP-1c表达.
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肝X受体激动剂T0901317对小鼠肺上皮细胞衰老的影响
目的 探讨肝X受体(LXRs)激动剂T0901317对TNF-β1诱导的小鼠肺上皮细胞衰老相关基因表达的影响.方法 将培养的MLE-12细胞分为A组(MLE12+ PBS)、B组(MLE-12+ 10 ng/mL TGF-β1)、C组(MLE-12+100 nMT0901317)、D组(MLE-12+10 ng/mL TGF-β1+100 nM T0901317).流式细胞术检测各组细胞端粒长度、细胞周期及ROS;RT-qPCR检测LXRα、LXRβ、p-16、p-21、ABCA1、ABCG1、SREBP-1的mRNA表达情况;Western-blot检测LXRα、LXRβ、p-16、p-21、ABCA1、ABCG1、SREBP-1的蛋白表达情况.结果 端粒酶长度流式测定结果显示,与A组比较,B组、D组的荧光强度减弱,D组荧光强度较B组增强(P＜0.05);细胞周期结果显示,与A组比较,B组细胞的G0/G1期比例增加,G2期比例减少,与B组比较,D组细胞的G0/G1期比例降低,G2期比例增加(P均＜0.05);DCFH-DA荧光探针流式检测结果显示,与A组比较,B组、D组产生的ROS含量增加,D组较B组减少(P＜0.05);RT-qPCR检测结果显示,与A组比较,p21和p16mRNA在B组表达显著升高,LXRα、LXRβ、ABCA1、ABCG1、SREBP-1 mRNA表达均降低(P均＜0.05);LXRα和LXRβ mRNA在C组表达较A组显著升高(P＜0.05);Western-blot检测结果显示,与A组比较,p21和p16蛋白在B组表达显著升高,LXRα、LXRβ、ABCA1、ABCG1、SREBP-1的蛋白表达均降低(P＜0.05);LXRα和LXRβ蛋白在C组表达较A组显著升高(P＜0.05).结论 T0901317可活化LXRs,抑制上皮细胞衰老基因的表达,明显减少端粒长度缩短,延缓衰老.
