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三维细胞培养条件下膀胱肿瘤细胞能量代谢的初步探讨
目的 研究膀胱肿瘤细胞能量代谢的变化.方法 应用微流控芯片三维立体培养技术建立成纤维细胞及膀胱肿瘤细胞共培养体系,通过免疫荧光染色方法观察线粒体代谢情况.结果 实验组膀胱肿瘤细胞线粒体代谢较对照组活跃,对照组成纤维细胞线粒体代谢较实验组活跃.结论 膀胱肿瘤细胞的能量代谢并不完全是“瓦伯格”效应所认为的“即便在氧供充足的条件下肿瘤仍以糖酵解的方式功能”,膀胱肿瘤能量代谢也有高效氧化磷酸化的过程,同时也有肿瘤相关细胞有着密切联系,现在有假说认为肿瘤能量代谢是通过诱导毗邻的间质细胞进行糖酵解,引起再循环营养素生成增多.这些高能的代谢产物通过定向转运转移到毗邻的肿瘤细胞并进入三羧酸循环,致使氧化磷酸化增加和足量的ATP生成,从而构成代谢耦联.我们仍需要大量的实验进一步验证并得出更为正确的结论.
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两种体外培养条件下肺腺癌A549细胞生物学特性的变化
目的比较体外肺腺癌A549细胞在平面及立体培养条件下细胞周期、细胞凋亡及对化疗药物敏感性的变化.方法采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法,进行肺腺癌A549细胞体外立体培养,并通过流式细胞技术、原位细胞凋亡检测试剂盒、四唑盐(MTT)比色法及血球计数器计数法比较两种培养条件下肺腺癌A549细胞在细胞周期、细胞凋亡及对阿霉素(ADM)敏感性方面的差异.结果通过倒置显微镜、电镜观察及照相,确定了体外三维立体培养模型的建立;同平面培养比较,立体培养细胞存在细胞周期中G1期阻滞现象、细胞凋亡率低,对阿霉素的敏感性低的特征.结论腺癌A549细胞在两种体外培养条件下生物学特性存在明显差异,三维立体细胞培养模型更接近实体瘤的体内实际情况.
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诱导型一氧化氮合酶抑制剂与软骨修复的研究进展
随着社会的老龄化，关节软骨的损伤和退变日益成为骨科普遍、重要的问题，而关节软骨的自我修复作用非常有限。因此，怎样促进关节软骨修复重建一直是骨科工作者不断追求，渴望解决的难题。然而，无论是自体或异体软骨移植、软骨膜或骨膜移植、软骨细胞移植，还是三维立体细胞培养及组织工程技术的应用，都仅能在早期生成透明和类透明软骨组织，且随后不可避免会发生退变[1]。而这些再生的软骨组织，无论是其结构、生物化学或者生物力学特性都与正常透明软骨不同[2]。因此怎样提高再生软骨质量和防止其发生退变就成为亟待解决的问题。自1993年Stefanovic阐述一氧化氮(nitricoxide，NO)在关节软骨损伤退变中的作用以来，一系列研究证实诱导型一氧化氮合酶抑制剂的应用有助于炎性软骨代谢的恢复。一、生物学特性目前，已经确定的一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)有神经元型(neuronalNOS,nNOS)、内皮型(endothelialNOS,eNOS)和诱导型(inducibleNOS，iNOS)三种，它们作用于精氨酸生成NO而发挥生物学效应。iNOS在正常软骨组织中没有表达，但细胞因子如白介素1，γ－干扰素，肿瘤坏死因子和细菌脂多糖均能刺激iNOS的表达，一旦iNOS蛋白合成，它的活性是非Ca2＋依赖性的，可持续表达，使NO水平升高，并可协同各种细胞因子增加软骨损害[3]。而NO可通过抑制多种与线粒体电荷传递及柠檬酸循环有关的酶；与血红蛋白基因中的铁结合，激活鸟苷酸环化酶，导致细胞内环磷酸鸟苷增多，造成细胞损伤。激活还氧化酶、蛋白激酶C和铁结合蛋白,与核糖核苷酸还原酶中的铁结合，以抑制DNA的合成[4]。另外，NOS在L－精氨酸缺乏时，可生成超氧离子，造成组织损伤。
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关节软骨缺损修复的研究进展
关节软骨缺损的修复一直是骨科临床和实验研究中亟待解决的难题之一,人们一直在探索一种有效的修复方式.本文就关节软骨缺损的自身修复、自体或异体骨软骨移植、骨膜或软骨膜移植、软骨细胞移植、三维立体细胞培养组织工程技术及于细胞定向诱导分化的修复等六个方面,综述了关节软骨缺损修复的研究进展.
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磷脂酰肌醇3激酶信号通路影响细胞凋亡在肺腺癌A549细胞群集耐药中的作用
目的探讨PI3K信号通路在肿瘤群集耐药中的作用.方法采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法,进行肺腺癌A.549细胞体外立体培养,通过Western blot、原位细胞凋亡检测、四唑盐(MTT)比色法及血球计数器计数法检测Akt、Bcl-2、Bad的表达、细胞凋亡率及对阿霉素(ADM)敏感性.结果①立体培养细胞存在Akt的高表达;②同平面培养比较,立体培养细胞存在Bcl-2高表达,Bad低表达,细胞凋亡率低,对ADM敏感性低的特征,阻断PI3K信号通路后,两者差异明显缩小.结论PI3K信号通路可通过抑制细胞凋亡在肺腺癌A549细胞群集耐药中发挥作用,阻断PI3K信号通路可能逆转该耐药现象.
