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细胞凋亡信号调节激酶1在脊髓缺血再灌注损伤中的作用
目的:探讨细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)在脊髓缺血再灌注损伤中的作用及机制.方法:20只新西兰大白兔随机分成4组,每组5只,分别为对照组(A组)、缺血30mir/再灌注15min组(B组)、缺血30mir/再灌注1h组(C组)、缺血30min/再灌注24h组(D组),脊髓缺血再灌注损伤模型应用腹主动脉阻断法制作.光镜及电镜观察各组脊髓组织病理变化,Western blot检测脊髓组织中ASK1的蛋白表达及活化情况,免疫共沉淀分析ASK1与14-3-3蛋白间相互作用,免疫组织化学染色观察活化ASK1(pASK1)及14-3-3蛋白在细胞内的定位表达.结果:光镜检查B组的脊髓组织形态学与A组比较无明显改变,C组及D组脊髓间质明显出血,神经细胞肿胀;电镜检查C组及D组神经细胞出现细胞核浓缩、染色质聚边、脱髓鞘改变等早期凋亡征象;Western blot蛋白电泳显示B组ASK1无明显活化,C组及D组ASK1显著活化;免疫共沉淀分析提示ASK1与14-3-3蛋白在C组及D组发生蛋白分离;免疫组织化学染色显示缺血再灌注时pASK1与14-3-3蛋白均在细胞浆内表达.结论:ASK1介导的凋亡信号转导途径参与脊髓缺血再灌注的损伤过程,14-3-3蛋白与ASK1蛋白的分离可能是导致ASK1活化的机制之一.
关键词： 缺血再灌注损伤 脊髓 细胞凋亡信号调节激酶1 14-3-3蛋白 -
PRDX1抑制蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡机制探讨
目的:初步探讨过氧化还原蛋白1 (peroxirodoxin 1,PRDX1)抑制蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡的机制.方法:选取人甲状腺癌细胞,设立随机序列核酸siRNA、siASK1、siPRDX1和siASK1+ siPRDX1组,分别用培养液、lactacystin和MG132培养细胞;用蛋白印迹法检测PRDX1、ASK1、p38、JNK1/2、p ASK1、p P38和p-JNK1/2在各组甲状腺癌细胞中的表达;用微小RNA干扰技术转染细胞;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:MG132处理组中,p-ASK1是对照组的1.5倍(F=214.14,P＜0.001),其下游效应子p p38和p JNK1/2分别为对照组的1.34(F=216.75,P＜0.001)和1.94倍(F=1 601.68,P＜0.001);siASK1下调MG132介导的p-ASK1为随机序列组的0.58倍(F=1 136.82,P＜0.001),p p38为随机序列组的0.73倍(F=507.00,P＜0.001),p-JNK1/2为随机序列组的0.51倍(F=6 087.48,P＜0.001).甲状腺癌细胞凋亡率降低为34.25％,显著低于于随机序列组的51.98％,F=18.39,P=0.013.MG132处理组中,siPRDX1组甲状腺癌细胞凋亡率为68.99％显著高于随机序列组的49.58％和siPRDX1+siASK1联合组的41.28％,而siASK1组的甲状腺癌细胞凋亡率为31.85％,显著低于上述两组,组间差异有统计学意义,F=30.13,P＜0.001.结论:PRDX1通过负向调节ASK1活性及ASK1-p38和ASK1 JNK通路,抑制ASK1介导的细胞凋亡进而消减MG132对甲状腺癌细胞毒性效应.
关键词： 蛋白酶体抑制剂 细胞凋亡信号调节激酶1 过氧化还原蛋白1 甲状腺肿瘤 -
细胞凋亡信号调节酶1在口腔白斑细胞凋亡中的作用
目的 探讨细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)在口腔白斑细胞凋亡中的作用.方法 选取存档石蜡标本,包括白斑单纯增生7例,白斑伴上皮轻-中度异常增生23例,对照组正常口腔黏膜7例.采用免疫组织化学方法,检测ASK1及磷酸化ASK1(p-ASK1)的表达,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果 口腔白斑单纯增生及白斑伴上皮轻-中度异常增生组的ASK1表达高于对照组(P＜0.05).从正常黏膜组织到白斑单纯增生再到白斑伴上皮轻-中度异常增生,p-ASK1表达逐渐增加(P＜0.05).口腔白斑单纯增生和白斑伴上皮轻-中度异常增生组的凋亡指数明显高于对照组(P＜0.05).结论 ASK1及p-ASK1的表达增高与细胞凋亡的增加呈正相关,提示在口腔白斑细胞凋亡中ASK1被激活,其相关的信号通路及级联反应可能发挥重要作用.
关键词： 细胞凋亡信号调节激酶1 p-ASK1 细胞凋亡 口腔白斑 -
辛伐他汀对慢性心力衰竭幼兔心肌嗜铬粒蛋白A、细胞凋亡信号调节激酶1表达的影响
目的 观察辛伐他汀干预慢性心力衰竭幼兔模型的疗效,探讨辛伐他汀防治心力衰竭的可能机制.方法 将30只雄性幼兔按随机数字表分为3组:对照组(CON组)、心力衰竭组(HF组)、辛伐他汀组(SIM组),每组各10只.慢性心力衰竭模型采用多次注射多柔比星的方法建立(1.5 mg/kg,每周1次,共12周),CON组则用9g/L盐水代替,SIM组在注射多柔比星的同时予1.5 mg/kg辛伐他汀灌胃,每日1次,共12周.造模结束后观察幼兔心功能、心肌形态学改变及心肌嗜铬粒蛋白A(CgA)、细胞凋亡信号调节激酶1(ASKl)的表达.结果 1.CON组幼兔全部存活,饮食、活动等均正常;SIM组与HF组幼兔均出现不同程度的饮食减少、行动缓慢、精神不振等症状.HF组幼兔存活率为60％,SIM组幼兔存活率为80％.2.心脏超声结果:与CON组比较,HF组、SIM组幼兔的左心室射血分数均下降[(40.05±6.74)％、(50.18±5.73)％比(65.93±5.65)％,均P＜0.01],其中SIM组高于HF组,差异有统计学意义(P ＜0.05);SIM组左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径较HF组减小[(13.48±1.24) mm比(16.23 ±2.82) mm;(9.87 ±0.85) mm比(11.13±1.21)mm],差异均有统计学意义(均P＜0.05).3.免疫组织化学结果:与CON组相比,HF组、SIM组幼兔心肌中CgA(平均光密度值142.24±17.14、127.93±12.12比78.65±6.78,P＜0.05;累计光密度值1 422.41±167.34、1 279.37±118.15比786.54±75.84,P＜0.05)、ASK1(平均光密度值140.32±18.65、115.48 ±12.30比69.85±6.54,P＜0.05;累计光密度值1 403.23±165.67、1 158.79±137.81比698.58±64.51,P＜0.05)表达均显著增加,其中SIM组表达少于HF组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 辛伐他汀对慢性心力衰竭幼兔可发挥心肌保护作用,其机制可能与抑制心肌CgA、ASK1的表达有关.
关键词： 慢性心力衰竭 辛伐他汀 嗜铬粒蛋白A 细胞凋亡信号调节激酶1 -
白杨素诱导肝癌Hep3B细胞凋亡机制研究
目的 研究白杨素诱导人肝癌Hep 3B细胞凋亡是否涉及激活ROS/ASK1/JNK/Bim信号通路.方法 流式细胞术检测细胞凋亡,siRNA转染敲除细胞凋亡信号调节激酶1(ASK1)及Bim基因,SP600125抑制Jun氨基末端激酶(JNK),N-乙酰-L型半胱氨酸(NAC)清除活性氧(ROS),Western blot检测蛋白表达.结果 白杨素显著诱导Hep 3B细胞凋亡,同时上调细胞p-ASK1、p-JNK1/2及Bim水平.NAC或SP600125预处理以及ASK1或Bim特异性siRNA转染均能有效拮抗白杨素诱导的细胞凋亡.NAC预处理能抑制白杨素活化ASK1,NAC预孵育或ASK1特异性siRNA转染能抑制白杨素活化JNK,NAC预孵育、ASK1特异性siRNA转染或SP600125预处理均能拮抗白杨素上调Bim蛋白表达效应.结论 白杨素可能通过刺激ROS的生成激活ASK1,导致JNK活化,进而上调Bim表达,并终促进Hep 3B细胞凋亡.
关键词： 白杨素 肝癌 细胞凋亡 细胞凋亡信号调节激酶1
