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乙肝肝移植受体术后骨髓CD34+细胞和PBMCs内乙肝病毒DNA的同步检测
目的 肝移植术后乙肝复发严重影响预后,HBV感染的病毒来源值得研究.采用PCR技术可检测到术后病人外周血单个核细胞(PBMCs)中HBV DNA的存在,然而PBMCs的寿命有限,其中的病毒来源仍不清楚.该研究对此问题做了初步的探索.方法 采集13例乙肝肝移植术后受体外周血和骨髓标本,运用Ficoll密度梯度离心法结合免疫磁性分离法(MACS)分别从外周血和骨髓标本中分离出PBMCs和骨髓来源CD34+细胞即造血干祖细胞,利用实时荧光定量PCR法检测细胞中的HBV DNA,同时检测血清HBV标志物和血清HBV DNA.结果 13例病人术前血清HBV DNA阳性8例,阴性5例.术后平均37个月的随访期内(16～77个月)血清中HBV DNA,HBsAg和HBeAg检测结果全为阴性;13例PBMCs中均检测到HBV DNA的存在,阳性率为100%.PBMCs中DNA含量对数平均值为3.40±0.85;13例骨髓来源CD34+细胞中都检测到HBV DNA的存在.阳性率也是100%.CD34+细胞中DNA含量对数平均值为3.30±0.58.病人PBMCs和CD34'细胞内DNA含量对数值均数差异无统计学意义(P>0.05).同一病人PBMCs与CD34+细胞HBV DNA同时为阳性.术前血清HBV DNA检测阳性和阴性病人的PBMC内DNA含量对数值均数差异无统计学意义(P＞0.05);术前血清HBV DNA检测阳性和阴性病人的CD34+细胞内DNA含量对数值均数差异也无统计学意义(P＞0.05).结论 现有预防措施下,乙肝肝移植受体虽然外周血清中不能检测到HBV DNA和HBV抗原成分的存在,但术后骨髓CD34+细胞和PBMCs中皆长期存在HBV DNA.含有HBV DNA的骨髓来源CD34+细胞可能是含有HBV DNA的PBMCs的来源,也可能是肝移植术后PMBCs内HBV DNA长期存在的原因,及以后导致HBV复发的潜在危险因素.然而,现在尚无有效方法可以完全清除这些残存病毒,术后长期的抗病毒药物预防措施是必要的.
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胃癌细胞FoxP3的表达及其与外周血单个核细胞(PBMCs)的相互作用
目的 检测叉头样蛋白3(forkhead box protein 3,FoxP3)在胃癌细胞中的表达分布,并探讨其在外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和胃癌细胞共培养过程中的作用.方法 应用免疫荧光技术检测FoxP3蛋白的表达定位；建立胃癌细胞和PBMCs的体外共培养体系,然后用CCK-8法检测共培养后胃癌细胞的生长抑制情况；通过Real-time PCR技术检测共培养后胃癌细胞和PBMCs中FoxP3 mRNA表达情况；并采用流式细胞技术和Western blot技术检测共培养后两种细胞中FoxP3蛋白表达情况.结果 FoxP3表达于胃癌细胞的胞质和胞核.胃癌细胞与PBMCs共培养时能明显抑制胃癌细胞的增殖.直接和间接共培养后MKN28胃癌细胞的FoxP3蛋白的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)均增加(P=0.031;P=0.015)；与单培养相比,来源于胃癌患者和健康对照组的淋巴细胞与胃癌细胞共培养后其FoxP3 MFI均明显增加(P=0.016;P=0.034),且IL-2能促进间接培养条件下PBMCs的FoxP3表达(P=0.024),而对直接共培养影响不大.共培养后胃癌细胞的FoxP3 mRNA和蛋白表达均增加,直接共培养较间接共培养增加更明显(P=0.035).结论 胃癌细胞与PBMCs的相互作用主要依赖细胞间的直接接触方式,FoxP3的表达变化在这一过程中发挥了重要作用,这可能跟肿瘤免疫逃逸有关.
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PBMCs和血浆中HCV基因型的临床意义
目的检测HCV感染者血浆和PBMCs中HCV基因型的相关性,同时研究不同型的HCV与丙型肝炎病情的关系. 方法应用特异性限制性片段长度多态分析(PFLP)-酶切分型法. 结果在82例血浆HCVRNA阳性的病例中Ⅱ型为37例,Ⅲ型为34例,Ⅱ/Ⅲ型为11例.在PBMCs中HCVRNA为阳性的为54例,其中Ⅱ型为38例,Ⅲ型为12例,Ⅱ/Ⅲ型为4例. 结论 HCV感染人体后,不但在血浆中可以检测到HCVRNA,而且也可以在PBMCs中检测到HCVRNA.同时HCVⅡ型比Ⅲ型更易感染PBMCs,并且HCVⅡ型感染者易出现慢性持续性感染,以至于发展为肝硬化.
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宫腔灌注自体外周血单个核细胞治疗对反复种植失败患者妊娠结局的影响及相关机制
目的 探讨宫腔灌注自体外周血单个核细胞(PBMCs)治疗对反复种植失败(RIF)患者妊娠结局的影响及相关机制.方法 36名RIF患者于冻融胚胎移植(FET)前24 h行自体PBMCs宫腔灌注,随访妊娠结局;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测宫腔灌注前、后外周血及宫颈分泌物中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 RIF患者经宫腔灌注自体PBMCs治疗后得到了较高的临床妊娠率(47.22％);宫颈分泌物中IL-6、IL-6/TNF-α均显著升高(P＜0.05),TNF-α水平无统计学差异(P＞.05),外周血中IL-6、TNF-α水平均无统计学差异(P＞0.05).结论 宫腔灌注自体PBMCs治疗能提高RIF患者宫腔局部IL-6水平及IL-6/TNF-α比值,有效改善RIF患者临床妊娠率.
