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针对gp41靶位的HIV融合抑制剂的研究进展
HIV感染导致人体防御机能的缺陷,即艾滋病(AIDS).目前,全球已有约6500万HIV感染者.由于缺乏有效的抗病毒药物,约有2500万感染者在发病后难逃死亡的厄运,因此AIDS又被称为“世纪癌症”.为了战胜AIDS,各国科学家正在研制多种抗病毒药物.已用于临床的反转录酶及蛋白酶抑制剂联合的高效抗反转录病毒疗法(HAART),对控制AIDS的传播起到了显著的作用,但由于其长期用药产生的不良反应及HIV变异导致耐药问题日益突出,针对HIV进入细胞的抑制剂,特别是HIV-1融合抑制剂是目前研究的热点.
关键词： HIV HIV融合抑制剂 HIV包膜蛋白质gp41 -
HIV-1gp41NHR序列靶点专一性的荧光共振能转移测定
目的 确定并利用荧光共振能转移法(FRET)对以HIV-1 gp41 N端七联重复序列(NHR)为靶点的融合抑制剂进行筛选和作用机制研究.方法 FRET采用金属络合物多肽技术设计针对不同结合位点、结合强度可调、涵盖全部NHR序列的靶点和探针,对HIV融合抑制剂进行高通量筛选.由于HIV在进行膜融合时其gp41的N端NHR和C端CHR可形成稳定的六螺旋结构,因此,利用圆二色谱仪对FRET所使用的靶点/探针对的结合强度进行验证,确定对应的靶点/探针对可形成稳定的六螺旋结构;同时,借助细胞活性测试测定抑制剂的活性,验证FRET是否可用于筛选以HIV-1 gp41 NHR为靶点的抑制剂.结果与结论 FRET中使用的靶点/探针均可形成螺旋度较高的六螺旋结构,其中Fe(Env2.0)3/CP2及Fe(Env5.0)3/CP5形成的α螺旋度分别高达89.6%和84.7%.FRET所使用的靶点/探针对专一性强、结合作用强,可用于进行HIV-1融合抑制剂的筛选和机制研究.
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HIV融合抑制剂的研究进展
人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)进入靶细胞的过程是由病毒表面的包膜糖蛋白(Env)跨膜亚基gp41介导的.gp41中含有2个α-螺旋疏水重复序列,即N末端重复序列(HR1)和C末端重复序列(HR2).在融合过程中,它们能寡聚化形成gp41介导膜融合的功能性结构(6股α-螺旋束核心结构),该结构的形成使得病毒膜与细胞膜接近,继而发生融合.任何可有效阻止6股α-螺旋束核心结构形成的化合物,均有可能产生抗HIV融合活性.多肽类HIV融合抑制剂中C肽和N肽分别衍生于HR2和HR1,具有很好的抗HIV融合活性,C肽类中的新药enfuvirtide(T-20)已于2003年被美国FDA批准上市.现综述近几年HIV融合抑制剂的研究现状及发展方向.
关键词： HIV融合抑制剂 膜融合 C肽 N肽 enfuvirtide -
艾滋病治疗药物的研究进展
作者全面系统地阐述了近年来抗艾滋病新药的研发策略和研究进展,并根据药物作用靶点分别介绍了新上市的抗艾滋病药物的作用机制和结构特点,如第二代HIV-1逆转录酶抑制剂和HIV-1蛋白酶抑制剂,以及全新作用机制的HIV-1进入抑制剂和HIV-1整合酶抑制剂,并对今后抗艾滋病药物的发展方向进行了展望.
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作用于gp41的HIV融合抑制剂高通量筛选方法的研究
目的对作用于gp41的HIV融合抑制剂筛选方法进行研究和改进,使其成为更加简便的高通量药物筛选模型.方法采用夹心ELISA方法,检测HIV gp41六股α-螺旋束的形成.结果以特异性识别HIV gp41六股α-螺旋束的单克隆和多克隆抗体为基础建立的改良夹心ELISA方法,特异性好,准确性高,更为简便和经济,能稳定有效地检测样品对gp41六股α-螺旋束形成的抑制作用.结论本研究建立的改良方法可作为高通量药物筛选方法,用于从中草药库、噬菌体肽库和微生物发酵液等复杂组分样品中筛选作用于gp41的HIV融合抑制剂,以研究开发抗HIV药物.
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作用于HIV包膜蛋白亚基gp41的多肽类融合抑制剂
HIV gp41是病毒包膜上介导HIV与靶细胞膜融合的跨膜糖蛋白,其包膜外区包括位于N末端的融合多肽和下游的N末端重复序列(NHR),以及C末端的重复序列(CHR).衍生于gp41 NHR和CHR的N-多肽和C-多肽具有抑制HIV与靶细胞融合的活性,其中C-多肽T-20已获得美国FDA批准,成为继逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂后的第三类抗艾滋病药物,即HIV融合抑制剂.由于T-20等为多肽类药物,容易被体内蛋白酶降解,临床剂量大,用基因工程手段难以满足需要,因此只能采用多肽合成技术进行生产,成本高昂.为此,人们希望寻找到具有相似机制的活性短肽,或通过多肽设计使活性多肽适合用基因工程进行大规模生产.近年来,对N-多肽和C-多肽进行结构改造已成为研究的热点,出现了许多相对分子质量较小,不容易被内源性蛋白酶降解,或者能用基因工程手段生产的活性多肽,同时多肽药物抑制HIV感染的作用机制也因此而逐渐清晰起来.
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青果抗人免疫缺陷病毒活性部位的筛选研究
目的:筛选青果中作用于人免疫缺陷病毒(HIV)gp41抑制HIV-1与靶细胞融合的活性部位.方法:分别用水蒸气蒸馏法、溶剂梯度萃取法获得青果挥发油、青果10%水提液的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测以上各部位抑制HIV-1与靶细胞融合的活性;测定活性部位中鞣质的含量,以确定青果中非鞣质成分与活性的关系.结果:青果10%水提液的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取部位均有较强的抑制HIV-1与靶细胞融合的活性,其半数抑制浓度分别为(3.97±0.38)、(26.78±0.47)、(6.80±0.10)μg·mL-1;各部位中鞣质的含量分别为8.0%、9.6%、32%.结论:青果抑制HIV与靶细胞融合的活性部位为水提液的石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取部位,其中石油醚萃取部位活性强,且很可能含有非鞣质类的活性物质.
