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肝门胆管癌细胞染色体畸变的检测及意义
我们用肝门胆管癌组织新鲜标本和胆管癌细胞系(QBC939)进行染色体制片,荧光原位杂交(flurescence in situ hybridization,FISH)分析,研究肝门胆管癌瘤细胞染色体变化,报告如下.
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肝门部胆管癌细胞系(FRH-0201)的建立及生物学特性研究
为了进一步了解肝门部胆管癌的生物学特性,我们建立了一株肝门部胆管癌细胞系,定名为FRH-0201,至今已传160代,生长稳定,现报道如下.
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姜黄素对人QBC939细胞生长抑制与凋亡的影响
目的:研究姜黄素(Curcumin)对人胆管癌细胞系QBC939的生长抑制与促凋亡作用.方法:采用MTT法检测姜黄素对胆管癌细胞的抑制作用;相差显微镜,电镜下观察细胞形态变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA Ladder;流式细胞术分析DNA含量.结果:1,2,4,8,和16mg*L-1姜黄素均能抑制人胆管癌细胞QBC939的生长,且抑制率具有浓度和时间依赖性,IC50为5.6mg*L-1.8mg*L-1姜黄素作用后,QBC939细胞出现典型的凋亡形态特征,DNA Ladder出现,并检测到亚二倍体凋亡峰.结论:Curcumin能有效地抑制QBC939细胞生长并促进其凋亡.
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丹参酮ⅡA对人胆管癌细胞Survivin表达的影响及意义
目的 体外实验研究丹参酮ⅡA对人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810 Survivin基因的影响并探讨其与胆管癌细胞凋亡之间的关系.方法 分别采用(0～10 μg/ml)的丹参酮ⅡA作用人肝内胆管癌细胞72 h后.通过反转录聚合酶链反应(reverse transcript polymerase chain reaction,PT-PCR)检测Survivin mRNA水平,采用蛋白质免疫印记法测定Survivin蛋白表达变化,通过MTT比色法观察其对细胞抑制影响,流式细胞仪行胆管癌凋亡测定.结果 与对照组相比,丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制胆管癌细胞的生长,1～10μg/ml丹参酮ⅡA作用72 h后,Survivin mRNA水平均受到显著抑制(P＜0.05),5μg/na以上剂量组抑制具有显著统计学差异(P＜0.01).结论 在体外丹参酮ⅡA能够抑制人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810Survivin的表达,这可能是丹参酮Ⅱ A抑制其生长的机制之一.
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丹参酮ⅡA抑制人胆管癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究
目的 体外实验研究丹参酮ⅡA对人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810的生长抑制及诱导凋亡作用.方法分别采用(0～10μg/ml)的丹参酮ⅡA作用人肝内胆管癌细胞72 h后,通过MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、投射电镜检测细胞凋亡;流式细胞术(FCM)定量检测5μg/ml丹参酮ⅡA作用不同时间后的细胞凋亡率.结果 丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制胆管癌细胞的生长.1～10μg/ml丹参酮ⅡA作用72 h后,胆管癌细胞出现细胞铍缩、核染色质浓缩、核碎裂以及凋亡小体出现等特征性的形态学改变.5μg/ml浓度作用12、24、36、48、72 h后的细胞凋亡率分别为(2.3l±0.15)%、(3.02±0.36)%、(3.86±0.44)%,(6.75±0.60)%和(20.62±1.76)%与对照组(1.08±0.14)%比较均具有显著差异.结论 在体外丹参酮ⅡA能够诱导人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810凋亡,这可能是丹参酮ⅡA抑制其生长的机制.
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逆转录病毒介导IFN-γ基因对胆管癌细胞株的影响
目的:研究人IFN-γ基因对胆管癌细胞株免疫原性的影响.方法:构建携带人IFN-γ cDNA的逆转录病毒载体pZIP-IFN-γ,导入人胆管癌细胞系QBC939,运用Western Blot法分析MHCⅠ类分子的表达,体外混合淋巴细胞、肿瘤细胞培养(MLTR)和淋巴细胞杀伤试验研究导入IFN-γ基因的QBC939细胞免疫原性的变化.结果:G418阳性QBC939-IFN-γ细胞分泌IFN-γ活性为每48 h 0～9.5 IU/106, Southern Blot和Slot Blot 证实了目的基因的整合及表达.Western Blot证明MHCⅠ类分子表达水平是未转基因亲本瘤细胞的1.78倍.MLTR证实该瘤苗能明显刺激胆管癌病人外周血淋巴细胞的增殖,并能增强HLA A2 位点相匹配的胆管癌病人外周血淋巴细胞的杀伤活性.结论:IFN-γ基因修饰瘤苗能增强胆管癌细胞系QBC939 的免疫原性.
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腺病毒介导多基因对胆管癌细胞凋亡的诱导和肝细胞毒性损害
目的:研究腺病毒介导的多基因(GM-CSF、B7-1、p53、IL-2)对胆管癌细胞系QBC939凋亡的诱导作用和对正常肝细胞的作用.方法:应用TUNEL细胞凋亡检测法和光镜观察,分析同时含GM-CSF、B7-1、p53、IL-2 4种目的基因的重组腺病毒载体(Ad-multigenes)对胆管癌细胞系QBC939和肝细胞系L02的作用以及对大鼠肝脏的毒性损害.结果:Ad-multigenes与化疗药物顺铂协同,能诱导30%左右的QBC939发生凋亡,并对肝细胞系L02和大鼠肝细胞无明显毒性损害.结论:Ad-multigenes能诱导胆管癌细胞QBC939发生凋亡,且与化疗药物顺铂具有协同增强作用.初步分析对人肝细胞及大鼠肝脏无明显毒性损害,具有一定的临床应用前景.
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腺病毒介导多基因在胆管癌细胞中的表达
目的:研究腺病毒介导的多基因(GM-CSF、B7-1、p53、IL-2)在胆管癌细胞系QBC939中的表达及对其生长的影响.方法:构建同时含GM-CSF、B7-1、p53、IL-2 4种目的基因的重组腺病毒载体Ad-multigenes,应用流式细胞仪、ELISA、免疫组化等方法,分析该重组腺病毒体包含的目的基因在靶细胞中的表达,并绘制细胞的生长曲线.结果:腺病毒介导的多基因在胆管癌细胞系QBC939中高效表达(IL-2不表达),并能抑制胆管癌细胞的生长.结论:腺病毒介导的多种基因能在胆管癌细胞QBC939中表达,并抑制肿瘤细胞的生长.
