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草酸钙肾结石的研究现状:问题与方向
有5%～15%的人群一生中会罹患肾结石,其中大部分的结石成分是草酸钙(calcium oxalate,CaOx)[1].多数CaOx肾结石患者未发现伴有其他系统性疾病的存在,称之为特发性草酸钙结石(idiopathic calcium oxalate,iCaOx);一些患者存在原发性甲状旁腺功能亢进或其他钙代谢异常疾病;一些患者的主要表现为高草酸尿症,其中因肠道疾病导致草酸吸收增多而引起的称为肠源性高草酸尿症,因基因缺陷导致草酸代谢异常而引起的称为原发性高草酸尿症(primary hyperoxaluria,PHO).
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钙敏感受体在大鼠肾草酸钙结石形成中的作用
目的 动态观察钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)在大鼠肾草酸钙结石形成过程中的表达,探讨CaSR在大鼠肾草酸钙结石形成中的作用.方法 选取60只Wistar雄性大鼠,随机分为正常对照组和结石组,每组各30只.正常对照组以正常饮用水2ml/d灌胃,结石组大鼠给予1％乙二醇和2％氯化铵2 ml/d灌胃,诱导建立Wistar大鼠肾草酸钙结石模型.连续10周观察大鼠的一般情况,每组每周处死3只大鼠并收集双侧肾标本,采用光学显微镜、HE切片染色动态观察结石形成情况.免疫组织化学染色技术对CaSR在肾组织中的表达水平进行动态监测.结果 第3周开始,结石组大鼠肾切片HE染色可见明亮晶体,主要分布于远曲小管和近曲小管,肾组织可见肾小管轻度扩张,偶见肾小管上皮脱落或肾间质有淋巴细胞的浸润;1 ～ 10周正常对照组肾组织未见病理性改变.免疫组织化学染色结果:第1～2周,镜下两组大鼠肾组织内CaSR定位处着色程度无明显差异;第3周开始,结石组肾组织内CaSR定位处着色程度与对照组相比明显加深.结论 CaSR的高度表达可能在大鼠肾草酸钙结石形成过程中起重要作用.
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基质Gla蛋白与骨形成蛋白2在草酸钙肾结石患者Randall钙斑中的表达
目的:对比基质Gla蛋白(matrix Gla protein,MGP)及骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)在草酸钙结石肾乳头Randall钙化斑组织中的表达,探讨其在草酸钙肾结石形成过程中的相关机制.方法:收集中南大学湘雅医院泌尿外科2015年4月至12月期间住院的30例草酸钙肾结石患者的肾乳头钙化斑组织标本作为实验组,10例同期患肾肿瘤行根治性肾切除术患者的肾乳头组织标本作为对照组,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹检测MGP和BMP-2在肾乳头组织中的表达,并采用免疫组织化学技术观察MGP和BMP-2在肾乳头组织中的表达.结果:1)RT-PCR检测实验组和对照组MGP mRNA的表达量为0.760±0.804和1.365±0.348,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组和对照组BMP-2 mRNA表达量分别为2.500±0.725和1.485±0.870,差异有统计学意义(P＜0.05).2) Western印迹检测实验组和对照组的MGP蛋白表达量分别为0.130±0.424和0.202±0.704,差异无统计学意义(P＞0.05);实验组和对照组BMP-2蛋白表达量为0.885±0.220和0.682±0.272,差异有统计学意义(P＜0.05).3)免疫组织化学结果显示实验组MGP的表达较对照组低,而实验组BMP-2表达较对照组高(均P＜0.05).结论:草酸钙肾结石患者的肾乳头组织内BMP-2表达增多,MGP表达减少,草酸钙肾结石的形成可能是一种与MGP和BMP-2相关的类成骨反应或异位钙化.
关键词： 基质Gla蛋白 骨形成蛋白2 草酸钙肾结石 Randall钙化斑 -
自噬在乙二醇诱导的大鼠肾内晶体形成中的调控作用
目的:探讨自噬在乙二醇诱导的大鼠肾内晶体形成中的调控作用.方法:健康雄性SPF级SD大鼠40只,分为正常对照组、结石模型组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理组(0.75％乙二醇+NAC)、雷帕霉素处理组(0.75％乙二醇+雷帕霉素)和氯喹处理组(0.75％乙二醇+氯喹),每组8只.干预4周后,应用Western blot和免疫组化检测各组肾脏组织中自噬关键蛋白LC3-Ⅱ的表达水平;透射电镜观察各组肾组织中自噬泡的数量;应用试剂盒检测各组24 h尿液中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;全自动生化仪检测各组血清肌酐及尿素氮的水平;ELISA法检测各组24 h尿液中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(Kim-1)的水平.钙盐染色法观测各组肾脏晶体的沉积情况,评价肾组织的病理学变化.结果:与结石模型组相比,雷帕霉素处理组和氯喹处理组中LC3-II的表达水平和自噬泡数量均增加,而在NAC处理组中LC3-II的表达水平和自噬泡数量均减少(P<0.05).与结石组相比,雷帕霉素处理组中T-SOD和GSH-Px水平降低,而氯喹处理组和NAC处理组中T-SOD和GSH-Px的活性增加(P<0.05).与正常组相比,结石组中血清肌酐、尿素氮、NGAL和Kim-1的水平及肾脏内晶体沉积增加(P<0.05);在雷帕霉素处理组中肾脏损伤进一步加重,晶体沉积进一步增加,而在氯喹处理组和NAC处理组中肾脏损伤明显减轻,晶体的沉积明显减少.结论:乙二醇激活自噬后可以促进大鼠肾内晶体的形成.应用抗氧化剂和自噬抑制剂不仅可以降低肾脏内的自噬水平,还可以减轻肾脏损伤,减少晶体沉积,降低肾结石的形成率.
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探讨钙敏感受体及紧密连接蛋白-14在大鼠肾草酸钙结石形成中的作用
目的:动态观察钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)及紧密连接蛋白-14(Claudin-14)在大鼠肾草酸钙结石形成过程中的表达,探讨CaSR及Claudin-14在大鼠肾草酸钙结石形成中的作用.方法:选取60只Wistar雄性大鼠,随机分为正常对照组和结石组,每组各30只.正常对照组以正常饮水每日每只2 mL灌胃,结石组大鼠给予1％乙二醇和2％氯化铵每日每只2 mL灌胃,诱导建立Wistar大鼠肾草酸钙结石模型.连续10周观察大鼠的一般情况,每组每周处死3只大鼠并收集双侧肾脏标本,采用光学显微镜、HE切片染色动态观察结石形成情况.免疫组织化学染色技术对CaSR及Claudin-14在肾组织的表达水平进行动态监测.结果:第3周起,结石组大鼠肾脏开始肿大,慢慢可见淡黄色颗粒沉积在皮髓交界处,触之有沙粒样感觉,表面出现结晶或钙化;1～10周正常对照组均无上述形态学改变.第3周开始,结石组大鼠肾脏切片HE染色可见明亮晶体,主要分布于远曲小管和近曲小管,肾组织可见肾小管轻度扩张,偶见肾小管上皮脱落或肾间质有淋巴细胞浸润;1～10周正常对照组肾组织未见病理性改变.免疫组织化学染色结果:第1、2周,两组大鼠肾组织内CaSR的表达没有明显差异,第3周开始,结石组肾组织内CaSR的表达明显高于对照组;1～10周对照组肾组织内均无Claudin-14的表达,第3周起,结石组肾组织Claudin-14呈高度表达.结论:CaSR及Claudin-14的高度表达可能在大鼠肾草酸钙结石形成过程中起重要作用.
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MG132对草酸钙肾结石模型TGF-β1及EMT的影响
目的 探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG132对草酸钙肾结石模型转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路及上皮间质转化(EMT)的影响.方法 MDCK培养后分为3组(空白对照组、草酸组、草酸+MG132组)分别予以相应干预.运用Western blot蛋白印迹分析检测上皮钙黏蛋白(E-Cadherin) 、N-钙黏着蛋白(N-Cadherin) 、兔抗人波形蛋白(Vimentin) 、TGF-β1 、Smad7的表达.采用细胞可渗透性荧光探针2′-,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)测量细胞活性氧(ROS)水平.结果 草酸会使 TGF-β1 、N-Cadherin 、Vimentin表达量增加,使Smad7 、E-Cadherin表达下降. M G132会降低草酸引起的细胞ROS的增加.结论 泛素蛋白酶体抑制剂MG132通过抑制TGF-β1/Smad通路、影响肾小管上皮细胞的转分化从而发挥抗肾间质纤维化作用.
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西梅干预防大鼠草酸钙肾结石的实验研究
目的 研究西梅干对乙二醇诱导的大鼠草酸钙肾结石形成的影响及其量效关系.方法 40只Wistar大鼠分为5组:A组空白对照组、B组为单纯乙二醇诱石组、C～E组为西梅干干预组[分别灌喂西梅干匀浆2、4、8 mL/(kg·d)],每组8只.除A组外,余皆用含1％乙二醇去离子水于大鼠自由饮用.于实验前日和实验第4周末,分别检测大鼠尿钙、镁、草酸及枸橼酸浓度;血钙、镁、肌酐和尿素氮浓度;肾脏组织丙二醛(MDA)含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性;偏光显微镜观察HE染色肾脏组织草酸钙结晶形成情况;TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡.结果 三种剂量的西梅干均能明显减轻乙二醇所致的各项血尿生化指标和肾小管上皮细胞凋亡指数的改变,大幅增加尿镁浓度,明显减少乙二醇诱导的草酸钙肾结石的生成.结论 三种剂量的西梅干均可明显干预乙二醇诱导的大鼠草酸钙肾结石的生成,且呈正相关的量效关系.
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浅谈草酸钙肾结石在大鼠实验领域的研究进展
泌尿系结石是泌尿系的常见病，严重威胁人类健康，确切研究其发病机制因素有着重要的意义。目前国内、外研究学者从大鼠实验领域做了大量关于草酸钙肾结石基础研究，包括造模、抑制药物、治疗药物等，抗氧化作用机制是目前研究一大热点。
