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改良Hodge试验检测KPC型碳青霉烯酶的临床应用
目的 探讨改良Hodge试验检测KPC型碳青霉烯酶佳底物以及这种检测方法在临床上的应用.方法 收集213株多药耐药的肠杆菌科细菌,选用亚胺培南、美罗培南、厄他培南为改良Hodge试验的不同底物筛选产碳青霉烯酶表型株；采用聚合酶链反应(PCR)及耐药基因测序分析细菌的耐药基因型.结果 从213株肠杆菌科细菌中检出12株改良Hodge试验阳性株,其中7株为大肠埃希菌,2株为弗氏柠檬酸杆菌,臭鼻克雷伯菌、肺炎克雷伯菌、聚团泛菌各1株；12株改良Hodge试验阳性菌体外药敏试验结果显示,对临床常用抗菌药物均耐药；PCR法扩增出5株阳性株,分别为2株大肠埃希菌,臭鼻克雷伯菌、肺炎克雷伯菌、聚团泛菌各1株；扩增产物经基因测序Blast比对均为KPC-2型碳青霉烯酶.结论 改良Hodge试验的佳底物为厄他培南,美罗培南效果较差；5株耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌携带KPC-2型碳青霉烯酶.
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siHybrids对耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌kpc-2基因表达水平的影响
目的 研究siHybrids对耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌kpc-2基因表达水平及其对美罗培南的抑菌效果的影响,探讨siHybrids的作用机制.方法 将48株携带有kpc-2基因的耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌株分成对照组(不加siHybrid)、低浓度组(siHybrids为0.125 μg/ml)、高浓度组(siHybrids为8.0 μg/ml).分别检测3组12、24、48 h后3个时间点的mRNA的量.另外再分别取3组菌液进行美罗培南药敏试验,观察3组间抑菌圈直径的大小有无差异.结果 与对照组相比较,siHybrids干预后kpc-2基因的mRNA表达量显著下降(P＜0.05),高浓度组kpc-2基因的mRNA表达量显著低于低浓度组(P＜0.05),siHybrids的浓度与kpc-2基因的mRNA表达量呈负相关(r=-0.782,P=0.014);kpc-2基因的mRNA表达量随着siHybrids干预时间的延长而显著下降(P＜0.05).siHybrids干预能显著增大美罗培南抑菌圈的直径(P＜0.05),不同浓度的siHybrids对美罗培南抑菌圈直径的增大幅度不同,高浓度组美罗培南抑菌圈的直径显著大于低浓度组(P＜0.05),siHybrids的浓度与美罗培南抑菌圈直径的大小呈正相关(r =0.882,P=0.024).结论 siHybrids能降低耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌kpc-2基因的表达水平,能提高美罗培南的抑菌效果,其作用机制是siHybrids分子特异性沉默了肺炎克雷伯菌的kpc-2基因.
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一例碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究
目的 研究1株碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500的耐药机制.方法 采用浓度梯度法(E-test)测定细菌的抗菌药物低抑菌浓度(MIC),采用接合实验、聚合酶链反应(PCR)、质粒抽提、探针杂交印迹试验(Southern blot)、等电聚焦电泳及耐药基因克隆测序分析细菌的耐药机制.结果 接合实验、质粒电泳和Southern blot结果显示耐药基因位于一个50 kb的可转移质粒上;等电聚焦电泳显示3条β-内酰胺酶条带,等电点(PI)分别为9.0、6.7(KPC-2)、5.4.PCR产物克隆分析比对为blaKPC-2型.结论 碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500携带由质粒介导的KPC-2酶.
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海南产KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行现状
目的 探讨海南地区产KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行现状.方法 通过法国梅里埃API20E生化鉴定条和法国生物梅里埃VITEK2全自动细菌鉴定仪和配套CNS试剂筛选出临床上耐亚胺培南或美罗培南的肠杆菌科细菌并进行药敏统计;并对其进行改良Hodge试验和亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验检测碳青霉烯酶表型;对目的菌株进行KPC-2耐药基因PCR特异性扩增,扩增后将产物进行琼脂糖凝胶电泳.结果 分离出30株耐亚胺培南和美罗培南的肠杆菌科细菌,体外药敏除阿米卡星23.3％和左氧氟沙星36.7％外,其他广谱青霉素类、头孢类、碳青霉烯类、β-内酰胺酶抑制剂及庆大霉素呈现高水平耐药.30株耐亚胺培南和美罗培南的肠杆菌科细菌有9株改良Hodge试验为阳性,有21株亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验为阳性.对其9株改良Hodge试验为阳性菌株进行KPC-2基因PCR扩增,扩增后进行电泳没有发现携带KPC-2耐药基因的耐药菌株.结论 海南地区耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌暂时没有发现携带KPC-2型基因耐碳青霉烯酶,但多见产金属酶的碳青霉烯酶.
