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体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成及结缔组织生长因子的表达
目的探讨结缔组织生长因子在人增生性瘢痕发病机制中的作用.方法体外培养人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞,通过H3-脯氨酸掺入法检测细胞胶原合成,通过免疫细胞化学染色和逆转录聚合酶链反应检测细胞结缔组织生长因子蛋白质和mRNA的表达.结果和正常皮肤成纤维细胞相比,增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成和结缔组织生长因子蛋白质及mRNA的表达均显著增高(P＜0.01).结论结缔组织生长因子可能在增生性瘢痕纤维化过程中发挥重要促进作用.
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增强型绿色荧光蛋白基因与hTIMP 1基因融合表达载体的构建及鉴定
目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因与人组织型金属蛋白酶抑制剂1(hTIMP1)基因融合表达载体.方法:Trizol法提取总RNA,经逆转录合成cDNA.通过套式PCR获得hTIMP1开放读码框(ORF),将扩增产物与pEASY-Blunt Simple载体连接,进行序列分析.继而将该重组质粒和载体经XhoⅠ和HindⅢ双酶切,回收hTIMP1 ORF目的片段和pEGFP-C1载体大片段,将两者相连、扩增,筛选重组子进行PCR、双酶切鉴定及接头部分序列分析.结果:扩增得到hTIMP1 ORF约为624 bp,与预期长度相符.hTIMP1 ORF与pEASY-Blunt Simple载体相连,测序结果与GenBank相应序列比较,核苷酸序列无改变.hTIMP1 ORF与pEGFP-C1连接所得融合表达载体经PCR及双酶切鉴定(XhoⅠ和HindⅢ),证实hTIMP1 ORF插入pEGFP-C1.结论:成功构建EGFP基因与hTIMP1基因融合表达载体,为进一步研究hTIMP1蛋白的生物学功能和开展以hTIMP1为靶点的急性冠脉综合征的基因治疗奠定了基础.
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GOLPH3、mTOR 在胃癌中的表达及临床意义
目的：探讨高尔基体磷蛋白3（Golgi phosphoprotein 3， GOLPH3）及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）在胃癌中的表达水平及其两者在胃癌发展进程中的临床意义。方法：分别收集术后胃癌组织、距癌缘3～5 cm 癌旁组织和正常胃黏膜组织标本各50例，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白印迹及 SP 免疫组织化学法联合检测 GOLPH3 mRNA、 mTOR mRNA 及蛋白的表达水平。结果：胃癌组织中的 GOLPH3、mTOR 在 mRNA 及蛋白水平表达均明显高于其相应的癌旁组织及正常胃黏膜组织（P ＜0．05），其中在胃癌组中两者的表达与分化程度、淋巴结转移有关（P ＜0．05），而与患者年龄、性别、浸润程度和胃癌组织学分型均无关（P ＞0．05），且 GOLPH3、mTOR 在胃癌中的蛋白表达水平呈显著的正相关性（r ＝0．815，P ＜0．01）。结论： GOLPH3、mTOR 在胃癌组织中的高表达且两者表达呈一致性，提示两者在胃癌的发生、发展及转移过程中发挥着重要作用。
