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RhoA及Rho激酶在子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层交界区平滑肌细胞中的表达及其与痛经的关系
目的 探讨RhoA及Rho激酶(ROCK Ⅰ)在子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层交界区平滑肌细胞中的表达及其与痛经程度的关系.方法 选择2012年3至12月在首都医科大学附属北京妇产医院妇科微创中心因子宫腺肌病行子宫全切除术的32例患者为子宫腺肌病组(其中增殖期内膜18例,分泌期内膜14例);同期因宫颈病变或卵巢肿瘤而行子宫切除的患者29例为对照组(其中增殖期内膜12例,分泌期内膜17例).对两组患者子宫内膜-肌层交界区平滑肌细胞进行分离及原代培养.应用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法,检测两组及子宫腺肌病组不同程度痛经患者子宫内膜-肌层交界区平滑肌细胞中RhoA和ROCKⅠ mRNA及其蛋白的表达水平.结果 (1)子宫腺肌病组子宫内膜-肌层交界区平滑肌细胞中RhoA和ROCK Ⅰ mRNA表达水平无明显周期性变化,增殖期表达水平(分别为1.41 ±0.16、1.05 ±0.15)稍高于分泌期(分别为1.17±0.25、0.98 ±0.10),分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);对照组RhoA和ROCK Ⅰ mRNA表达水平存在周期性变化,增殖期表达水平(分别为0.93 ±0.10、1.00±0.18)高于分泌期(0.48 ±0.03、0.55±0.05),分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);子宫腺肌病组增殖期和分泌期RhoA和ROCK Ⅰ mRNA的表达水平均高于对照组,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)子宫腺肌病组与对照组RhoA及ROCKⅠmRNA、蛋白表达水平均呈正相关关系(r=0.67,P＜O.01;r =0.48,P＜0.01).(3)RhoA和ROCKⅠmRNA、蛋白表达水平在子宫腺肌病组不同程度痛经患者中依次表现为:重度痛经(1.66±0.19、1.32±0.11)＞中度痛经(1.28 ±0.12、1.09 ±0.08)＞轻度痛经(0.93 ±0.09、0.81 ±0.06),两两分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层交界区RhoA及ROCKⅠ呈高表达,与患者痛经程度呈正相关,但不随月经周期变化,提示,RhoA及ROCKⅠ持续性高表达可能导致子宫的异常收缩,从而参与子宫腺肌病痛经的发生.
关键词： 子宫内膜异位症 子宫肌层 ρA GTP结合蛋白质 rho相关激酶类 痛经 -
靶向RhoA基因的shRNA对卵巢上皮性癌裸鼠移植瘤的影响及作用机制
目的 探讨靶向RhoA基因的短发夹状RNA(shRNA)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)裸鼠移植瘤的影响及可能的抗肿瘤作用机制.方法 建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,应用随机数字表法将荷瘤裸鼠随机分为3组,即实验组(予携带靶向RhoA基因的shRNA慢病毒液治疗)、阴性对照组(予携带针对随机无关序列的shRNA慢病毒液治疗)、空白对照组(予磷酸盐缓冲液),比较3组裸鼠的移植瘤生长情况,包括移植瘤生长速度、肿瘤体积、肿瘤质量；光镜下观察3组裸鼠移植瘤及主要器官组织的病理形态学特征.采用实时荧光定量PCR技术、免疫组化SP法和蛋白印迹法检测移植瘤组织中RhoA mRNA和蛋白的表达；脱氧核苷酸末端转移酶介导的核苷酸缺口末端标记(TUNEL)法检测3组裸鼠移植瘤细胞的凋亡情况[以凋亡指数(AI)表示].结果 (1)自治疗开始的第9天起,实验组裸鼠移植瘤的生长速度滞后于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).治疗结束后10d,实验组裸鼠的移植瘤体积为(338±114) mm3,小于阴性对照组和空白对照组[分别为(1190 ±332)和(1101±396) mm3],分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；实验组裸鼠平均肿瘤质量为(0.23 ±0.11)g,低于阴性对照组和空白对照组[分别为(0.79 ±0.19)、(0.74±0.17)g],分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).而阴性对照组裸鼠移植瘤的生长速度、移植瘤体积、肿瘤质量分别与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).光镜下观察,实验组肿瘤细胞呈大片坏死区域且核同缩多见,而阴性对照组和空白对照组肿瘤细胞无明显变化.(2)实验组裸鼠移植瘤组织中,RhoA mRNA的表达水平为0.30±0.05,低于阴性对照组的0.95±0.06和空白对照组的1.00±0.11,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；RhoA蛋白的表达水平为0.14±0.06,低于阴性对照组的0.78±0.14和空白对照组的0.75 ±0.13,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；实验组肿瘤细胞的AI为(20.9±3.4)％,高于阴性对照组的(5.2±2.0)％和空白对照组的(6.0±2.1)％,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).而阴性对照组裸鼠移植瘤组织中RhoA mRNA和蛋白的表达水平及AI分别与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 靶向RhoA基因的shRNA在体内有效下调卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中RhoA基因的表达,抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制可能与促进细胞凋亡有关.
关键词： 卵巢肿瘤 异种移植模型抗肿瘤试验 ρA GTP结合蛋白质 RNA 小分子干扰 基因疗法 -
转染靶向RhoA基因小干扰RNA对高糖刺激下人肾小球系膜细胞RhoA/ROCK信号通路表达的影响
目的 观察小G蛋白(RhoA)小干扰RNA(Stealth RNAm siRNA)对高糖刺激下的人肾小球系膜细胞(HMC)炎症反应及纤维化的影响,探讨RhoA/ROCK信号通路在糖尿病肾病发生发展中的作用.方法 传代培养的HMC同步化后分组,LipofectaminerTM2000脂质体转染抑制RhoA表达的Stealth RNA或无关的siRNA,用荧光倒置显微镜观察各组转染效率,利用实时定量RT-PCR、ELISA技术检测RhoA、ROCK-I、纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况.结果 (1)RhoA-siRNA转染可抑制高糖刺激的HMC中P&oA、ROCK-I、CTGF mRNA的表达水平,各mRNA的表达较高糖组少26%-60%(均P<0.05).(2)RhoA-siRNA转染HMC后继续培养48 h,FN、CTGF和TNF-α仪的蛋白表达水平较高糖组明显少[FN:(1.99±0.04)mg/L比(4.31±0.13)ms/L,CTGF:(4.98-1-0.17)mg/L比(6.06±0.09)ms/L;TNF-α:(61.17±2.59)ns/L比(91.76±2.27)ng/L;均P<0.05],几乎使FN和CTGF下降到正常糖培养HMC的水平.结论 通过RNA干扰技术抑制RhoA的表达,可减少高糖刺激下HMC中FN、CTGF、TNF-α的积聚,降低细胞外基质的蓄积,减少肾小球的纤维化和炎症反应,为糖尿病肾病的防治提供新的干预靶点.
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子宫平滑肌RhoA/Rho激酶表达与宫缩乏力性产后出血的关系
目的:探讨产妇子宫平滑肌组织RhoA/Rho激酶表达与宫缩乏力性产后出血的关系.方法:选择30例宫缩乏力性产后出血产妇为病例组,同期无产后出血产妇30例为对照组.采用肌条等长张力测定法检测子宫平滑肌自发收缩活动力、加入Rho激酶抑制剂Y-27632后子宫平滑肌收缩活动力;采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及蛋白质印迹法检测子宫平滑肌组织RhoA,ROCK Ⅰ和ROCKⅡmRNA及蛋白表达水平.结果:①病例组子宫平滑肌自发收缩活动力水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)；病例组和对照组加入Y-27632后收缩活动力水平均低于加入前,差异有统计学意义(P＜0.01).②病例组子宫平滑肌组织RhoA,ROCK Ⅰ和ROCKⅡmRNA表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).③病例组子宫平滑肌组织RhoA,ROCK Ⅰ和ROCKⅡ蛋白表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).④2组子宫平滑肌组织RhoA mRNA及蛋白与ROCK Ⅰ和ROCKⅡmRNA及蛋白表达水平均呈正相关.⑤2组子宫平滑肌组织RhoA,ROCK Ⅰ和ROCKⅡmRNA及蛋白水平均与子宫平滑肌基础收缩活动力水平呈正相关.结论:宫缩乏力性产后出血产妇子宫平滑肌组织RhoA,ROCK Ⅰ和ROCKⅡ水平均降低,且均与子宫平滑肌收缩活动力呈正相关,提示子宫平滑肌组织RhoA/Rho激酶信号通路表达降低可能是发生宫缩乏力性产后出血的分子机制之一.
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RhoA在肝纤维化中的作用机制
肝纤维化发生的关键在于肝星状细胞(HSC)转化为成纤维母细胞及活化后细胞外基质(ECM)的异常表达.回顾了Rho/ROCK信号通路在HSC的激活中的重要作用.总结了RhoA,作为Rho/ROCK信号通路上小G蛋白家庭成员之一,且作为一种重要的调节肌动蛋白细胞骨架和细胞形态异质性的细胞因子,参与肝纤维化的进程.指出RhoA在肝脏纤维化发生发展过程中起着重要的调控作用,归纳了RhoA通过调节肌动蛋白应力纤维的装配,并通过级联放大效应影响细胞基质的合成和收缩,终影响肝纤维化的进展.就RhoA在肝纤维化过程中的机制以及RhoA作为潜在的治疗靶点作一综述.
关键词： 肝硬化 ρA GTP结合蛋白质 rho相关激酶类
