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ITIH4基因表达下调对卵巢上皮性癌细胞生物学功能的影响
目的 探讨ITIH4基因表达下调对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生物学功能的影响.方法 设计4对ITIH4基因小分子干扰RNA(siRNA)片段,分别为ITIH4-546、ITIH4-795、ITIH4-917和ITIH4-1568,脂质体法瞬时转染ITIH4 mRNA高表达的卵巢癌细胞系HO8910pm细胞,荧光定量逆转录(RT) PCR技术检测转染后HO8910pm细胞中ITIH4 mRNA的表达,选择佳沉默效应的siRNA干扰片段(即ITIH4-917),构建重组表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ITIH4-917质粒,转染H08910pm细胞,氨基糖苷类抗生素(G418)筛选,获得稳定转染细胞系pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ITIH4-917-HO8910pm细胞,用于以下实验.实验分为3组,即重组表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ITIH4-917质粒转染HO8910pm细胞组(ITIH4-917转染组)、空载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA质粒转染HO8910pm细胞组(空载体组)、阴性对照载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ITIH4-NC质粒转染HO8910pm细胞组(阴性对照组),采用荧光定量RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检测3组细胞中ITIH4 mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测3组细胞的增殖情况[以吸光度(A)值表示],流式细胞仪检测3组细胞的细胞周期比例,体外集落形成实验检测3组细胞的集落形成情况,穿膜(transwell)小室体外侵袭实验检测3组细胞的体外迁移、侵袭能力(以A值表示).结果 荧光定量PCR技术检测显示,ITIH4-546、ITIH4-795、ITI H4-917和ITIH4-1568瞬时转染后,HO8910pm细胞中ITIH4 mRNA的表达水平分别为1.24±0.74、0.30±0.09、0.26±0.15和0.71±0.35,以ITIH4-917瞬时转染后HO8910pm细胞中ITIH4 mRNA表达水平低,故选择ITIH4-917用于以下实验.荧光定量RT-PCR技术检测显示,ITIH4-917转染组细胞中ITIH4 mRNA的相对拷贝数为0.34±0.10,明显低于空载体组(1.87±0.12,P=0.008)和阴性对照组(1.58 ±0.21,P=0.032)；蛋白印迹法检测显示,ITIH4-917转染组细胞中ITIH4蛋白的相对表达水平为0.51,明显低于空载体组(1.64,P=0.012)和阴性对照组(1.74,P=0.014).MTT比色法检测显示,ITIH4-917转染组细胞的增殖速度明显快于空载体组和阴性对照组,分别比较,差异均有统计学意义(P =0.001).流式细胞仪检测显示,ITIH4-917转染组细胞S+G2/M期细胞的比例为54.2％,明显高于空载体组和阴性对照组(分别为26.3％和31.3％,P＜0.05).体外集落形成实验检测显示,ITIH4-917转染组细胞的集落形成率为(55.7±0.7)％,明显高于空载体组[(29.7±0.9)％,P=0.037]和阴性对照组[(31.4±0.3)％,P=0.043].体外迁移和侵袭能力实验显示,ITIH4-917转染组细胞的迁移能力为0.40±0.18,明显高于阴性对照组(0.30±0.03,P=0.031)和空载体组(0.25±0.03,P=0.028)；ITIH4-917转染组细胞的侵袭能力为1.31±0.34,虽高于阴性对照组的1.05±0.68和空载体组的1.14±0.08,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 采用siRNA干扰片段对卵巢癌细胞中ITIH4基因进行干扰,有效地抑制其ITIH4基因的表达,并使卵巢癌细胞的增殖速度加快、迁移能力增强.
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分泌蛋白Periostin在呼吸系统疾病中的研究现状
分泌蛋白（Periostin）是由白介素-4、白介素-13及转化生因子-β等诱导上皮细胞、成纤维细胞等分泌的细胞外间质蛋白，是参与及推动Th2型免疫应答的重要细胞因子，在组织重建中起着重要作用。本文总结了Periostin在上下呼吸道疾病中的新研究现状。
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西维来司钠对烟雾吸入性肺损伤大鼠早期炎症反应的影响
目的 探讨西维来司钠对大鼠烟雾吸入性肺损伤早期炎症反应的影响.方法 40只健康雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、治疗组,治疗组又分为10、20、30 mg/kg组,每组8只.建立大鼠烟雾吸入性肺损伤模型.治疗组分别给予西维来司钠10、20、30 mg/kg腹腔注射,模型组给予等量生理盐水.24 h后用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、髓过氧化物酶(MPO)、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,同时测定各组大鼠肺组织含水量,肺组织HE染色后观察,测量比较肺泡间隔厚度.结果 与正常组比较,模型组和治疗组血清中NE、MPO、IL-6、TNF-α水平、肺组织含水量、肺泡间隔厚度均明显升高(均P<0.05);与模型组比较,各治疗组血清NE、MPO、IL-6、TNF-α表达水平、肺组织含水量、肺泡间隔厚度均明显降低(均P<0.05);与20、30 mg/kg组比较,10 mg/kg组血清NE、MPO、IL-6、TNF-α含量、肺组织含水量、肺泡间隔厚度均明显降低(P<0.05).结论 西维来司钠能减轻大鼠烟雾吸入性肺损伤早期炎症反应及肺水肿,其中,10 mg/kg剂量处理效果优于其他剂量.
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中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂对颅脑创伤大鼠血脑屏障通透性和脑水肿的影响
目的：探讨中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）抑制剂对颅脑创伤（TBI）大鼠血脑屏障（BBB）通透性改变和脑水肿的影响。方法将99只大鼠分为对照组、TBI组和干预组（分为6、24、48、72、168 h亚组），复制大鼠液压打击模型，干预组给予西维来司钠，分别测定各组脑组织NE的浓度、BBB通透性和脑组织含水率，并进行比较分析。结果 TBI组和干预组大鼠脑组织NE浓度、BBB通透性和脑组织含水率在各时间点都高于对照组，干预组的NE浓度在24、48、72、168 h低于TBI组，BBB通透性和脑组织含水率在48、72、168 h低于TBI组（P＜0．05）。结论西维来司钠能抑制TBI大鼠脑组织NE的释放，降低BBB的通透性并减轻脑水肿发生，表明西维来司钠对大鼠TBI继发性损伤有保护作用。
