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泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响
目的 观察泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响并初步探讨相关机制.方法 实验采用完全随机设计.将26只SD大鼠分为4组:高氧组(n=8)、高氧+MG-132组(n=8)、空气对照组(n=5)、MG-132对照组(n=5).成功制备高氧肺损伤大鼠模型后,观察肺组织病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达并计算Bcl.2/Bax值.结果 高氧组SD大鼠肺组织可见明显急性炎症反应.高氧组、高氧+MG-132组的凋亡指数分别为66.76±7.64、34.78±4.40,明显高于空气组与MG-132对照组(14.48±1.75、12.88±1.95),但高氧+MG-132组的凋亡指数要低于高氧组,差异有显著性(P<0.05).高氧+MG-132组Bcl-2/Bax值(1.22±0.15)高于高氧组(0.87±0.11),差异有显著性(P<0.05).结论 高氧诱发肺组织细胞发生凋亡,蛋白酶体抑制剂MG-132可以通过调节Bcl-2与Bax的表达减轻高氧引起的细胞凋亡.
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MG132对早期糖尿病大鼠视网膜病变过程中NF-κB及IκB表达的影响
目的 观察泛素蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠早期糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)过程中核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)以及其抑制性信号蛋白IκB激酶的降解调控作用,探讨泛素蛋白酶体系统在DR中的作用机制.方法 选择健康成年雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、DR安慰剂组、DR+MG132低浓度干预组、DR+MG132高浓度干预组.DR+MG132低浓度干预组按0.05 mg·kg-1每天1次腹腔注射MG132 DMSO液,DR+MG132高浓度干预组按0.10 mg·kg-1每天1次腹腔注射MG132 DMSO液.分别于给药后6周和8周检测大鼠体质量、血糖,并制备视网膜石蜡切片,采用免疫组织化学法分析NF-κB以及其抑制性信号蛋白IκB在各组大鼠视网膜中的表达.结果 NF-κB p65在DR安慰剂组的表达较正常对照组明显增强,在MG132高浓度干预组的表达强度较DR安慰剂组减弱;IκBα在DR安慰剂组的表达较正常对照组显著减弱,MG132高浓度干预组的表达强度较DR安慰剂组增强,差异均有统计学意叉(均为P<0.01).相反,MG132低浓度干预组中NF-κB p65以及IκBα的表达强度与DR安慰剂组相比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05).结论 泛素蛋白酶体系统通过调控NF-κB及IκBα的表达而影响DR的发生、发展.泛素蛋白酶体抑制荆MG132通过抑制IκB的泛素化降解,阻断NF-κB的激活,从而能旱期干预DR.
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泛素-蛋白酶体抑制剂对大鼠肺成纤维细胞凋亡和增殖的影响
目的:探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠肺成纤维细胞凋亡和增殖的影响,并初步探索其机制.方法:18只SD大鼠随机分成模型组(n=9)与对照组(n=9),模型组气管内一次性注入博莱霉素(5 mg/kg),对照组气管内注入等量无菌生理盐水,分别于7,28,45 d每组处死动物3只,提取成纤维细胞进行培养并用相同浓度的MG-132(1.0μmol/L)对成纤维细胞干预24 h,应用MTT比色法检测细胞增殖情况,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用免疫组化技术半定量观察成纤维细胞α-平滑肌动蛋白( α-SMA)和NF-κB的表达情况.①MG-132对模型组成纤维细胞的抑制和促凋亡的作用强于对照组成纤维细胞(P＜0.05),其中,对7d模型组成纤维细胞的促凋亡作用强；②MG-132干预后,模型组成纤维细胞α-SMA和NF-κB的表达逐渐减少,但仍高于对照组成纤维细胞(P＜0.05).结论:泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对肺成纤维细胞有抑制和促凋亡作用,可能与减少肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化及抑制NF-κB的表达有关.
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MG132对草酸钙肾结石模型TGF-β1及EMT的影响
目的 探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG132对草酸钙肾结石模型转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路及上皮间质转化(EMT)的影响.方法 MDCK培养后分为3组(空白对照组、草酸组、草酸+MG132组)分别予以相应干预.运用Western blot蛋白印迹分析检测上皮钙黏蛋白(E-Cadherin) 、N-钙黏着蛋白(N-Cadherin) 、兔抗人波形蛋白(Vimentin) 、TGF-β1 、Smad7的表达.采用细胞可渗透性荧光探针2′-,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)测量细胞活性氧(ROS)水平.结果 草酸会使 TGF-β1 、N-Cadherin 、Vimentin表达量增加,使Smad7 、E-Cadherin表达下降. M G132会降低草酸引起的细胞ROS的增加.结论 泛素蛋白酶体抑制剂MG132通过抑制TGF-β1/Smad通路、影响肾小管上皮细胞的转分化从而发挥抗肾间质纤维化作用.
