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miR-214、miR-503在上皮性卵巢癌组织及血清外泌小体中表达的研究
目的 检测正常卵巢、化疗敏感上皮性卵巢癌(EOC)及化疗耐药EOC组织及血清外泌小体中p53相关miR-214、miR-503的表达差异,初探p53相关miRNA与EOC耐药的关系.方法 采用免疫荧光法检测正常卵巢、化疗敏感EOC及化疗耐药EOC组织中p53的表达;RT-PCR法检测血清外泌小体及上述3种组织中p53相关miR-214、miR-503表达的差异.结果 免疫荧光法发现,与正常组织相比,p53在EOC组织中荧光较弱,其中化疗耐药EOC组织与化疗敏感EOC组织间比较差异无统计学意义(P﹥0.05).与敏感组相比,耐药组血清外泌小体中miR-214上调3倍,miR-503下调3倍,与组织中变化一致.结论 p53相关miR-214及miR-503由外泌小体携带进入血液循环,并可能在EOC化疗耐药中发挥重要作用.
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miR-503对辐射诱导U937细胞CD40表达的调控作用
目的 探讨miR-503在U937细胞中与CD40的靶向关系,并观察其对辐射诱导U937细胞CD40表达的调控作用.方法 将miR-503序列插入载体pcDNA-DEST-47中构建真核表达质粒；同时构建CD40基因3’-UTR-荧光素酶报告质粒,与pcDNA-DEST-miR-503质粒共转染至U937细胞,分析miR-503对其调控作用；同时用miR-203和miR-29b作为对照,观察miR-503对CD40的靶向作用.采用Western blot方法,证实miR-503对CD40蛋白表达的抑制作用及照射后U937细胞CD40蛋白表达变化；采用Real-Time PCR方法检测5 Gy电离辐射照射后U937细胞miR-503表达量.结果 psiCHECK2-CD40和pcDNA-DEST-miR-503两种质粒共转染组的荧光素酶表达明显低于单独转染的空载体和靶基因CD40组(t=3.16,P＜0.05),miR-203和miR-29b不能抑制CD40荧光素酶活性,而miR-503明显抑制CD40荧光素酶活性(t=5.25,P＜0.01)；转染pcDNA-DEST-miR-503质粒后在U937细胞中,靶基因CD40蛋白的表达受抑制.5 Gy电离辐射照射后,U937细胞中miR-503表达量上调(t =3.63 ～17.00,P＜0.01),而CD40蛋白表达下降.结论 miR-503与CD40可能是靶向关系,并参与其调控作用.辐射上调人急性白血病细胞株U937细胞的miR-503的表达量,而且抑制CD40蛋白表达,说明miR-503可能参与辐射对肿瘤细胞CD40蛋白表达的调控作用.
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BCYRN1调控miR-503通过Notch1信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响
目的:探讨BCYRN1调控miR-503通过Notch1信号通路对肺癌迁移和侵袭的影响机制.方法:qPCR检测不同肺癌细胞株中BCYRN1和miR-503的表达情况;免疫荧光和qPCR检测慢病毒BCYRN1+siRNA转染肺癌细胞的转染效率;双荧光素酶报告基因检测BCYRN1与miR-503的相互作用;Transwell侵袭实验和划痕实验检测沉默BCYRN1后肺癌细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot检测沉默BCYRN1后Notch1信号通路蛋白的表达情况;裸鼠皮下成瘤检测沉默BCYRN1后肺癌细胞裸鼠体内成瘤能力的影响.结果:在肺癌细胞H1299中BCYRN1表达水平高,miR-503的表达水平相对较高;免疫荧光及mRNA水平证明BCYRN1+siRNA慢病毒可以有效转染进入H1299细胞内;BCYRN19能与miR-503的3′-UTR特异性结合;沉默BCYRN1可以抑制肺癌H1299细胞的侵袭和迁移能力;沉默BCYRN1后Notch1通路蛋白表达情况相应下调;与NC组相比,BCYRN1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小.结论:BCYRN1可以靶向调节miR-503通过Notch1信号通路影响肺癌H1299细胞的侵袭和迁移能力.
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RANKL/RANK/OPG系统与绝经后骨质疏松模型的研究
绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteopo-rosis，PMOP）是指绝经后的妇女由于卵巢功能减退，雌激素不分泌或者分泌过少，骨吸收大于骨形成，形成高转化型的骨质疏松特点。临床研究[1-2]发现：>60岁的女性发病率高达24%，中老年女性诊断为骨质疏松是男性的3倍。绝经后骨质疏松模型是通过切除动物的卵巢，造成雌激素分泌减少，来模拟PMOP。雌激素的减少破坏了骨吸收和骨形成的平衡，而RANKL/RANK/OPG系统存在于骨吸收过程中，必然受到雌激素的影响。因此，本文主要针对RANKL/RANK/OPG系统与绝经后骨质疏松动物模型的成果进行研究，现综述如下。
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miR-424和miR-503对人直肠癌细胞系增殖的影响
目的 探讨miR-424和miR-503对人直肠癌细胞株SW620和SW480细胞增殖的影响,并筛选其靶基因.方法 直肠癌细胞株SW620和SW480分为SW480组、SW480 miR-424组、SW480-miR-503组、SW620组、SW620-miR-424组、SW620-miR-503组;SW480组和SW620组细胞正常培养,SW480-miR 424组、SW480 miR-503组、SW620-miR-424组和SW620-miR-503组细胞分别采用慢病毒载体pSLIK-Zeo构建miR-424和miR-503直肠癌细胞系;SW620细胞系各组于不同培养时间进行细胞计数并绘制细胞生长曲线;采用荧光定量PCR法检测SW480组、SW620组细胞中miR-424和miR-503表达水平;采用RNA-seq法筛选miR-424和miR-503的靶基因,并采用Western blot对靶基因进行验证.结果 miR-424和miR-503在SW480细胞中呈高表达,在SW620细胞中呈低表达;SW480组miR-424-3p(9.572±2.171)、miR-424-5p(13.891±1.124)和miR-503(6.792±1.412)表达水平高于SW620组(1.026±2.874、1.103±0.411、0.984±0.847),差异有统计学意义(P＜0.01);各时间点SW620-miR-424组和SW620-miR-503组细胞数量均少于SW620组(P＜0.01),SW620 miR-503组少于SW620-miR-424组(P＜0.01);RNA-seq测序分析结果显示,SW620和SW480细胞共有1 413个差异表达基因,其中有50个肿瘤标志物,WEE1蛋白为极高表达者,miR-424和miR-503均可与WEE1的3'UTR序列结合,且miR-424的结合能力高于miR-503;SW620组细胞WEE1蛋白表达水平(8.69±3.24)高于SW480组(5.94±2.37) (P＜0.01),SW480-miR-424组和SW480-miR-503组细胞WEE1蛋白表达水平(2.19±1.72、3.45±2.16)明显低于SW480组(P＜0.01),SW620-miR 424组和SW620-miR-503组细胞WEE1蛋白表达水平(4.31±2.63、5.37±3.25)明显低于SW620组(P＜0.01).结论 miR-424和miR-503抑制细胞周期检查点激酶WEE1的表达,进而调节细胞的增殖能力,参与肿瘤发生、发展过程.
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miR-503对肝癌细胞表达甲胎蛋白的影响
目的 研究miR-503对肝癌细胞表达甲胎蛋白(AFP)的影响.方法 培养L-02细胞及MHCC97L细胞,根据干预方式分为六组:L-02组,L-02+miR-503 mimics组,L-02+miR-503 inhibitors组,肝癌细胞MHCC97L组,MHCC97L+miR-503 mimics组,MHCC97L+miR-503 inhibitors组.采用Western blot及PCR观察miR-503抑制剂inhibitors和类似物mimics处理后各组细胞中AFP的表达量.结果 MHCC97L组中AFP表达高于L-02组;在L-02细胞组,给予miR-503 inhibitors处理组的AFP表达较对照组上调;在MHCC97L细胞组中,给予miR-503 mimics处理组的AFP表达较对照组下调,inhibitors组表达较对照组表达上调.结论 miR-503可下调肝癌细胞中AFP表达,从而抑制肝癌细胞.
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MiR-503靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性
目的:探讨miR-503是否能通过调控bcl-2的表达增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性.方法:采用实时荧光定量PCR检测肝癌细胞中miR-503和bcl-2 mRNA的表达水平;Western印迹观察肝癌细胞中Bcl-2蛋白的表达水平;脂质体转染法将miR-503模拟物瞬时转染至BEL-7402细胞;生物信息学软件预测miR-503潜在靶基因;双荧光素酶活性验证miR-503潜在的靶位点;MTT法检测细胞药物敏感性的改变.结果:相比于HL-7702细胞,miR-503在BEL-7402细胞中表达水平下调,Bcl-2蛋白的表达水平上调;miR-503能够与bcl-2靶向结合,下调bcl-2的表达;miR-503转染组的细胞活力较miRNA阴性对照组显著降低.结论:MiR-503可能通过靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的药物敏感性,抑制肝癌细胞增殖.
关键词： miR-503 Bcl-2 Bel-7402细胞 顺铂 -
m iR －503在结直肠癌组织细胞中的表达及其对增殖和诱导细胞凋亡的影响
目的：探讨miR－503在结直肠癌中的表达与功能。方法通过实时定量聚合酶链反应检测结直肠癌组织、癌旁组织及细胞系（ CaCo2、SW480、HCT－116、HT29、SW620）中miR－503的表达水平。用MTT比色法评估细胞增殖情况，用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布情况。结果与癌旁组织相比，miR－503在结直肠癌组织及细胞系中表达显著降低（P＜0.05）。 miR－503在结直肠癌细胞中的过表达明显抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡（P＜0.05）。结论 miR－503在结直肠癌组织及细胞系中的表达明显降低。此外，miR－503对结直肠癌细胞起到抑制增殖、诱导凋亡的作用。
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miR-503通过靶定IGF-1R基因抑制胃癌生长与侵袭
目的 探讨miR-503在胃癌细胞生长及侵袭中的作用,并探索其相关分子机制.方法 利用Real-time PCR检测人胃癌及癌旁组织miR-503及IGF-1R的mRNA表达情况.在人胃癌细胞系MGC-803和SGC-7901中瞬时转染miR-503模拟物和模拟物对照,运用平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测miR-503的作用.在MGC-803和SGC-7901中转染IGF-1R干扰RNA和对照siRNA,利用Western blot检测IGF-1R蛋白表达情况,并进一步检测IGF-1R对细胞克隆形成和侵袭能力的影响.结果 miR-503在胃癌中呈现低表达(P＜0.01),IGF-1R的mRNA呈现高表达(P＜0.01).与对照组细胞相比,转染miR-503模拟物的细胞克隆数目明显减少(P＜0.01),发生侵袭的细胞也减少(P＜0.01),IGF-1R蛋白水平降低.转染IGF-1R干扰RNA的细胞中IGF-1R蛋白水平较对照组降低,且克隆形成和侵袭能力较对照组明显降低(P＜0.01).结论 miR-503可以通过靶定IGF-1R基因调控胃癌细胞的生长和侵袭,发挥抑癌作用,具有作为胃癌分子治疗和预后靶标的潜能.
