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SLC-Her-2/neu-P53-Fc融合基因重组腺病毒表达载体的构建及检测
目的：构建携带融合基因SLC-Her-2/neu-P53-Fc（SLC-HP-Fc）的重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc表达载体。方法提取SLC-HP基因及含Fc段基因的质粒构建携带目的基因的腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-SLC-HP-Fc ，经酶切线性化后转入含有pAdEasy-1质粒的E.coli BJ5183中进行同源重组，得到重组腺病毒真核表达载体AdEasyTM-SLC-HP-Fc。线性化后的病毒表达载体通过脂质体Lipofectamine 2000转染293细胞，通过包装扩增并经PCR鉴定后得到大量复制病毒并纯化保存。结果得到重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc ，成功转染293细胞出现细胞病变反应，经酶切及PCR法确定目的基因的表达。结论成功构建了SLC-Her-2/neu-P53-Fc融合基因重组腺病毒表达载体，并建立了重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc种子病毒库和工作病毒库，为进一步研究该融合基因与肿瘤相关作用奠定了实验基础。
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SLC-Her-2/neu-p53-Fc融合基因重组腺病毒真核表达载体对荷黑色素瘤小鼠的免疫治疗效果
目的 扩增纯化携带融合基因SLC-Her-2/neu-p53-Fc(SLC-HP Fc)的重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体,研究其对荷黑色素瘤小鼠的免疫治疗效果.方法 将重组腺病毒真核表达载体AdEasyTM-SLC-HP-Fc在人胚肾293细胞中扩增、纯化;向小鼠皮下注射表达Her-2/neu-p53融合基因的B16F10-psig-Her-2/neu p53细胞(B16-HP细胞)建立荷黑色素瘤小鼠模型;将小鼠随机分成对照组、肌肉注射组和皮下注射组,用重组腺病毒AdEa-syTM-SLC-HP-Fc真核表达载体进行治疗,观察肿瘤生长情况,测定细胞毒性活性、血清p53抗体.结果 纯化后重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体滴度8×108 pfu/mL.目的基因SLC-HP在小鼠体内成功表达.重组腺病毒AdEasyTM SLC-HP-Fc真核表达载体高剂量肌肉注射能有效抑制小鼠肿瘤的生长,瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P=0.005),抑瘤率达到98.8％,细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的特异性杀伤力有明显提高.结论 重组腺病毒AdEasyTM-SLC-HP-Fc真核表达载体高剂量肌肉注射能延长出瘤时间,抑制肿瘤的生长.
