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子宫内膜癌组织LASP1表达与预后相关性
目的 LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1,LASP1)作为一种肌动蛋白结合蛋白,在调控伪足延伸及细胞运动中发挥重要作用,可能作为一种转移相关蛋白参与肿瘤侵袭及转移过程.本研究分析了LASP1在子宫内膜癌组织中表达及其与预后的相关性.方法 选取2012-03-02-2014-03-30湖北省中医院初诊初治子宫内膜癌患者107例,留取正常子宫内膜组织45例作为对照组,采用免疫组化法检测组织中LASP1蛋白表达,利用实时荧光定量PCR技术检测组织中LASP1基因表达,所有患者随访截止到2017-03-31,失访5例,随访率95.33％,利用Kaplan-Meier法分析子宫内膜癌组织中LASP1蛋白表达对预后的影响.结果 子宫内膜癌组织中LASP1蛋白阳性表达率(71.03％)高于对照组(28.89％),差异有统计学意义,χ2=23.178,P<0.05;子宫内膜癌组织中LASP1 mRNA相对表达量为2.24±0.16,对照组LASP1 mRNA相对表达量为1.14±0.11,差异有统计学意义,t=42.872,P<0.01;子宫内膜癌组织中LASP1蛋白和mRNA相对表达量与FIGO分期、分化程度、肌层浸润和淋巴结转移有关(χ2值分别为4.929、4.873、5.319和7.896,t值分别为12.380、10.482、14.427和14.467,均P值<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,LASP1蛋白阳性表达组患者平均生存时间37.84个月,LASP1蛋白阴性表达组患者平均生存时间50.81个月,Log-rank检验差异有统计学意义,χ2=4.315,P<0.05.结论 LASP1在子宫内膜癌组织中呈高表达,与肿瘤病理特征和预后有关.
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人肝癌细胞LASP1启动子的克隆及其核心调控区域的初步鉴定
目的:克隆人肝癌细胞的LASP1基因的启动子区域并找出该基因启动子的核心调控区域.方法:提取肝癌HepG2细胞总DNA,PCR扩增不同长度的LASP1启动子片段,克隆至PGL3-Basic载体中构建重组表达载体PGL3-P1 (2059 bp)、PGL3-P2(1123bp)、PGL3-P3(909 bp)、PGL3-P4(574 bp)和PGL3-P5 (159 bp),转化入大肠埃希菌(E.coh)DH5α中,提取质粒经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆并测序.将构建的重组表达载体、PGL3-Basic载体分别与内参质粒PRL-Tk共转染HepG2细胞,48 h后经双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测其活性.结果:PCR结果、双酶切结果以及DNA测序结果表明成功构建了LASP1启动子荧光素酶报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与PGL3-Basic组相比,重组载体PGL3-P1、PGL3-P2、PGL3-P3、PGL3-P4均具有较强的启动子活性(P＜0.01),其中,PGL3-P4的活性强.结论:成功构建了人肝癌细胞不同截断长度的LASP1基因启动子荧光素酶报告基因载体,确定了LASP-1基因启动子的核心区域(-581 bp～-8 bp),为进一步研究LASP1基因在肝癌细胞中表达的关键调节因素及分子机制奠定了基础.
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干扰LASP1基因表达对胃癌细胞BGC823增殖、迁移及侵袭能力的影响
背景与目的:LASP1是一种新的肌动蛋白结合蛋白,参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移,在多种恶性肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关.但目前LASP1在胃癌发生、发展中的作用少见报道.该研究旨在探讨LASP1在胃癌增殖和侵袭中的作用及分子机制.方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测LASP1在不同胃癌细胞系中的表达,应用RNA干扰技术抑制BGC823细胞中LASP1的表达,采用RTFQ-PCR和Western blot检测转染后LASP1的表达,应用体外增殖、迁移和侵袭实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过F-actin聚合实验检测细胞的F-actin的聚合能力,采用Western blot检测转染前后BGC823细胞中Akt的磷酸化情况.结果:LASP1在胃癌BGC823细胞中高表达.RNA干扰技术沉默LASP1基因后,干扰组与对照组相比,LASP1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降.细胞增殖实验显示,干扰组细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,与对照组相比,干扰组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.05);在干扰组细胞内的F-actin聚合量比对照组减少(P<0.05);在干扰组细胞内Akt磷酸化受到抑制.结论:LASP1的表达降低可以抑制胃癌BGC823细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,LASP1通过调节F-actin的聚合和Akt磷酸化从而影响胃癌细胞的侵袭、转移.
关键词： LASP1 人胃癌BGC823细胞 增殖 迁移和侵袭 -
食管鳞状细胞癌组织中miRNA-1的表达及其作用机制
目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中微RNA-1(microRNA-1,miRNA-1)的表达及其可能的作用机制.方法:分别应用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学法检测55例食管鳞状细胞癌组织及相应的癌旁组织中miRNA-1、LASP1 (LIM and SH3 domain protein 1)mRNA和LASP1蛋白的表达水平.应用生物信息学软件预测miRNA-1的潜在靶基因.将含有LASP1基因3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)的重组双荧光素酶报告载体psiCHECK-2-LASP1与miRNA-1模拟物(miRNA-1-mimic)共转染至食管癌Eca109细胞,通过双荧光素酶报告系统验证miRNA-1的靶基因.将miRNA-1 mimic或miRNA-1抑制物(miRNA-1-inhibitor)分别转染至Eca109细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测细胞中miRNA-1的表达水平,应用蛋白质印迹法检测细胞中LASP1蛋白的表达水平.结果:食管鳞状细胞癌组织中miRNA-1的表达水平低于相应的癌旁组织(P＜0.01),而LASP1 mRNA和蛋白的表达水平高于相应的癌旁组织(P值均＜ 0.05).并且,miRNA-1和LASP1的表达与食管癌患者的淋巴结转移、TNM分期及组织学分级等有关(P值均＜0.05),食管鳞状细胞癌组织中miRNA-1与LASP1蛋白表达水平呈负相关(r=-0.45,P＜0.05).生物信息学软件预测LASP1是miRNA-1的潜在靶基因,双荧光素酶报告系统验证了miRNA-1可与LA5P1基因的3'-UTR特异性结合.转染miRNA-1 mimic后,Eca109细胞中miRNA-1的表达水平上调(P＜0.01),LASP1蛋白的表达水平下调(P＜0.05);而转染miRNA-1 inhibitor后,Eca109细胞中miRNA-1的表达水平下调(P＜0.05),LASP1蛋白的表达水平则上调(P＜0.05).结论:食管鳞状细胞癌组织中miRNA-1低表达,其机制可能与调控靶基因LASP1的表达有关.
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沉默LASP1对口腔鳞癌细胞生物学行为及3种抗肿瘤药物IC50的影响
目的:评价LASP1对口腔鳞癌细胞增殖、转移、侵袭和周期的影响,并对3种抗肿瘤药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛的相关作用进行分析.方法:利用The human protein atlas数据分析LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后的关系.RT-PCR和Western免疫印迹检测LASP1在口腔鳞癌细胞系的mRNA和蛋白表达.慢病毒构建LASP1沉默的HN30稳转细胞株,CCK-8法检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞转移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期变化.建立裸鼠口腔鳞癌肺部转移瘤.CCK-8法分析3种药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛在细胞中的IC50变化.采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后密切相关.LASP1促进口腔鳞癌细胞系HN30增殖、克隆形成、转移和侵袭,促进细胞周期G2/M期过渡.沉默LASP1后,裸鼠肺部转移瘤显著减少,多西他赛IC50显著下调,而顺铂和阿帕替尼IC50无显著变化.结论:LASP1促进口腔鳞癌细胞增殖、平板克隆、转移和侵袭,细胞周期G2/M期过渡,促进裸鼠体内肺转移瘤形成和多西他赛耐药.
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LASP1在鼻咽癌组织中的表达及其临床预后价值分析
[目的]探讨LASP1在鼻咽癌组织中的表达与预后的关系,及其在鼻咽癌中的功能.[方法]免疫组化法检测79例鼻咽癌患者组织标本中LASP1蛋白的表达.Western Blot和Real-time PCR检测鼻咽癌细胞株中LASP1表达.Transwell小室实验明确体外LASP1对细胞迁移和侵袭能力的影响.Kaplan-Meier法分析LASP1表达与患者预后的关系,Cox比例风险回归模型分析LASP1表达在鼻咽癌患者预后预测中的价值.[结果] LASP1在鼻咽癌组织(0.087±0.103)表达显著高于癌旁组织(0.016±0.010)(t=2.154,P=0.034).LASP1在N2～3期(x2=38.406,P＜0.001)与Ⅳ期(x2=4.595,P=0.043)患者表达较N0～1和Ⅱ～Ⅲ期患者更高.LASP1高表达与低表达两组患者总生存(overall survival,OS)、无远处转移生存(distant metastasis free sur-vival,DMFS)和无局部复发生存(relapse free survival,RFS)分别为(114.5±8.5)个月vs(137.5±4.6)个月(P=0.038)、(112.3±9.1)个月vs(140.3±3.8)个月(P=0.009)和(108.6±9.4)个月vs (134.6±5.3)个月(P=0.029).LASP1高表达(HR=4.437,95％CI:1.148～17.415,P=0.031)和TNM分期(HR=5.512,95％CI:1.075～28.254,P=0.041)是患者生存的独立预测因素.LASP1在鼻咽癌细胞株中表达(1.47±0.35)较正常鼻咽上皮细胞株(0.90±0.11)也显著升高(t=4.488,P＜0.001).过表达LASP1的鼻咽癌细胞株与对照组相比,Transwell小室细胞侵袭[(238.7±36.2)vs(48.7±11.6)]、迁移[(571.0±15.7) vs (91.6±20.3)]能力显著增强(P＜0.01).采用特异性shRNA敲低LASP1表达,鼻咽癌细胞体外侵袭[(168.7±14.6) vs (64.3±7.4)]和迁移[(205.0±9.8)vs(79.0±10.5)]能力受到抑制(P＜0.01).[结论]LASP1在鼻咽癌组织和细胞中过表达,与鼻咽癌患者分期相关,且LASP1高表达是患者预后不良因素.体外功能实验表明LASP1发挥促进肿瘤侵袭和迁移功能.提示LASP1在鼻咽癌进展中发挥重要作用,可作为鼻咽癌诊治新的分子靶点.
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LASP1下调和ferritin上调在rhBMP-2诱导的比格犬BMSCs成骨分化中起重要作用
目的 建立稳定的比格犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导成骨分化模型；鉴定参与比格犬BMSCs细胞成骨分化过调控的蛋白质,探讨其可能的调控机制.方法 分离培养比格犬BMSCs细胞,rhBMP-2诱导细胞成骨分化7d,基于蛋白质双向凝胶电泳的蛋白质组学分析成骨分化组与对照组差异表达的蛋白质,对感兴趣的蛋白质LASP1、ferritin轻链和重链表达情况用Q-PCR、Western blot进行验证.结果 成功诱导比格犬BMSCs成骨分化；蛋白质组学分析获得rhBMP-2诱导上调的蛋白质9个,下调的蛋白质11个.荧光定量PCR技术和Western blot对LASP1和ferritin表达情况进行了验证,发现rhBMP-2诱导7d后,LASP1显著下调而ferritin显著上调,与蛋白质组学结果一致.结论 LASP1在调节细胞骨架活性方面发挥重要功能,而ferritin是细胞铁离子稳态维持的重要分子,提示这两种蛋白质在rhBMP-2诱导的比格犬BMSCs成骨分化过程中发挥重要作用.
