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膀胱癌组织MAGE-A3表达变化机制研究
目的 膀胱癌是常见的恶性肿瘤之一,严重危害人类健康.本研究检测膀胱癌组织中黑色素瘤抗原3(mela-noma-associated antigen 3,MAGE-A3)的表达变化并探讨其内在机制,为膀胱癌的防治提供理论基础.方法 收集2013-06-01-2016-05-31武汉科技大学附属武昌医院泌尿外科膀胱癌患者120例,取术中切取的膀胱癌组织和正常膀胱组织(距离肿瘤边缘>3 cm).实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测膀胱癌组织和正常膀胱组织中MAGE-A3,DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)及常染色体组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(euchromatic histone-lysine N-methyltransferase 2,EHMT2)mRNA和蛋白表达变化;巢式降落式甲基化特异性PCR(nested methylated specific PCR,nMS-PCR)检测膀胱癌组织和正常膀胱组织中MAGE-A3启动子区DNA甲基化水平变化;染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,CHIP)检测膀胱癌组织和正常膀胱组织中MAGE-A3启动子区组蛋白H3K9二甲基化(H3K9me2)水平.结果膀胱癌组织中MAGE-A3 mRNA相对表达量为5.41±0.85,蛋白相对表达量为0.76±0.08;正常膀胱组织中MAGE-A3 mRNA相对表达量为0.92±0.15,蛋白相对表达量为0.20±0.07,两组比较差异有统计学意义,t值分别为15.56和15.60,均P=0.001.膀胱癌组织中DNMT1 mRNA相对表达量为0.37±0.10,蛋白相对表达量为0.36±0.10;EHMT2 mRNA相对表达量为0.81±0.09,蛋白相对表达量为0.27±0.08.正常膀胱组织中DNMT1 mRNA相对表达量为1.02±0.25,蛋白相对表达量为0.91±0.15,RNA相对表达量为4.32±0.82,蛋白的相对表达量为1.09±0.17,两组比较差异有统计学意义,t值分别为5.95,9.16,11.58,11.08,均P<0.001.膀胱癌组织中MAGE-A3启动子区DNA甲基化水平为0.27±0.07,H3K9me2水平为0.25±0.13;正常膀胱组织MAGE-A3启动子区DNA甲基化水平为0.73±0.08,H3K9me2水平为0.61±0.24,两组比较差异有统计学意义,t值分别为7.189和3.860,均P<0.001.结论膀胱癌组织中MAGE-A3启动子区DNA甲基化及H3K9me2水平降低使MAGE-A3表达量升高,此机制可能参与膀胱癌的发生发展.
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巨噬细胞LSD1抑制H3K9Me2水平增强动脉粥样硬化中血清炎症因子的表达
目的:检测动脉粥样硬化患者巨噬细胞中组蛋白第9位赖氨酸的二甲基化(histone H3 lysine 9 dimethylation,H3K9Me2)的表达并探究其对炎症因子表达的影响及其机制.方法:选择厦门大学附属东南医院收治的动脉粥样硬化患者(n=20)与健康对照人群(n=22)作为研究对象,采用蛋白免疫印迹方法检测巨噬细胞中H3K9Me2的表达,并通过酶联免疫吸附的方法检测其血清炎症因子表达.随后,通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲减赖氨酸特异去甲基化酶1A(lysine-specific demethylase 1A,LSD1)后,在氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoproteins,ox-LDL)诱导的巨噬细胞中结合白免疫印迹和染色质免疫共沉淀的方法检测细胞整体H3K9Me2的表达及炎症因子启动子区H3K9Me2水平.同时,分析巨噬细胞中上清中炎症因子表达变化.结果:动脉粥样硬化病人巨噬细胞中H3K9Me2水平显著下调,并与血清中炎症因子表达呈负相关.在敲减LSD1后,ox-LDL诱导的巨噬细胞中H3K9Me2整体水平以及炎症因子启动子区H3K9Me2水平下调均被抑制.同时,核因子-κB(NF-κB)结合启动子区介导的炎症因子表达增强也被抑制.结论:巨噬细胞中H3K9Me2的表达与动脉粥样硬化病人血清中炎症因子的表达成负相关,而组蛋白去甲基化酶LSD1很可能在其中参与H3K9Me2水平调控,并通过影响NF-κB与启动子区结合调节炎症因子表达.
关键词： 巨噬细胞 炎症 H3K9二甲基化 组蛋白去甲基化酶LSD1 动脉粥样硬化
