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SEA和喉癌MAGE-A3基因重组真核共表达载体的构建和鉴定
目的 构建超抗原SEA和喉癌来源的MAGE-A3基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达.方法 分别用RT-PCR方法及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMAGEA3-IRES-SEA.经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA、MAGE-A3基因的表达.结果 限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3基因和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组.重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平表达.结论 成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础.
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膀胱癌组织MAGE-A3表达变化机制研究
目的 膀胱癌是常见的恶性肿瘤之一,严重危害人类健康.本研究检测膀胱癌组织中黑色素瘤抗原3(mela-noma-associated antigen 3,MAGE-A3)的表达变化并探讨其内在机制,为膀胱癌的防治提供理论基础.方法 收集2013-06-01-2016-05-31武汉科技大学附属武昌医院泌尿外科膀胱癌患者120例,取术中切取的膀胱癌组织和正常膀胱组织(距离肿瘤边缘>3 cm).实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测膀胱癌组织和正常膀胱组织中MAGE-A3,DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)及常染色体组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(euchromatic histone-lysine N-methyltransferase 2,EHMT2)mRNA和蛋白表达变化;巢式降落式甲基化特异性PCR(nested methylated specific PCR,nMS-PCR)检测膀胱癌组织和正常膀胱组织中MAGE-A3启动子区DNA甲基化水平变化;染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,CHIP)检测膀胱癌组织和正常膀胱组织中MAGE-A3启动子区组蛋白H3K9二甲基化(H3K9me2)水平.结果膀胱癌组织中MAGE-A3 mRNA相对表达量为5.41±0.85,蛋白相对表达量为0.76±0.08;正常膀胱组织中MAGE-A3 mRNA相对表达量为0.92±0.15,蛋白相对表达量为0.20±0.07,两组比较差异有统计学意义,t值分别为15.56和15.60,均P=0.001.膀胱癌组织中DNMT1 mRNA相对表达量为0.37±0.10,蛋白相对表达量为0.36±0.10;EHMT2 mRNA相对表达量为0.81±0.09,蛋白相对表达量为0.27±0.08.正常膀胱组织中DNMT1 mRNA相对表达量为1.02±0.25,蛋白相对表达量为0.91±0.15,RNA相对表达量为4.32±0.82,蛋白的相对表达量为1.09±0.17,两组比较差异有统计学意义,t值分别为5.95,9.16,11.58,11.08,均P<0.001.膀胱癌组织中MAGE-A3启动子区DNA甲基化水平为0.27±0.07,H3K9me2水平为0.25±0.13;正常膀胱组织MAGE-A3启动子区DNA甲基化水平为0.73±0.08,H3K9me2水平为0.61±0.24,两组比较差异有统计学意义,t值分别为7.189和3.860,均P<0.001.结论膀胱癌组织中MAGE-A3启动子区DNA甲基化及H3K9me2水平降低使MAGE-A3表达量升高,此机制可能参与膀胱癌的发生发展.
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膀胱癌组织MAGE-A3表达临床意义研究
目的 膀胱癌是常见的恶性肿瘤之一,严重危害人类健康.本研究检测膀胱癌组织及不同膀胱癌细胞系中黑色素瘤抗原-A3 (melanoma-associated antigen-A3,MAGE-A3)的表达情况,探讨MAGE-A3表达水平与膀胱癌分期、分级及无进展生存期等的关系,分析MAGE-A3的表达水平对不同膀胱癌细胞系增殖的影响.方法 选取2013-06-01-2016-05-31武汉市第一医院泌尿外科膀胱癌患者120例.培养膀胱癌细胞系5367、HT1376及EJ-28.实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测膀胱癌组织、癌旁组织、正常膀胱组织及膀胱癌细胞系中MAGE-A3 mRNA和蛋白表达水平;免疫组化检测MAGE-A3蛋白阳性率;采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲减膀胱癌细胞系中MAGE-A3的表达水平,细胞集落形成实验检测MAGE-A3对细胞活力的影响.结果 膀胱癌组织中MAGE-A3 mRNA的表达水平为3.31±1.28,高于癌旁组织的1.38±0.57和正常组织的0.94±0.36,F=22.85,P＜0.05;膀胱癌组织中MAGE-A3蛋白的表达水平为0.91±0.32,显著高于癌旁组织的0.22±0.07和正常组织的0.16±0.11,F=30.48,P＜0.05.120例膀胱癌患者中,56例膀胱癌组织MAGE-A3蛋白表达阳性,阳性率为46.7％;MAGE-A3 mRNA在5367和HT1376细胞系表达水平较高,在EJ-28细胞未检测到表达.在不同病理分期(x2 =13.718,P=0.008)、病理分级(x2=11.345,P=0.01)和无进展生存期(x2=4.262,P=0.039)之间,MAGE-A3表达量差异均有统计学意义;随病理分期、分级的升高和无进展生存期缩短而升高;敲减MAGE-A3后,5367和HT1376细胞增殖能力明显减弱,EJ-28增殖能力无明显变化.结论 MAGE-A3在膀胱癌组织中高表达,且与膀胱癌分期、分级、无进展生存期及肿瘤细胞增殖活力密切相关,有望成为膀胱癌免疫治疗的靶点.
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CAGE MAGE-A1和MAGE-A3去甲基化在胃癌发生发展中的作用
目的:探讨肿瘤相关抗原基因(CAGE)、黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)和黑色素瘤抗原基因-A3(MAGE-A3)启动子区去甲基化状态改变在胃癌早期发生、发展中的作用及意义.方法:87例内镜活检标本分为胃癌组、癌前病变组和正常对照组,应用甲基化特异性PCR方法分别检测各组中3种基因启动子区的去甲基化状态.结果:胃癌组、癌前病变组和正常对照组中,各基因启动子区的去甲基化阳性率分别为:CAGE:80.0%(24/30)、37.5%(12/32)和4.0%(1/25);MAGE-A1:60.0%(18/30)、21.9%(7/32)和0(0/25);MAGE-A3:46.7%(14/30)、12.5%(4/32)和8.0%(2/25),呈下降趋势.3种基因启动子区去甲基化阳性率在3组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).30例胃癌至少发生1种基因启动子区去甲基化的有27例;至少发生2种基因启动子区去甲基化23例;7例同时发生了3种基因启动子区的去甲基化.结论:这3种基因启动子区去甲基化改变可能发生于胃癌发病早期,且贯穿于胃癌发生、发展的全过程并起到一定的作用,联合检测可能有助于提高胃癌去甲基化诊断的阳性率.
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MAGE-A3在非小细胞肺癌中的临床研究进展
人体正常的组织细胞在进行新陈代谢同时,在内外环境刺激和影响下,某些组织会出现过度增生或异常分化,失去自身调节的控制,而发生肿瘤.根据WHO的预测,肺恶性肿瘤发病率及病死率逐年上升,至2025 年我国每年新增将 >100例[1].非小细胞肺癌为肺癌的主要病理类型,非小细胞肺癌患者出现临床症状就诊时,Ⅰ和Ⅱ期患者占20% ~30%,Ⅲ期占40% ~50%,Ⅳ期占30%.大部分患者在发现并确诊时已属中晚期,且手术治疗的几率已明显降低,即便采用综合治疗,患者5年生存期仍达不到预期.近年国内外将治疗的焦点转向免疫治疗,并从免疫治疗中找到了治疗癌症的新靶点:MAGE-A3.
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肿瘤抗原MAGE-A3新的HLA-A2限制性CTL表位的发现与鉴定
目的:鉴定肿瘤抗原MAGE-A3新的HLA-A2限制性CTL表位.方法:采用CTL表位预测的基序法与二级锚点相结合预测MAGE-A3的HLA-A2限制性CTL表位;用计算机分子模拟进行表位的初步筛选;以标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性.结果:在所筛选的4个候选CTL表位中,MAGE-A3201-209可在体外有效诱导特异性ETLs的产生,杀伤靶细胞.结论:MAGE-A3201-209为肿瘤抗原MAGE-A3的新的HLA-A2限制性CTL表位.为基于MAGE-A3的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计、研究奠定了基础.
关键词： 肿瘤抗原 MAGE-A3 黑色素瘤 细胞毒性T淋巴细胞表位 鉴定 -
肿瘤相关抗原MAGE-A3的研究进展
肿瘤相关抗原MAGE-A3广泛表达于多种恶性肿瘤,而在正常组织中(除睾丸和胎盘外)不表达.该抗原经抗原递呈细胞加工后能被HLA I类或II类分子递呈,引起针对MAGE-A3表达阳性的肿瘤细胞的特异性免疫.近年来,MAGE-A3抗原已被广泛应用于肿瘤的诊断和免疫治疗,本文就MAGE-A3抗原在肿瘤中应用做一综述.
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Mage-A3抗原肽负载DC过继免疫治疗乳腺癌的实验研究
目的研究Mage-A3抗原肽负载DC对小鼠乳腺癌的治疗作用.方法体外培养小鼠骨髓来源的DC, 并经孵育携带Mage-A3抗原肽,在乳腺癌小鼠模型中进行试验性治疗.结果治疗组与对照组肿瘤体积差异显著(P《0.05), 冻融上清负载组和Mage-A3抗原肽负载组没有显著性差异.结论负载Mage-A3抗原肽的DC可以诱导特异性的CTL免疫应答,对小鼠乳腺癌有良好的免疫治疗作用.
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MAGE-A1、MAGE-A3基因在人舌鳞癌中的表达及其临床意义
目的从mRNA水平观察肿瘤特异性抗原MAGE(黑色素瘤抗原基因)-A1及MAGE-A3基因在人舌鳞癌组织中的表达情况,以评价MAGE-A1、MAGE-A3基因作为舌鳞癌的免疫学检测、免疫和基因治疗的分子标志物的可行性.方法提取38例舌鳞癌、10例牙龈瘤病变组织和10例癌旁口腔正常组织标本中的总RNA,逆转录合成cDNA,而后应用RT-PCR法扩增其中的MAGE-A1,MAGE-A3目的基因片段,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(G3PDH)基因作为内对照,经琼脂糖电泳确认.分别采用Mann-Whitney Test检验和Fisher's Exact Test检验对舌鳞癌不同病理分型、淋巴结转移与否的MAGE-A1,MAGE-A3的表达差异进行统计学分析.结果在38例舌鳞癌中MAGE-A1基因表达23例(60.5%);MAGE-A3基因表达26例(68.4%);两者均有表达13例(34.2%).MAGE-A1和/或MAGE-A3基因表达共36例(94.7%),MAGE-A1、MAGE-A3基因均不表达2例(5.3%).低分化鳞癌患者两种基因同时表达的阳性率(53.3%)明显高于高分化者(9.1%).在10例牙龈瘤和10例癌旁正常组织中未见MAGE-A1、MAGE-A3基因表达.结论舌鳞癌组织中MAGE-A1,MAGE-A3基因均有较高表达.提示MAGE基因可以作为检测舌鳞癌的分子标志物,且具有免疫、基因治疗特异性靶位的潜在价值.
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肺癌患者MAGE-A3抗原表达及HLA-I类基因分布的初步研究
目的检测MAGE-A3抗原在肺癌组织中的表达情况以及HLA-I类基因在肺癌患者中的分布水平,以预测能够应用以MAGE-A3抗原蛋白为基础的肿瘤疫苗进行肿瘤免疫治疗的肺癌患者的比例.方法用SDS-PAGE和Western blot方法检测63例肺癌及其癌旁组织MAGE-A3抗原的表达情况;用PCR-SSP方法检测70例肺癌及癌旁组织HLA-A1、A2、A24的分布频率.结果 63例肺癌患者中有31例为MAGE-A3抗原表达阳性,其中5例癌旁组织MAGE-A3抗原也为阳性.70例肺癌患者中HLA-A1、A2、A24三个等位基因的分布频率分别为4.28%、54.28%、50.0%;70例癌旁组织中HLA-A1、A2和A24的阳性率分别为4.28%、60.0%和52.86%.三等位基因中任一基因在肺癌组织出现的频率为80%.结论肺癌患者中大约有39%的个体能应用基于MAGE-A3抗原蛋白的肿瘤疫苗进行有效的肿瘤免疫治疗.
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非小细胞肺癌组织中MAGE-A3和MAGE-C2 mRNA的表达
目的:检测肿瘤相关抗原恶性黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A3、MAGE-C2在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,并探讨其临床意义.方法:收集206例NSCLC手术患者肿瘤组织,应用real-time PCR技术检测组织中MAGE-A3、MAGE-C2 mRNA的表达,并分析其与NSCLC患者临床病理特征(性别、年龄、组织学分级、病理类型、淋巴结转移和临床分期)之间的关系.用基因沉默的方法将肺癌A549细胞MAGE-A3下调,观察处理前后MAGE-A3 mRNA表达水平的改变,并分析其对细胞生物学功能(凋亡率、成球率、穿膜细胞数)的影响.结果:MAGE-A3、MAGE-C2 mRNA在NSCLC组织中的表达率分别是73.3%(151/206)和52.9%(109/206);MAGE-A3 mRNA的表达与疾病分期和淋巴结转移有关(P<0.05);不同病理特征的NSCLC组织中MAGE-C2 mRNA的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);MAGE-A3、MAGE-C2 mRNA共表达与年龄和临床分期有关(P<0.05).MAGE-A3表达降低后肺癌A549细胞的成球能力和侵袭转移能力降低(P<0.001).结论:MAGE-A3、MAGE-C2在NSCLC组织中有较高的表达率,两者有望成为肺癌免疫治疗的潜在靶点.
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MAGE-A3抗原在肺癌患者癌及癌帝组织的表达
目的检测MAGE-A3抗原在肺癌组织中的表达情部以及HLA-I类基因在肺癌患者中的分布水平,以预测能够应用以MAGE-A3抗原蛋白为基础的肿瘤疫功进行免疫治疗的肺癌患者的比例.方法用SDS-PAGE和Western blot 方法检测63例肺癌及基癌旁组织MAGE-A3抗原的表达情况.结果 63例肺癌患者有31例为MAGE-A3抗原表达阳性,其中5例例癌旁组织MAGE-A3搞原的也为阳性.结论肺癌患者中大约有49%的个体为MAGE-A3肿瘤特异性抗原阳性表达,且MAGE-A3抗原阳性可能是肿瘤发生过程中的早期事件.
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膀胱癌组织黑色素瘤抗原-A3的表达及其对 核因子Kappa B信号通路的影响
目的 探讨膀胱癌组织中黑色素瘤抗原-A3(MAGE-A3)的表达变化及其对核因子Kappa B(NF-κB)信号通路相关炎症因子表达的影响.方法 依照纳入与排除标准,收集该院膀胱癌患者120例.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测膀胱癌组织中MAGE-A3 mRNA和蛋白的表达变化;ELISA检测膀胱癌组织中NF-κB信号通路相关炎症因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的表达变化;分析MAGE-A3阳性率和炎症因子含量与年龄、性别、肿瘤组织类型及肿瘤分期等的关系;培养膀胱癌细胞系T24,采用小干扰RNA(siRNA)敲减MAGE-A3的表达后,检测NF-κB P65磷酸化水平变化及TNF-α和IL-1β的表达变化.结果 膀胱癌组织中MAGE-A3 mRNA、蛋白及炎症因子的表达水平高于正常膀胱组织,差异有统计学意义(P<0.01);MAGE-A3阳性率及患者肿瘤组织中炎症因子含量与一般临床资料无相关,而与膀胱癌分期呈正相关;siRNA敲减MAGE-A3的表达后,NF-κB p65磷酸化水平及TNF-α和IL-1β的表达水平均降低,差异有统计学意义(均P<0.01).结论 MAGE-A3可能通过NF-κB信号通路调控膀胱癌细胞炎症状态,促进膀胱癌的发生发展.
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MAGE-A3抗原肽负载树突状细胞诱导乳腺癌患者免疫应答的研究
目的研究MAGE-A3抗原肽负载对乳腺癌患者树突状细胞(DC)的功能的影响,探讨其是否可以在体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答.方法体外培养HLA-A2乳腺癌患者外周血来源的DC,并经孵育携带MAGE-A3抗原肽,用以刺激CTL,用3H-TdR渗入法检测抗原肽负载前后DC刺激同种淋巴细胞增殖能力(MLR),并用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CTL对靶细胞的杀伤效应.结果DC:T为1:10时,单纯DC组刺激能力显著高于抗原肽负载组DC(DC-P)(P＜0.05),但当DC:T低于1:20时后DC-P组刺激能力显著强于单纯DC组(P＜0.05).DC-P组和单纯DC组所激发的CTL对细胞株MCF-7,Sk-Br-3,MDA-MB-435s的杀伤活性有显著性差异,而对细胞株Raji无显著性差异,DC-P组对细胞株MCF-7,Sk-Br-3,MDA-MB-435s的杀伤活性明显高于对细胞株Raji的杀伤活性.结论负载MAGE-A3抗原肽的DC在体外可以诱导乳腺癌患者特异性的CTL免疫应答,为临床以DC为基础的过继免疫治疗的应用提供理论基础.
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探索MAGE-A3和AKAP-4在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 检测癌睾丸抗原(CTA) MAGE-A3 、AKAP-4在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达及意义.方法 应用间接酶免疫组化技术检测MAGE-A3、AKAP-4在45例肺癌组织中的表达情况,分析其与组织类型及淋巴结转移的相关性.结果 45例标本中MAGE-A3、AKAP-4在NSCLC中的敏感度分别为62.2％和73.3％,联合两种抗原可显著提高敏感性,为91.1％ (P＜ 0.05)；MAGE-A3 、AKAP-4在鳞癌中的表达率显著高于腺癌,与性别、年龄、淋巴结有无转移不相关.结论 MAGE-A3、AKAP-4是较好的NSCLC辅助诊断指标,联合应用两种蛋白可提高诊断敏感性.
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MAGE-A3免疫治疗对非小细胞肺癌患者术后辅助治疗的疗效研究
1 文献来源Vansteenkiste JF,Cho BC,Vanakesa T,et al.Efficacy of the MAGE-A3 cancer immunotherapeutic as adjuvant therapy in patients with resected MAGE-A3-positive non-small-cell lung cancer(MAGRIT):A randomised,double-blind,placebo-controlled, phase 3 trial[J]. Lancet Oncol,2016,17(6):822-835.
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急性白血病MAGE-A3基因表达的临床意义
[目的]探讨MAGE-A3基因在急性白血病(AL)的表达及临床意义.[方法]初发AL93例,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)27例、急性髓细胞白血病(AML)66例,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MACE-A3基因的表达,观察该基因表达与初治患者治疗效果关系.[结果]93例AL中MAGE-A3基因阳性表达45例.总阳性率48.4%.其中在ALL、AML的阳性率分别为51.9%和47.0%,两组比较无统计学差异.在非M3型AML患者中,MAGE-A3表达阳性与阴性的完全缓解(CR)率分别为64.0%和92.3%,两者比较有统计学差异(P＜0.05).对表达阳性的21例AL治疗后MAGE-A3基因表达动态观察,当获得CR时,MAGE-A3表达可转阴性,持续阳性者可早期复发;未获CR者可持续表达阳性.[结论]MAGE-A3基因在AL中有一定的表达,在AML和ALL的表达率相仿.MAGE-A3基因阳性非M3型AML治疗CR率较低,MAGE-A3基因阳性表达可作为AML患者预后不良的一项指标.监测MAGE-A3基因表达变化可作为检测微小残留病的有效手段.
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NY-ESO-1和MAGE-A3抗原肽诱导肝癌患者的免疫应答研究
目的 利用合成的HLA-A02限制性NY-ESO-1 p157-165或MAGE-A3 p271-279抗原肽,体外通过抗原递呈细胞诱导HCC患者外周血T淋巴细胞,从而成功诱导出特异性CD8+T淋巴细胞免疫应答.方法 通过SSP方法筛选20例HLA-A*02的HCC患者的HLA亚型;通过逆转录多聚酶链反应和测序分析NY-ESO-1和MAGE-A3在肝癌组织中的表达以及多肽表位密集区的核苷酸变异状况;体外用细胞因子培养HCC患者外周血来源的树突状细胞(DC);人工合成HLA-A*02限制性NY-ESO-1 p157-165或MAGE-A3 p271-279多肽,直接或用去除CD8+T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外同T淋巴细胞孵育16 d后,利用Elispot、细胞内细胞因子染色和四聚体实验检测T细胞免疫应答.结果 20例HLA-A*02患者中,NY-ESO-1 mRNA阳性患者为11例,MAGE-A3 mRNA阳性患者12例.中国HCC患者表达的NY-ESO-1和MAGE-A3序列高度保守.经多肽直接或用去除CD8+T淋巴细胞的PBMC或DC递呈,体外活化外周血T淋巴细胞,4例(36.4%)NY-ESO-1阳性HCC患者以及4例(33.3%)MAGE-A3患者产生针对多肽特异性的CD8+T细胞免疫应答.不同HLA-A*02亚型HCC患者可产生针对NY-ESO-1p157-165或MAGE-A3 p271-279抗原肽的免疫应答.结论 NY-ESO-1 p157-165或MAGE-A3 p271-279抗原肽可以诱导出针对抗原肽的特异性CD8+T淋巴细胞免疫应答.提示HLA-A*02限制性的NY-ESO-1 p157-165或MAGE-A3 p271-279抗原肽可以作为有潜力的肝癌免疫治疗疫苗.
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RNA干扰MAGE-A3基因抑制白血病细胞的增殖
目的:探讨RNA干扰MAGE-A3基因对白血病细胞增殖的影响.方法:构建MAGE-A3干扰基因重组质粒载体,转染K562白血病细胞系,观察各组白血病细胞MAGE-A3基因表达及白血病细胞增殖情况.结果:对照组及空白质粒组白血病细胞MAGE-A3基因表达明显增高,而重组质粒组MAGE-A3基因表达显著降低;重组质粒组白血病细胞在24h、48 h及72 h的增殖活性逐渐减弱,且重组质粒组白血病细胞的增殖活性明显低于对照组及空白质粒组白血病细胞.结论:RNA干扰能显著抑制MAGE-A3基因表达并进一步抑制白血病细胞的增殖活性.
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重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3抑制肺腺癌细胞A549侵袭的体外研究
目的:探讨同时携带CRT基因及MAGE-A3基因的重组腺病毒载体转染人肺腺癌细胞A549后基因的表达及其对体外增殖、侵袭、凋亡及血管形成能力的影响.方法:Ad-CRT/MAGE-A3转染A549细胞,转染48h后以Western blotting法检测CRT及MAGE-A3蛋白的表达;MTT法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞增殖的影响;Transwell方法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞侵袭的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞凋亡的影响;小管形成实验检测Ad-CRT/MAGE-A3对血管形成的影响.结果:转染48h,Western blotting结果显示转染Ad-CRT/MAGE-A3的A549细胞能够表达CRT及MAGE-A3蛋白;MTT检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的增殖;Transwell检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的侵袭能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够诱导A549细胞凋亡;小管形成实验结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制血管形成.结论:Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549的增殖及侵袭能力,诱导其凋亡,并能明显抑制血管内皮细胞血管生成,其作用机制可能与CRT及MAGE-A3蛋白同时表达后相互作用有关,提示Ad-CRT/MAGE-A3可以作为潜在的肺癌基因治疗的新方法.
