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戊地昔布对直肠癌Colo320细胞增殖与凋亡的影响
目的 戊地昔布为第2代选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2)抑制剂,主要用于抗炎止痛,已被证实具有拮抗多种肿瘤细胞的作用,但其对直肠癌细胞的作用鲜有报道.本研究探讨其对人直肠癌细胞Colo320增殖与凋亡的影响并探讨其可能的机制.方法 以药物终浓度为0、5、10、25、50、100、200 μmol/L的戊地昔布分别处理Colo320细胞24、48、72及96h后,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测戊地昔布对细胞增殖能力的影响;采用细胞克隆形成实验检测戊地昔布对Colo320细胞克隆形成率的影响;采用流式细胞术检测戊地昔布对细胞凋亡率及细胞周期分布的影响;采用蛋白质印迹实验检测戊地昔布作用后细胞内COX-2蛋白的表达变化,以及凋亡相关蛋白Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2、p38MAPK及P-p38MAPK蛋白的表达变化.结果 CCK 8结果经统计学分析提示,不同浓度(0、5、10、25、50、100、200 μmol/L)戊地昔布分别作用于直肠癌Colo320细胞24、48、72及96 h后,细胞增殖受到不同程度的抑制,并呈时间(r=0.686～0.972,P＜0.001)及浓度(r=0.829～0.976,P＜0.001)依赖性.24、48、72、96h的IC50值分别为582、153、136和61 μmol/L;细胞克隆形成实验显示,戊地昔布处理后细胞克隆形成率由(28.5±1.2)％下降至(3.3±1.0)％,各组比较差异有统计学意义,F=454.227,P＜0.001.流式结果显示,戊地昔布使细胞凋亡率明显增加,由9.3％增加到30.8％,除50 μmol/L组与对照组之间差异无统计学意义(t=3.849,P=0.613)外,其余各组之间差异有统计学意义(F=224.694,P=0.001),但对细胞周期阻滞现象不明显.蛋白质印迹实验结果显示,戊地昔布使细胞内COX-2表达量降低(F=36.771,P=0.002),cleaved Caspase 3/Caspase-3(F=161.097,P＜0.001)、P p38MAPK/p38MAPK(F=104.770,P＜0.001)和Bax/Bcl-2(F=370.001,P＜0.001)比率明显升高.结论 戊地昔布能够抑制直肠癌Colo320细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制COX-2蛋白的表达,调节凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达,及激活MAPK和Caspase信号通路而实现的.
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戊地昔布对直肠癌Colo320细胞迁移及侵袭能力的影响
目的：研究非甾体抗炎药戊地昔布（valdecoxib）对人直肠癌Colo320细胞迁移及侵袭能力的影响，并初步探讨其可能的机制。方法用不同浓度（0、50、100、200μmol／L）的戊地昔布分别处理Colo320细胞24 h，采用划痕及Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力的变化；采用Western blot实验检测戊地昔布作用于Colo320细胞后细胞内环氧化酶－2（COX－2）蛋白的表达变化，并检测与迁移、侵袭相关的基质金属蛋白酶－2（MMP－2）及钙黏附蛋白－E（E－ceherin）的表达变化。结果不同浓度的戊地昔布分别作用于Colo320细胞24 h后，50、100及200μmol／L戊地昔布处理组细胞的迁移率较对照组明显下降，与对照组相比差异具有统计学意义（ F＝399．1，P＜0．01）；Transwell实验结果显示戊地昔布处理组侵袭细胞数较对照组明显减少，与对照组比较差异具有统计学意义（F＝36．5，P＜0．01）；Western blot实验结果显示戊地昔布处理组相对于对照组细胞内COX－2蛋白表达量明显降低（F＝52．04，P＜0．01），E－ceherin表达量增加（F＝60．3，P＜0．01），MMP－2蛋白表达量减少（F＝100．3，P＜0．01）。结论戊地昔布可以抑制直肠癌Colo320细胞的迁移及侵袭能力，其机制可能是通过抑制COX－2的表达实现的。此外，还可能是通过调节与EMT相关的MMP－2及E－caherin蛋白的表达而实现的。
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低温联合紫外照射增强苦参碱诱导Colo320细胞凋亡作用的研究
低温作为一种环境因素,能直接或间接地对细胞的生命活动造成影响.冷冻医疗对于某些良性和恶性肿瘤的治疗,无疑是一种新技术,在一定情况下可取代传统的外科手术、放疗以及其他物理疗法.但由于超低温冷冻损伤肿瘤组织及细胞过程中温度变化范围甚宽,仍会有少数肿瘤细胞存活,引起肿瘤残留和再生,降低了冷冻肿瘤治愈率.
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唑来膦酸对人直肠癌COLO320细胞体外增殖和凋亡的影响
目的 探讨唑来膦酸(Zoledronic acid,ZOL)对人直肠癌细胞株COLO320体外增殖和凋亡的影响,及其诱导凋亡可能的分子机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度ZOL作用不同时间对COLO320细胞增殖的影响,并计算半数致死量(IC5o)及增殖抑制率;采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析ZOL对细胞凋亡的影响;采用Western blotting和实时定量PCR(Real-Time PCR)检测ZOL作用直肠癌COLO320细胞72 h后相关凋亡基因Bad、Bcl-2、Bax和Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平.结果 与对照组相比,ZOL处理组的直肠癌COLO320细胞增殖受到明显抑制,呈剂量和时间依赖性(P＜0.05),24、48、72和96 h的IC5o分别是209.4、103.6、74.1、65.6 μmol/L;且ZOL对COLO320细胞增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性.FCM示不同浓度ZOL处理直肠癌COLO320细胞72 h后的凋亡率较对照组均有不同程度升高,但20 μmol/L浓度组与对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05),其余各组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).ZOL处理72 h后的COLO320细胞凋亡相关基因Bcl-2的表达水平下降,Bax、Bad、Caspase-9的表达升高.RT-PCR显示,Bcl-2 mRNA表达下调,Bax、Bad、Caspase-9 mRNA表达升高.结论 ZOL对人直肠癌COLO320细胞的增殖有抑制作用,对其凋亡有诱导作用.
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黄白抑瘤方对人直肠癌Colo320细胞增殖与PCNA表达的影响
目的 探讨黄白抑瘤方对Colo320细胞增殖与增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.方法 使用不同浓度黄白抑瘤方体外干预Colo320细胞,检测不同浓度黄白抑瘤方对Colo320细胞增殖与细胞周期的影响,检测不同浓度黄白抑瘤方处理后Colo320细胞的PCNA的表达.结果 黄白抑瘤方作用Colo320细胞24h后,经MTT法检测,OD值明显小于对照组,显示不同浓度药物具有不同程度的肿瘤抑制率;黄白抑瘤方作用Colo320细胞48h后,与对照组相比,细胞周期分布发生明显改变,表现为S期细胞比例下降,G0/G1期和G2/M期细胞比例上升,凋亡率明显升高;黄白抑瘤方作用Colo320细胞48h后,与对照组相比,PCNA含量显著减少.结论 黄白抑瘤方能抑制人直肠癌Colo320细胞增殖,从而达到抗肿瘤的作用.
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黄白抑瘤方对人直肠癌Colo320细胞凋亡与Caspase 3及聚ADP核糖聚合酶表达的影响
[目的]探讨黄白抑瘤方对Colo320细胞凋亡与凋亡相关蛋白Caspase 3及聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达的影响,以明确其治疗结直肠癌的生物学基础.[方法]使用不同浓度黄白抑瘤方体外干预Colo320细胞,检测不同浓度黄白抑瘤方对Colo320细胞凋亡的影响,检测其处理后Colo320细胞内凋亡相关蛋白Caspase 3、PARP的表达.[结果]黄白抑瘤方作用Colo320细胞48 h后,Colo320细胞出现了不同程度的亚二倍体凋亡峰,相较对照组细胞的早凋率明显上升(P<0.01);凋亡相关蛋白Caspase 3和PARP表达差异有统计学意义(P<0.01).[结论]黄白抑瘤方能参与人直肠癌Colo320细胞的胞内凋亡通路,诱导细胞凋亡,从而达到抗肿瘤的作用.
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低温联合紫外照射增强苦参碱诱导Colo320细胞凋亡作用的研究
目的 从细胞凋亡角度探讨低温、辐射、中药综合治疗大肠癌的机制.方法 采用Hoechst 33258荧光染色技术,检测低温、紫外线两种物理因素及中药苦参碱分别及联合运用时的Colo320细胞凋亡率.结果 倒置显微镜下均可以观察到细胞凋亡情况.经单纯低温-4℃,0℃,4℃处理,凋亡率为30.98%、31.72%、33.06%;经单纯15W紫外灯下50、100、150cm处照射,凋亡率为35.56%,22.69%,15.08%;经低温与紫外照射共同影响,其凋亡率为42.31%;经低温联合紫外照射及苦参碱共同作用,凋亡率达48.17%.结论 Colo320细胞凋亡反应在低温、紫外照射及苦参碱的共同影响下,其诱导凋亡作用明显提高.
