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白桦脂酸对人NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞影响及机制探讨
目的 观察中药白桦脂酸对人NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞的影响,并初步探讨可能机制.方法 分离健康人外周血单个核细胞,细胞因子诱导培养NK细胞达实验要求;不同浓度(0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.25、12.5、25、50和100 μg/mL)的白桦脂酸分别诱导NK细胞、SW1990胰腺癌细胞48 h后,CCK8法检测白桦脂酸对NK细胞增殖的影响;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测白桦脂酸对SW1990胰腺癌细胞株增殖的影响;流式细胞术(flow cymetory,FCM)检测白桦脂酸作用48 h后NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测白桦脂酸对NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞的影响;蛋白质印迹法检测白桦脂酸对NK细胞表达磷酸化的ERK1/2(phosphorylation-ERK1/2,p-ERK1/2)的影响.结果 培养10 d的NK细胞比例达74.43％.与对照组比较,白桦脂酸在其浓度为0.4、0.8、1.6、3.2、6.25、12.5和25 μg/mL时显著促进NK细胞增殖,F=129.476,P＜0.01;并抑制胰腺癌细胞增殖,F=278.222,P＜0.01.浓度为0.05、0.2、0.8和3.2 μg/mL的白桦脂酸作用NK细胞48 h后,与对照组比较均能促进NK细胞对SW1990胰腺癌细胞的杀伤,F=36.451,P＜0.05.与对照组比较,白桦脂酸在浓度为0.2和0.8 μg/mL时不同程度促进NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达,P＜0.05.与对照组比较,浓度为0.8、3.2和12.5 μg/mL的白桦脂酸可促进NK细胞表达p-ERK1/2,F=83.708,P＜0.05.结论 白桦脂酸在一定的浓度范围内能够增强NK细胞对SW1990胰腺癌细胞的杀伤作用,其作用机制可能通过促进NK细胞增殖,抑制胰腺癌细胞增殖,激活NK细胞内ERK信号通路,提高NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达.
