首页 > 文献资料
-
鸦胆子苦醇抑制结直肠癌细胞增殖与Nrf2通路相关性研究
目的 鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)系苦木科植物鸦胆子果实中提取的一种苦木内酯类化合物,近年来被发现能有效抑制肺癌细胞的Nrf2通路,在抗肿瘤治疗中的应用潜力受到关注.本研究着重探讨BRU对结直肠癌细胞增殖和Nrf2通路的影响.方法 采用不同浓度BRU处理HCT116和HT29细胞,MTT法检测细胞活力,台盼蓝染色观察细胞增殖,Hoechst 33342单染和AnnexinⅤ/PI双染检测凋亡,PI单染检测细胞周期,BrdU免疫荧光法研究DNA的合成,试剂盒法检测细胞内还原性辅酶Ⅱ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)和GSH水平.蛋白质印迹法检测BRU对HCT116细胞Nrf2蛋白表达的影响,QRT-PCR法检测BRU对Nrf2靶基因6-磷酸葡萄糖脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phospho gluconat dehydrogenase,6GPD)、异柠檬酸脱氢酶同工酶1(isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)和苹果酸酶1(malic enzyme 1,ME1)转录水平的影响.结果 MTT结果显示,15～240 nmol/L的BRU处理可降低HCT116细胞和HT29细胞的活力.用60和240 nmol/L的BRU分别处理HCT116和HT29细胞48 h,能显著抑制细胞增殖.BrdU免疫荧光结果显示,BRU处理24 h能显著抑制2种细胞的DNA合成,抑制率分别达到(76.64±6.78)％和(62.87±8.62)％,t值分别为8.615和5.852,P值分别为0.002和0.005.凋亡检测结果显示,BRU在60 nmol/L条件下未明显诱导HCT116细胞凋亡.用60 nmol/L的BRU处理HCT116细胞,能使Nrf2蛋白水平在2和4 h分别减少(48.67±3.21)％和(43.67±11.85)％,t值分别为10.382和2.133,P值分别为0.001和0.025.另外,60 nmol/L的BRU处理8 h还能显著降低结肠癌细胞NADPH和GSH的水平.QRT-PCR法检测结果显示,BRU能在8 h内时间依赖性的抑制HCT116细胞Nrf2靶基因G6PD、6GPD、IDH1和ME1的转录.结论 BRU可以快速而短暂的抑制结肠癌细胞Nrf2信号通路,在不明显诱导细胞凋亡的条件下有效抑制细胞增殖.BRU对结肠癌细胞增殖的抑制作用可能与Nrf2信号通路有关.
-
人结直肠癌细胞HCT116红色和绿色荧光标记肿瘤模型的建立
目的 筛选表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白基因的人的单克隆结直肠癌细胞系,为体内监测肿瘤的早期生长建立一种新的肿瘤动物模型.方法 以脂质体2000介导chicken β-actin-GFP-neo和chicken β-actin-DsRed-neo转染人结直肠癌细胞HCT-116,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达红色和绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养.BALB/CA-nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,活体荧光成像系统观察肿瘤的生长情况.结果 获得了稳定表达GFP、DsRed的人结肠癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长过程,肿瘤的发光随着观察时间的延长而增加.结论 红色和绿色荧光蛋白能够在人结直肠癌细胞HCT-116中长期稳定表达,用红色和绿色荧光蛋白标记的人结直肠癌细胞HCT-116建立的裸鼠肿瘤模型为进一步研究结肠肿瘤和相应的药物筛选提供了一种简便、可行的新方法 .
-
奥曲肽联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞增殖及突变型p53蛋白表达的影响
目的:通过生长抑素类似物奥曲肽(OCT)联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞作用及对p53蛋白的影响为大肠癌的临床治疗提供一定的理论依据.方法:采用结肠癌细胞原代培养,采用MTT比色分析法测定奥曲肽与5-FU联合是否抑制作用增强;流式细胞仪间接免疫荧光技术检测药物作用后的肿瘤细胞突变型p53蛋白表达情况.结果:5-FU和奥曲肽联合应用对大肠癌的抑制率高于单独应用.5-FU和1.0μg/ml OCT组均抑制突变型p53蛋白的表达,联合用药组更为明显.结论:奥曲肽和5-FU都能抑制肿瘤细胞的突变型p53蛋白的表达,且联合应用抑制作用强于两者的单独应用,这可能是奥曲肽能增强5-FU对结肠癌细胞抑制作用的机制之一.
-
南蛇藤总萜诱导自噬抑制结直肠癌细胞增殖的实验研究
目的 :探讨南蛇藤总萜(COE)是否通过诱导自噬来抑制结直肠癌细胞增殖.方法 :用不同浓度的COE处理体外培养的大肠癌HT-29细胞,噻唑蓝(MTT)法检查细胞存活率,透射电镜(TEM)观察细胞形态,免疫印迹法(Western blot)检测COE对细胞自噬相关蛋白表达的影响,并采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合COE干预HT-29细胞,用吖啶橙染色细胞、MTT法检测3-MA对COE抑制HT-29细胞增殖的影响.结果 :COE抑制HT-29细胞的增殖,作用24h的IC50为156μg/mL;随着COE浓度的升高,TEM示细胞中自噬体明显增多,和COE治疗组比较,COE联合3-MA组的细胞生存率升高,而自噬泡(AVO)的数量显著下降,微管相关蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达也降低.结论 :COE可能通过上调Bcl-2同源结构域蛋白抗体-1(Beclin-1)和LC3-Ⅱ的表达来增加HT-29细胞的自噬活性,从而抑制HT-29细胞的增殖作用.
-
细胞穿透肽YARA介导增强型绿色荧光蛋白转导入人结直肠癌细胞的实验研究
目的 构建原核表达载体pET15b-YARA EGFP,表达并纯化出融合蛋白YARA-EGFP,观察其穿透人结直肠癌细胞的情况.方法 用分子克隆技术构建出表达型载体pET15b-YARA-EGFP,在E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白YARA-EGFP,将鉴定和纯化后的融合蛋白加入体外培养的人结直肠癌细胞.结果 得到纯化的融合蛋白YARA-EGFP,能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞,并表现出剂量和时间依赖性,MTT法检测在其高浓度时仍对细胞无毒性.结论 YARA-EGFP融合蛋白能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞.
