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miR-130a靶向调节PTEN基因对人乳腺癌细胞多柔比星敏感性影响的观察
目的:探讨miR-130a对PTEN基因表达的调控,及其与乳腺癌MCF-7细胞株多柔比星耐药的关系.方法:利用miRNA芯片结合RT-qPCR的方法筛选到miR-130a在亲代敏感MCF-7/S细胞与多柔比星耐药细胞(MCF-7/Adr)中表达差异；通过靶基因预测软件预测PTEN与miR-130a基因的关系；通过miR-130a模拟物和抑制物转染实验结合四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、RT-qPCR和蛋白质印迹法观察miR-130a的表达变化对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响及其与PTEN基因表达间的关系.结果:与MCF-7/S相比,miR-130a在MCF-7/Adr中的表达水平明显增高(116834.70±4728.32)倍,t=19.035,P=0.000;但在多西紫杉醇耐药株MCF-7/Doc中的表达差异无统计学意义,t=0.703,P=0.521.MCF-7/S细胞转染miR-130a mimics后,与阴性对照组相比,其miR-130a表达水平明显增高(17.686±1.057)倍,t=8.360,P=0.001；MCF-7/S空白对照组、阴性对照组和实验组对Adr的IC50分别为(0.240士0.099)、(0.181±0.060)和(0.606±0.164) mg/L；与阴性对照相比,转染miR-130a mimics后细胞的IC50显著增高,t=5.200,P=0.007.同时PTEN mRNA和蛋白表达水平明显下调,PTEN mRNA水平是阴性对照组的(0.362±0.076)倍,t=2.927,P=0.043；蛋白表达水平是阴性对照组的(0.386±0.020)倍,t=20.713,P=0.0003；而MCF-7/Adr转染miR-130a inhibitors后,其miR-130a表达水平是阴性对照组的(0.169士0.035)倍,t=12.036,P=0.0002；MCF-7/Adr空白对照组、阴性对照组和实验组对Adr的IC50分别为(50.793士3.970)、(46.206士1.963)和(23.366±1.304)mg/L;与阴性对照相比,转染miR-130a inhibitors后细胞的IC50显著降低,t=16.784,P=0.0007；同时PTEN mRNA和蛋白表达水平均明显上调,PTEN mRNA水平是阴性对照组的(3.564±0.336)倍,t=4.122,P=0.015；蛋白表达水平是阴性对照组的(2.019±0.268)倍,t=8.999,P=0.0008.结论:miR130a可能通过靶定PTEN基因来增强乳腺癌细胞对多柔比星的耐药性.
