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稳定表达RFX6基因肝癌细胞株的建立
目的:建立稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株.方法:构建人源RFX6基因的重组质粒(pLNCX2-RFX6),pVSV-G质粒分别与pLNCX2-RFX6和空载体pLNCX2共转染至GP2-293细胞中进行包装,并用包装的逆转录病毒感染人肝癌QGY-7703细胞株,G418筛选出阳性克隆.RT-PCR和蛋白质印迹法验证稳定细胞株RFX6基因表达情况.采用Image J软件进行灰度值分析比较两株细胞系的差异.结果:在QGY-7703-pLNCX2-RFX6和QGY-7703-pLNCX2细胞中,RFX6/18S mRNA电泳条带灰度比值分别为5.044 0±1.384 0和0.357 2±0.407 9,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/18S是QGY-7703-pLNCX2细胞的14.1倍,差异有统计学意义,t=4.143,P＜0.05;而在两细胞株中,RFX6/GAPDH的蛋白质印迹条带灰度值分别为1.391 4±0.141 3和0.127 8±0.037 3,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/GAPDH是QGY-7703-pLNCX2细胞的10.9倍,差异有统计学意义,t=14.966,P＜0.05.结论:成功构建稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株,为研究RFX6基因在肝癌细胞中的功能奠定了基础.
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三七总苷对肝癌细胞(QGY-7703)中mcl-1L和Bak基因表达水平的初步探索
目的 探讨三七总苷对肝癌细胞QGY-7703中mcl-1L基因与Bak基因表达水平的影响.方法 采用不同浓度三七总苷诱导肝癌细胞,通过实时荧光定量PCR检测mcl-1L基因与Bak基因的表达情况,同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡的改变.结果 三七总苷作用后,肝癌细胞mcl-1L基因的表达受到明显抑制,而Bak基因的表达则出现明显上调,mcl-1 L/Bak呈上升趋势,细胞增殖受到抑制.结论 三七总苷可能通过影响mcl-1L/Bak表达水平影响细胞凋亡.
关键词： 三七总苷 mcl-1L Bak 肝癌细胞QGY-7703
