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annexin Ⅰ基因在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响
目的 探讨annexin Ⅰ基因在胰腺癌发生过程中的作用.方法 通过免疫组化方法确认annexinⅠ基因在胰腺癌组织中的高表达,合成annexin Ⅰ基因的小分子RNA干扰片断(siRNA)及无关序列,并构建RNA干扰片断的重组真核表达载体,将重组真核载体稳定转染胰腺癌细胞.通过RNA干扰(RNAi)的方法,敲低annexin Ⅰ基因在mRNA水平的表达.通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫细胞化学、流式细胞技术和二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法,证实annexin Ⅰ基因的表达被敲低后,对胰腺癌细胞的生长速度、细胞形态、细胞周期、凋亡情况进行观察和检测.结果 敲低annexin Ⅰ基因的表达后,胰腺癌细胞形态发生了显著的变化,呈多形性、空泡样变性以及脂滴形成等,G1期明显延长,出现了明显的凋亡,凋亡率分别为29.8%和18.8%,胰腺癌细胞的恶性表型被抑制.结论 annexinⅠ基因在胰腺癌的发生过程中起到了调控肿瘤细胞周期、促进肿瘤细胞生长增殖和抑制凋亡的重要作用.
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EB病毒潜伏膜蛋白1通过蛋白激酶C调节Annexin Ⅰ的丝氨酸磷酸化
背景与目的:在利用磷酸化蛋白质富集结合蛋白质组学技术分析EB病毒潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)调节的磷酸化蛋白质分子时,我们发现了包括Annexin Ⅰ在内的25个新的受EB病毒LMP1调节的磷酸化蛋白质分子.本实验探讨LMPl调节Annexin Ⅰ磷酸化的信号通路.方法:采用鼻咽癌细胞系CNE1和LMP1稳定表达的细胞系CNE1-LMP1,Western blot检测Annexi Ⅰ的蛋白表达水平;免疫沉淀结合Western blot检测Annexin Ⅰ的丝氨酸和酪氨酸磷酸化;激酶分析实验检测蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的活性.结果:LMP1对Annexin Ⅰ的蛋白表达水平没有影响,LMP1上调Annexin Ⅰ的丝氨酸磷酸化水平,而对酪氨酸磷酸化水平没有影响.在CNE1细胞中PKC的相对活性为0.97±0.05,CNE1-LMP1细胞中的PKC相对活性为1.22±0.10,CNE1与CNE1-LMP1细胞之间PKC的活性差异有统计学意义(P＜0.01,n=6),表明LMP1可以上调PKC活性.Annexin Ⅰ的丝氨酸磷酸化水平随PKC活性的变化而变化.结论:EB病毒LMP1通过PKC信号通路调节Annexin Ⅰ丝氨酸磷酸化.
