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应用cDNA微阵列技术研究EB病毒LMP1介导的鼻咽癌中转移相关基因的表达
探讨EB病毒基因组编码的癌蛋白LMP1对鼻咽癌细胞中转移相关基因表达的影响.采用蛋白质印迹法检测在强力霉素(Dox)诱导下,鼻咽癌细胞系pTet-on-LMP1 HNE2(L7细胞)中LMP1表达的时效和量效关系.应用cDNA微阵列技术建立诱导性LMP1介导鼻咽癌细胞中转移相关基因差异表达谱;运用RT-PCR验证cDNA微阵列筛选差异基因表达的可靠性.与LMP1不表达的L7细胞比较,LMP1高表达的L7细胞中7个基因的表达显著上调,12个基因的表达显著下调.随机选择其中4个基因进行RT-PCR,结果显示,这些基因表达阳性,且与微阵列中的变化趋势一致.LMP1可能通过激活和/或抑制一些转移相关基因的表达而参与鼻咽癌转移过程.
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我国北方地区鼻咽癌患者EB病毒LMP1基因缺失分析
为研究我国北方地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者Epstein-Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)基因C端区缺失状况,探讨其在鼻咽癌发生中所起的作用.收集我国东北地区鼻咽癌石蜡组织22例,非鼻咽癌患者外周血26例,提取DNA后,采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增LMP1基因的C末端,对其中有缺失的4例鼻咽癌进行了克隆和序列分析.结果显示:22例鼻咽癌组织标本中,有19例扩增出特异性条带,阳性率为86%.其中8例存在缺失,缺失率42%.取4例缺失样品进行序列分析,并与B95-8原型LMP1做比较,结果显示:4例鼻咽癌样品均存在30个碱基的缺失和某些位点的单点突变,并由此引起所编码的氨基酸改变.26例非鼻咽癌患者LMP1阳性扩增率为92.31%,无一例缺失.此结果表明:与广东、广西鼻咽癌高发区相比,我国北方地区鼻咽癌与非鼻咽癌患者中EB病毒LMP1基因缺失型和原型的分布有明显的地区差异.
关键词： Epstein-Barr病毒 鼻咽癌 潜伏膜蛋白1 基因缺失 -
LMP1促鼻咽癌细胞生长与端粒酶活性
为探讨EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)促鼻咽癌细胞生长作用与端粒酶活性的关系,用LMP1基因真核表达质粒转染鼻咽癌CNE1细胞;脂质体介导端粒酶反义核酸处理转染细胞;MTT法检测细胞增殖能力;原位杂交法检测端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达;免疫组化法检测LMP1蛋白表达.结果显示:转染LMP1基因的细胞增殖能力和hTERT mRNA表达水平均显著高于未转染和转染空载质粒的细胞(均P＜0.01).经端粒酶反义核酸作用48h,LMP1基因转染细胞的细胞增殖能力、hTERT mRNA和LMP1蛋白表达水平均显著低于空白对照组(均P＜0.01),反义核酸和脂质体处理组上述各指标无显著变化;反义核酸组LMP1基因转染细胞的增殖能力和hTERT mRNA表达水平仍均显著高于未转染细胞和转染空载质粒的细胞(均P＜0.01).以上结果提示:EB病毒LMP1的促鼻咽癌细胞生长作用与端粒酶活性密切相关.
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EB病毒潜伏膜蛋白1羧基端活化区域2蛋白特异性结合短肽的筛选
目的 利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒潜伏膜蛋白1(LMPl)羧基端活化区域(CTAR)2蛋白特异性结合的短肽.方法 用纯化的CTAR2蛋白筛选噬菌体12肽库.通过夹心ELISA方法分析噬菌体克隆与CTAR2蛋白的亲和力.利用硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析.结果 CTAR2蛋白对噬菌体12肽库进行3轮筛选,第3轮的产率是第1轮的143倍[(3.0×10-6)/(2.1×10-8)],噬菌体克隆得到较好的富集.ELISA方法提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR2蛋白高效结合.硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100％.测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列:GLKHHSPGLLLY.结论 筛选出与CTAR2蛋白特异性结合的短肽序列GLKHHSPGLLLY,为研究LMP1致瘤机制和开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物提供实验依据.
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鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤患者血清潜伏膜蛋白1/EB病毒核抗原1检测的临床意义
目的 检测鼻型结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKL)患者血清EB病毒核抗原1(EBNA1)、潜伏膜蛋白1(LMP1),探讨其与ENKL的关系.方法 选取首都医科大学北京同仁医院2010年8月到2013年8月新诊断ENKL患者36例、健康对照者20例,以EBNA1、LMP1为目的基因,采用实时定量PCR方法分别检测ENKL患者治疗前后和健康对照者外周血EBNA1、LMP1.结果 治疗前,ENKL患者血清EBNA1中位数为1.9×104(0 ～ 11.0×104)拷贝/μl,健康对照组为8.0(0 ～43.8)拷贝/μl;ENKL患者LMP1中位数为3.9 ×103(118.3 ～24.0×103)拷贝/μl,健康对照组为3.3(0～33.3)拷贝/μl.治疗前ENKL患者EBNA1、LMP1均显著高于健康对照组(P均＜0.01).治疗后,ENKL患者血清EBNA1中位数为1.0×103(0 ～2.0×103)拷贝/μl,LMP1为300.8(0 ～825.7)拷贝/μl,两者较治疗前均显著降低(P＜0.05).治疗有效患者的治疗后EBNA1、LMP1中位数均低于治疗无效的患者(P＜0.05).治疗前ENKL患者EBNA1、LMP1与血清乳酸脱氢酶水平呈正相关(r=0.364、0.546,P=0.040、0.012).EBNA1、LMP1低于临界值(EBNA1:1.3×104拷贝/μl; LMP1:3.0×103拷贝/μl)患者的2年总生存率和无进展生存率优于EBNA1、LMP1高于临界值者,但差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 (1)检测ENKL患者血清EBNA1和LMP1对评判治疗效果具有一定价值;(2)ENKL患者血清EBNA1、LMP1可反映肿瘤负荷.
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EB病毒感染与子宫颈鳞状细胞癌相关性的研究
目的探讨EB病毒(epstein-barr virus,EBV)潜伏感染与子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)的关系.方法采用免疫组织化学S-P法对6例子宫颈上皮内瘤病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)、41例子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)(22例深圳,19例武汉)和1例子宫颈腺鳞癌进行单克隆抗体潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)、EB病毒核抗原2(epstein-barr viral nuclear antigen 2,EBNA2)和EB病毒早期反式激活蛋白(ZEB replication activator protein, ZEBRA)标记.对36例CSCC组织进行EBERs原位杂交(ISH)检测.结果 LMP1阳性部位位于癌细胞的胞核中.对照组阳性率6.3%(1/16),CIN阳性率33.3%(4/18),CSCC阳性表达率为54.8%(23/42),三组间比较差异有显著性(P＝0.00).EBNA2仅在个别CSCC组织中有表达,余均为阴性. 在所有研究标本中均未见ZEBRA表达.EBERs ISH 检测36例CSCC阳性率为38.9%(14/36),CSCCⅠ期阳性率为40.0%(2/5), CSCCⅡ期(40.9%)与CSCCⅢ期(27.3%)EBERs ISH阳性率比较差异无显著性意义(P＝0.74).EBERs阳性信号均为散在灶状或单个癌细胞胞核阳性.结论本文结果表明EB病毒感染可能与我国女性CSCC的发生发展有一定关系.
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明胶酶在不同类型鼻咽癌细胞株中的表达及其活性差异
目的:探讨明胶酶的表达与鼻咽癌细胞转移潜能的关系.方法:Real-time PCR和明胶酶谱法检测CNE1、CNE1-LMP1、CNE1、SUNE1-5-8F和SUNE1-6-10B 5株鼻咽癌细胞株中明胶酶mRNA的表达及分泌,并比较其差异.结果:明胶酶mRNA在5株鼻咽癌细胞中都有表达,其相对表达量为SUNE1-5-8F＞CNE1-LMP1＞SUNE1-6-10B＞CNE2＞CNE1,其中,明胶酶mRNA在SUNE1-5-8F细胞和SUNE16-10B之间以及CNE1-LMP1细胞和CNE1细胞之间的表达差异有统计学意义,P＜0.001;在CNE2细胞和CNE1细胞之间,MMP-9 mRNA的表达差异有统计学意义(P＜0.001),而MMP-2 mRNA的表达差异无统计学意义,P=0.078;明胶酶谱结果显示,明胶酶的活性在CNE1-LMP1细胞上清波中明显高于CNE1细胞(P≤0.001),在SUNE1-5-8F细胞上清液中明显高于SUNE1-6-10B细胞(P＜0.001),而CEN2细胞分泌明胶酶的量为5株细胞中低1株.结论:明胶酶的表达和分泌与鼻咽癌细胞的转移潜能密切相关.
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LMP1通过Survivin抑制60Co诱导鼻咽癌细胞凋亡
目的研究EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(LMP1)介导凋亡抑制蛋白(Survivin)表达对辐射效应的影响.方法利用LMP1可调控表达鼻咽癌细胞系(Tet-on-LMP1 HNE2)诱导LMP1表达,同时 60 Co照射5Gy,采用形态学观察、流式细胞术和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)活性检测等方法,分析LMP1表达对60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡的影响.用反义Survivin寡核苷酸阻断Survivin表达,观察Survivin表达阻断对60 Co辐射效应的影响.结果 LMP1表达抑制60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡,LMP1表达60 Co照射组形态学和流式细胞术检测凋亡率(32.7%±2.1%,6.3%)明显低于LMP1表达阴性组(66.0%±3.0%, 29.6%)(P<0.05); 转染Survivin反义寡核酸后细胞凋亡率(59.3%±3.2%, 3.0%)明显高于对照组(26.0%±2.6%, 8.6%)(P<0.05); 同样转染Survivin反义寡核酸组Caspase 3活性(3.78nmol/106)高于对照组(2.79 nmol/106).结论提示LMP1通过介导Survivin表达而抑制60 Co照射诱导凋亡,Survivin反义核酸协同辐射诱导肿瘤细胞凋亡, Survivin作为增敏放射治疗靶,具有潜在的临床意义.
关键词： 潜伏膜蛋白1 凋亡抑制蛋白 凋亡 潜伏膜蛋白1可调控表达鼻咽癌细胞系 照射 -
鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中p53相关蛋白和潜伏膜蛋白1的表达及其临床意义
目的 探讨鼠双微体2(mdm2)、p53、p21基因和潜伏膜蛋白1(LMP-1)在鼻腔NK/T细胞淋巴瘤(NKTL)中的表达及相互作用关系,以及其与NKTL临床分期和预后的关系.方法 收集62例NKTL患者的临床病理资料,并进行随访.取62例NKTL组织构建组织芯片,采用免疫组化SP法检测mdm2、pS3、p21及LMP-1蛋白的表达情况;应用原位杂交法检测EBER1/2的表达.结果 mdm2、p53、p21和LMP-1蛋白在NKTL中的阳性表达率分别为61.3%、79.0%、58.1%和48.4%,EBER1/2的阳性表达率为90.3%.随着肿瘤临床分期的进展,mdm2、p53和p21蛋白的阳性表达率逐渐升高,并与临床分期相关(均P<0.05).mdm2、p53和p21蛋白的表达呈正相关(P<0.05),其阴性表达组患者的预后均好于阳性表达组(均P<0.05).LMP-1蛋白的表达与临床分期和预后无关(P>0.05).p53蛋白的表达水平是NKTL的独立预后因素.结论 mdm2、p53、p21的蛋白表达与NKTL的发生和发展密切相关,可作为评估NKTL生物学行为的良好指标.p53蛋白的表达水平是NKTL的独立预后因素.
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鼻咽癌中EB病毒潜伏膜蛋白1对p53表达的调控
目的探讨EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）是否通过NF-κB在鼻咽癌细胞中促进p53蛋白的表达，为阐明LMP1促进细胞凋亡的机制提供实验依据。方法利用四环素诱导表达系统，建立受四环素调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系。用报道基因检测法和Western印迹技术，观察LMP1过量表达对NF-κB的功能性活化及p53、bcl-2表达的影响。结果在鼻咽癌细胞中，LMP1能活化NF-κB。过量表达的LMP1促进p53基因的表达，这种促表达可以被硫代磷酸化修饰的LMP1及p65反义寡聚脱氧核苷酸阻断。LMP1和p65对bcl-2的表达则没有影响，LMP1过表达对bcl-2的表达无影响。结论鼻咽癌中LMP1通过活化核转录因子NF-κB调节p53的表达；而在LMP1过表达时， bcl-2介导的抗凋亡机制未被启动，至少是未被上调的。
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EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌细胞中调节表皮生长因子受体磷酸化的研究
目的阐明EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)在鼻咽癌(NPC)中调节表皮生长因子受体(EGFR) 磷酸化水平. 方法采用已建立的、受四环素调控的、LMP1表达的NPC细胞系(pTet-on-LMP1 HNE2),定量诱导pTet-on-LMP1 HNE2细胞LMP1动态表达水平,并观察EGFR表达和磷酸化水平.采用瞬间转染方法,将EGFR显性负性突变体和LMP1antisense表达质粒分别导入pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,采用免疫共沉淀和Western blot检测EGFR磷酸化;同时观察EGF刺激后对EGFR磷酸化前后的影响.结果在pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,LMP1能诱导EGFR的表达和磷酸化,并随LMP1表达增加而增加.pTet-on-LMP1 HNE2细胞在导入EGFR显性负性突变体后,不但完全阻断EGFR磷酸化,而且完全抑制EGF所引起的EGFR磷酸化;而导入LMP1 antisense后,可显著地抑制EGFR磷酸化水平.结论 LMP1能同时诱导EGFR表达和上调EGFR磷酸化,并呈剂量相关效应,提示EGFR磷酸化可能在NPC发生发展过程中起着重要作用.
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EGCG干预LMP1激活的AP-1信号转导通路
目的探讨EGCG对鼻咽癌细胞激活蛋白1(AP-1)信号转导通路的干预作用,阐明在鼻咽癌细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)活化的AP-1信号转导通路中靶分子的机制.方法采用EB病毒阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1-LMP1细胞.利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察EGCG对CNE1和CNE1-LMP1细胞的生存率的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对AP-1活性的作用.利用间接免疫荧光法观察EGCG对JNK核移位的影响,再分别提取CNE1和CNE1-LMP1的胞浆及胞核蛋白,Western blot分析EGCG抑制JNK的核移位后,胞浆及胞核蛋白中JNK的变化.采用Western blot分析EGCG对c-Jun的磷酸化水平的影响.采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对cyclinD1启动子活性的影响,并用Western blot分析EGCG对cyclinD1蛋白表达的作用.结果 EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性,并可抑制AP-1的活性.EGCG能抑制JNK的核移位,并抑制c-Jun的磷酸化.EGCG对AP-1信号通路下游的靶基因cyclinD1的启动子活性及其蛋白表达都有抑制作用.结论 EGCG对信号转导通路上的AP-1、JNK、c-Jun、cyclinD1多个靶点分子具有干预作用.LMP1是EB病毒这种编码的蛋白,因此,EGCG抑制与病毒相联系的信号转导通路,可能是EGCG抑制与病毒相关的肿瘤的分子机制之一.
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EB病毒潜伏膜蛋白1介导鼻咽癌细胞中转录因子Ets-1表达的实验研究
目的探讨鼻咽癌(NPC)细胞中EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)是否可介导转录因子Ets-1的表达.方法采用受四环素(Dox)调控的、LMP1表达的NPC细胞系(pTet-on-LMP1 HNE2),用Dox诱导LMP1表达,并检测Ets-1的表达.采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测Ets-1 RNA水平的变化;应用Western blot方法检测Ets-1蛋白质表达情况;应用免疫共沉淀和Western blot方法检测Ets-1磷酸化水平;应用EMSA方法检测Ets-1的DNA结合活性.结果在不同诱导时间、不同浓度Dox诱导的 pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,LMP1表达与Ets-1 RNA表达、蛋白质表达、苏氨酸磷酸化水平及DNA结合活性在一定范围内呈正相关.结论 LMP1可介导NPC细胞中Ets-1的转录活化和表达,可能是LMP1致瘤的新机制.
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重组腺相关病毒介导的特异性发夹状RNA敲低EB病毒潜伏膜蛋白1表达对鼻咽癌细胞转移的影响
目的 探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对鼻咽癌细胞在体内增殖和转移能力的影响及其可能的机制.方法 构建重组腺相关病毒(Raav)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和Raav-shRNA-LMP-1载体.以不同滴度的Raav-EGFP转染鼻咽癌C666-1细胞,确定佳转染复数(MOI).Raav-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定抑制效率.将体外转染RNA干扰后的C666-1细胞注入裸鼠肝脏包膜下建立鼻咽痛移植瘤模型,观察裸鼠的肝脏成瘤及肝脏、肺脏转移情况.采用免疫组化法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,分析LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞成瘤和转移能力的影响及机制.结果 Raav-EGFP以5×104病毒基因组数/细胞转染C666-1细胞,转染效率>95%.Raav-shRNA-LMP-1以5×104病毒基因组数/细胞转染C666-1后,LMP-1的表达抑制率>90%.Raav-shRNA-LMP-1转染组裸鼠的肝脏成瘤体积为(0.2527±0.1152)cm3,与Raav-EGFP转染组[(0.2533±0.0754)cm3]的差异无统计学意义(P>0.05),但Raav-sbRNA-LMP-1转染组裸鼠的肝转移率(50.0%)和肺转移率(33.3%)明显低于Raav-EGFP转染组(均P<0.05).Raav-shRNA-LMP-1转染组裸鼠的生存时间为(15.50±2.47)d,明显长于Raav-EGFP转染组[(11.50±1.22)d,P<0.05].免疫组化染色结果 显示,LMP-1抑制后,MMP-9的表达明显下调.结论 通过Raav介导RNA干扰序列能有效抑制LMP-1的表达,其可能通过下调MMP-9的表达抑制鼻咽癌细胞的转移,但对鼻咽癌细胞的生长无显著影响.
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鼻咽癌表皮生长因子受体研究现状
近年来的许多研究表明表皮生长因子受体( EGFR)的表达与鼻咽癌的生物学行为及预后密切相关.鼻咽癌EGFR的表达与鼻咽癌的分期呈正相关,与近期疗效及远期预后呈负相关.在鼻咽癌的发展过程中,EGFR与环氧化酶2(COX-2),潜伏膜蛋白-1(LMP-1)相互协同而发挥作用.抗EGFR治疗有望提高疗效,改善预后.
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EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌细胞体外转移能力影响
目的 探讨EB病毒(epstein-barr virus,EBV)潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP-1)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞体外转移能力的影响.方法 设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA(small hairpinRNA,shRNA)干扰序列,构建2种重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体:rAAV-增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescentprotein,EGFP)和rAAV-shRNA-LMP-1,以不同滴度rAAV-EGFP转染鼻咽癌C666-1细胞确定佳转染效率(multiplicity of infection,MOI),rAAV-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1,RT-PCR鉴定抑制效率,划痕试验和基底膜穿透试验检验细胞转移能力的变化.结果 以rAAV-EGFP 5×10<'4>v.g(virus genome,病毒基因组数)/细胞转染C666-1细胞,转染效率大于95%,RT-PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×10<'4>v.g/细胞转染C666-1后目的 基因抑制效率大于90%,划痕试验显示在相同的时间内,越过划痕边缘移动到空白处的细胞数明显减少(P<0.01),基底膜穿透试验提示细胞穿透能力显著下降(P<0.001).结论 通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达,并显著抑制了肿瘤细胞的运动及穿透转移能力.
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鼻咽癌肝转移研究进展
鼻咽癌是常见的恶性肿瘤之一,其肝转移发病率高,且治疗效果及预后差.鼻咽癌肝转移机制复杂,与多种基因及蛋白分子相关.其治疗主要包括放疗、化疗、介入栓塞治疗、手术治疗等.现就其转移机制、诊断及治疗作一综述.
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功能性鼻内镜手术治疗鼻息肉后血清抗EBV-LMP1抗体变化及临床意义
目的 研究分析鼻息肉患者采取功能性鼻内镜手术治疗后血清抗Epstain-Barr病毒-潜伏膜蛋白1(EBV-LMP1)抗体的变化及临床意义.方法 选取2015年6月-2016年6月行功能性鼻内镜手术治疗鼻息肉患者202例设为观察组,将同时间段的101名正常人设为对照组.采用ELISA和Western blot方法检测对照组以及观察组术前、术后第1、2、4和6个月的血清抗EBV-LMP1抗体水平情况,并分析其临床意义.结果 观察组术前抗EBV-LMP1抗体水平和条带相对灰度值均高于对照组(P＜0.001).术后第4和6个月,观察组抗EBV-LMP1抗体水平低于术前及术后第1和2个月(P＜0.05).术后第2、4和6个月,观察组条带相对灰度值低于术前及术后第1个月(P＜ 0.05).结论 鼻息肉与EBV感染有关,功能性鼻内镜手术可有效降低患者血清抗EBV-LMP1抗体水平.
关键词： 鼻息肉 鼻内镜手术 Epstain-Barr病毒 潜伏膜蛋白1 -
EB病毒亚型/变异株及其与疾病关系的研究进展
Epstein-Barr病毒(Epsteir-Barr virus,EBV)属于疱疹病毒科γ亚科,与鼻咽癌、地方性伯基特淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤等相关,是重要的肿瘤相关病毒.EBV基因组中存在多个多态性区域,根据这些区域中氨基酸的变异,可将EBV分为不同的亚型/变异株.目前,关于不同EBV亚型/变异株与疾病间是否相关尚无定论.该文从LMP1、EBNA1、BZLF1这三个多态性区域总结了近年来关于EBV亚型/变异株与疾病表型间关系的研究进展.
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EB病毒潜伏膜蛋白1调控鼻咽癌中转录因子c-Jun/Ets1间相互作用的实验研究
目的:探讨LMP1对鼻咽癌中转录因子c-Jun和Ets1表达的影响,以及对Ets1和AP-1间相互作用的调控,为LMP1的致瘤机制提供新的依据.方法:选用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系pTet-on-LMP1 HNE2(L7细胞),通过针对c-Jun、Ets1的硫代反义寡核苷酸进行阻断,观察LMP1对c-Jun、Ets1表达的影响及其相互作用,蛋白质印迹法检测Ets-1、c-Jun蛋白质表达.免疫共沉淀(IP)结合Western blot研究c-Jun和Ets1相互结合的情况.结果:在不同浓度Dox诱导24 h后,Dox为0.61μg/mL时的c-Jun和Ets1表达均强.随着Dox诱导时间的延长,L7细胞中c-Jun和Ets1的表达上调,至4h达到高.阻断c-Jun表达后,Ets1表达显著降低;阻断Ets1表达后,c-Jun表达显著降低.在Dox诱导的L7细胞总蛋白中,在IP沉淀的Ets1中存在c-Jun表达,并且在Dox 0.6μg/mL时强;在IP沉淀的c-Jun中存在Ets1表达,同样在Dox 0.6μg/mL时强.结论:EBV-LMP1可以调控转录因子c-Jun和Ets1表达,且在调控过程中可能存在c-Jun和Ets1间的相互作用.
