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LIM和SH3蛋白1蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达及其对肾透明细胞癌786-O细胞侵袭和迁移能力的影响
目的 分析LIM和SH3蛋白1(LASP1)在肾癌组织中的表达及其与肾癌患者临床病理特征的关系,探讨沉默LASP1表达对肾透明细胞癌786-O细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 应用免疫组织化学染色检测41例肾透明细胞癌患者肿瘤组织及其配对的癌旁组织中LASP1蛋白的表达水平,并分析LASP1蛋白表达与患者临床病理特征的关系.采用Western blot法检测10例伴或不伴淋巴结转移肾透明细胞癌组织中LASP1蛋白的表达差异.以小干扰RNA(siRNA)技术转染786-O细胞,采用Western blot法检测LASP1 siRNA对LASP1蛋白的干扰效果以及对上皮间质转化(EMT)通路中相关蛋白的表达影响.采用细胞计数盒8(CCK-8)法和Transwell实验检测下调LASP1蛋白表达对786-O细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响.结果 LASP1蛋白在肾透明细胞癌组织中的阳性表达率为90.2%(37/41),明显高于其在癌旁组织中的阳性表达率(29.3%,12/41;P=0.002).LASP1在肾癌组织中的表达与肾癌的淋巴结转移和TNM分期呈正相关(均P<0.05).Western blot法检测结果显示,LASP1蛋白在癌旁正常组织、无淋巴结转移肾癌组织和有淋巴结转移肾癌组织中的相对表达量分别为0.696±0.053、1.459±0.628和2.692±0.186,差异有统计学意义(P=0.001).沉默786-O细胞中LASP1蛋白的表达后,786-O细胞的增殖、侵袭和迁移能力均明显降低.LASP1 siRNA转染786-O细胞48 h后,siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组786-O细胞中上皮表型标志物E-cadherin蛋白的相对表达量分别为0.848±0.020、0.671±0.018和0.691±0.037,siRNA转染组E-cadherin蛋白的表达明显增高(P<0.05);siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组786-O细胞中间质表型标志物N-cadherin蛋白的相对表达量分别为0.449±0.047、0.613±0.018和0.633±0.045,siRNA转染组N-cadherin蛋白的表达明显降低(P<0.05);siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组786-O细胞中间质表型标志物Vimentin蛋白的相对表达量分别为0.477±0.029、0.598±0.069和0.633±0.045,siRNA转染组Vimentin蛋白的表达明显降低(P<0.05).结论 LASP1蛋白在肾透明细胞癌中高表达,其高表达可能与肾癌的发生发展有关,并可能通过EMT调节肾癌细胞的侵袭和迁移能力,促进肿瘤的淋巴结转移.
关键词： 肾肿瘤 LIM和SH3蛋白1 上皮间充质转化 肿瘤转移 淋巴结 -
结直肠癌组织LASP1、MMP-9表达变化及其与患者临床病理参数的关系
目的 观察结直肠癌组织LIM和SH3蛋白1(LASP1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达变化,并探讨其在结直肠癌侵袭和转移中的作用.方法 选择结直肠癌患者70例,采用免疫组化EnVision两步法检测结直肠癌及其配对的癌旁正常组织LASP1、MMP-9表达,分析二者表达的关系及其与患者临床病理参数的关系.结果 结直肠癌组织LASP1、MMP-9阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(P均<0.05).结直肠癌组织LASP1阳性表达与MMP-9阳性表达呈正相关关系(r=0.664,P<0.01).结直肠癌组织LASP1、MMP-9阳性表达均与肿瘤临床分期和淋巴结转移有关(P均<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、组织分化程度无关(P均>0.05).结论 结直肠癌组织LASP1、MMP-9表达升高;二者表达变化可协同促进结直肠癌侵袭和转移.
关键词： 结直肠癌 LIM和SH3蛋白1 基质金属蛋白酶9 免疫组织化学 -
LIM和SH3蛋白1 mRNA和蛋白在人胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨LIM和SH3蛋白1(Lasp1) mRNA及蛋白水平在人胃癌组织中的表达及其临床意义.方法 分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、Western blot和免疫组织化学(IHC)方法,检测Lasp1在82例胃癌患者的癌组织及配对癌旁正常组织标本中mRNA和蛋白表达水平,探讨其与胃癌患者不同临床病理指标之间的关系.结果 人胃癌组织较癌旁正常胃黏膜组织Lasp1 mRNA(3.098 ±0.215比2.147±0.104,P＜0.05)和蛋白(3.223±0.210比2.134±0.160,P＜0.05)表达水平均显著升高.Lasp1 mRNA水平在淋巴结转移阳性(1.64±1.52比3.92±1.47,P＜0.05)及晚期(Ⅲ+Ⅳ期)胃癌(1.95±1.32比3.48±1.39,P＜0.05)患者中表达明显增高;同样,免疫组织化学结果显示Lasp1蛋白在淋巴结转移阳性(Z=-2.078,P＜0.05)及晚期(Z=-2.382,P＜0.05)胃癌患者中表达明显增高,Lasp1 mRNA及蛋白表达水平与胃癌病理分级、肿瘤大小无明显相关(P＞0.05).结论 Lasp1在人胃癌组织中表达增高,其表达水平的升高可能与胃癌的进展和淋巴结转移呈正相关.
关键词： 胃癌 LIM和SH3蛋白1 -
Hsa－miR－218靶向调控 LASP1对宫颈癌 HeLa 细胞生长的影响
目的：探讨人微小RNA－218（Homo sapiens microRNA－218， hsa－miR－218）对宫颈癌HeLa细胞生长的影响及分子机制。方法：构建hsa－miR－218的重组慢病毒表达载体pmiR－218，并将pmiR－218感染至HeLa细胞，台盼蓝拒染法检测细胞数量的变化，WST－8法检测细胞活力，构建萤光素酶报告基因载体验证miR－218与LIM和SH3蛋白1（LASP1）的相互结合作用，real－time PCR检测LASP1的mRNA相对表达水平，Western blot 检测LASP1蛋白的表达水平。结果：经DNA测序证实与设计完全一致，测序结果显示成功构建了重组慢病毒表达载体pmiR－218。 pmiR－218转染HeLa细胞72 h后HeLa细胞存活数量为176±9，对HeLa细胞活力的抑制率具有时间效应关系，较空白对照组比较，差异显著（P＜0．05）；萤光素酶活性结果显示，克隆LASP1－3’UTR的质粒与miR－218 mimics共转染293T细胞，引起萤光素酶活性的减低；real－time PCR 结果显示转染pmiR－218后，miR－218表达水平增加；过表达miR－128能下调LASP1 mRNA及蛋白的相对表达水平，与空白对照组及阴性对照组比较，差异显著（ P＜0．01）。结论：pmiR－218有效抑制HeLa细胞的生长，并具有时间－效应关系，其机制可能是miR－218通过靶向结合LASP1的3’UTR，从而下调其在HeLa细胞的表达有关。
关键词： 人微小RNA-218 LIM和SH3蛋白1 宫颈癌 Hela细胞
