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沉默甲酰肽受体2基因对人胶质瘤U87细胞生长和侵袭迁移能力的影响
目的 探讨沉默甲酰肽受体2(FPR2)基因对胶质瘤U87细胞生长、迁移和侵袭能力的影响及其可能机制.方法 采用Western blot法和免疫组化法检测正常胶质细胞、胶质瘤细胞、正常脑组织和胶质瘤组织中FPR2蛋白的表达水平.以小干扰RNA( siRNA)沉默人胶质瘤U87细胞中FPR2基因的表达,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测FPR2 mRNA和蛋白的表达量;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染FPR2 siRNA 24、48和72 h后对U87细胞增殖的作用;采用流式细胞术检测FPR2基因沉默对 U87细胞凋亡水平的影响.以 Transwell小室和裸鼠成瘤实验检测FPR2基因沉默对U87细胞迁移侵袭和成瘤能力的影响.采用Western blot法和酶联免疫吸附实验检测细胞周期和迁移相关蛋白的表达和释放水平.结果 与正常胶质细胞和正常脑组织比较,FPR2蛋白在胶质瘤细胞和胶质瘤组织中的表达明显上调.与空白对照组和阴性对照组比较,siRNA干扰组U87细胞中FPR2 mRNA和蛋白的相对表达量明显降低. siRNA干扰组U87细胞在转染24、48和72 h时的生长抑制率分别为(23.1±5.1)%、(39.6±5.6)%和(44.4±6.7)%,与阴性对照组[分别为(3.2± 0.6)%、(5.7±0.8)%和(7.9±0.9)%]比较,差异有统计学意义(P＜0.05). siRNA干扰组U87细胞在转染48 h后的凋亡率为(17.4±2.1)%,明显高于阴性对照组[(5.4±0.5)%]和空白对照组[(3.8± 0.3)%];siRNA干扰组迁移细胞数为(108.7±9.5)个,明显低于空白对照组[(312.9±17.5)个]和阴性对照组[(304.4±15.7)个];siRNA干扰组侵袭细胞数为(19.3±3.2)个,明显低于空白对照组[(106.9± 8.5)个]和阴性对照组[(102.4±7.4)个],差异均有统计学意义(P＜0.05).与阴性对照组比较,siRNA干扰组的裸鼠成瘤能力明显降低. siRNA干扰可明显下调细胞周期蛋白cyclin D1的表达和血管内皮生长因子(VEGF)的表达和释放,其主要通过β-catenin信号通路来实现.结论 siRNA沉默FPR2基因可抑制胶质瘤U87细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过下调cyclin D1的表达和抑制VEGF的水平来实现.
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胃癌组织中甲酰肽受体2表达与胃癌患者预后相关性研究
目的 探讨胃癌组织中甲酰肽受体2(FPR2)的表达与胃癌患者预后的相关性.方法 选取病理科169例胃癌患者的病理组织标本和相对应的癌旁非癌组织标本,采用免疫组织化学染色方法检测两组组织标本中FPR2的表达情况,进而分析FPR2的表达在胃癌组织及癌旁组织中有无差异性.将胃癌组织分为两组,分别为FPR2表达阳性组及FPR2表达阴性组,采用Graphpad Prism 5软件分别对两组的存活时间和多项临床病理参数进行分析.结果 胃癌组织中FPR2表达阳性率为72.2% (122/169),明显高于癌旁组织的22.5% (38/169),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).在胃癌组织中,FPR2阳性表达组的标本数为122例,FPR2阴性表达组的标本数为47例,FPR2阳性表达组患者的总体存活时间短于FPR2阴性表达组;同时,FPR2的表达与淋巴结转移、浆膜浸润及TNM分期及性别呈正相关. Cox回归分析结果表明,FPR2是影响胃癌预后的一个独立危险因素.结论 FPR2在胃癌组织中表达,与患者的总体存活时间、淋巴结转移、浆膜浸润和TNM分期呈正相关,并且可以作为胃癌的独立危险因素.
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甲酰肽受体2促进胃癌细胞侵袭及转移作用研究
目的 通过体外胃癌细胞实验和体内裸鼠成瘤实验,探讨甲酰肽受体2 ( FPR2)对胃癌细胞侵袭、转移的作用.方法 采用慢病毒转染技术干扰胃癌细胞SGC7901和XN0422中FPR2的表达,通过实时定量逆转录聚合酶链反应和West-ern blot方法检测干扰效率.利用划痕实验、 Transwell 实验、体内裸鼠皮下成瘤及腹腔种植实验,观察 XN0422-mock、SGC7901-mock组以及XN0422-shFPR2、SGC7901-shFPR2组的侵袭转移、皮下成瘤和腹腔转移能力的改变.结果 慢病毒感染XN0422、SGC7901细胞,FPR2表达量下降>80% . XN0422-shFPR2组、SGC7901-shFPR2组中侵袭、转移能力,皮下成瘤能力和腹腔转移能力均低于XN0422-mock组和SGC7901-mock组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 FPR2可同时促进体外胃癌细胞的侵袭转移能力、体内皮下成瘤和腹腔转移能力.
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长链非编码RNA lucat1对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制
目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)lucat1对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制.方法 ①采用实时荧光定量PCR法检测正常胃黏膜细胞GSE-1和胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中lncRNA lucat1和对甲酰肽受体2(FPR2)mRNA.②将体外培养的胃癌细胞SGC-7901、BGC-823分为观察组和对照组.观察组用Lipofectamine2000转染lucat1 shRNA,对照组不转染.转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测两组FPR2 mRNA相对表达量.③将体外培养的胃癌细胞BGC-823分为A、B、C组.A组转染lucat1 shRNA,B组转染lucat1 shRNA和FPR2过表达质粒,C组不转染.转染48 h,用Transwell小室实验和划痕实验观察各组细胞侵袭和迁移能力,结果分别用穿膜细胞数和细胞迁移距离表示.结果 ①SGC-7901、BGC-823、GES-1细胞lncRNA lucat1相对表达量分别为3.651±0.332、3.023±0.331、1.000±0.098,FPR2 mRNA相对表达量分别为3.354±0.433、3.425±0.354、1.000±0.277.SGC-7901、BGC-823细胞lucat1、FPR2 mRNA相对表达量均明显高于GES-1细胞(P均<0.05).②观察组、对照组SGC-7901细胞FPR2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.05、0.48±0.04,BGC-823细胞FPR2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.04、0.48±0.04,两组比较P<0.05.③Transwell小室实验A、B、C组穿膜细胞数分别为(143±7)、(194±9)、(233±8)个,三组穿膜细胞数两两比较P均<0.05.划痕实验A、B、C组细胞迁移距离分别为(0.342±0.027)、(0.534±0.021)、(0.652±0.029)mm,三组细胞迁移距离两两比较P均<0.05.结论 lncRNA lucat1可促进胃癌细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与上调FPR2表达有关.
