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CCL20及其受体CCR6在大肠癌中的表达及其意义
目的 观察趋化因子CCL20及其受体CCR6在大肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其对大肠癌肝转移的影响.方法 采用荧光定量反转录聚合酶链反应(Q-RT-PCR)方法检测123例行大肠癌根治术患者的大肠癌组织、正常肠黏膜组织及其中19例大肠癌肝转移组织及肝转移灶旁肝组织中CCL20和CCR6 mRNA表达情况.结果 趋化因子受体CCR6在大肠癌组织及相应的肝转移组织中呈高表达(分别为2.100±0.216,1.530±0.172),与正常肠黏膜组织(0.636±0.190)比较,表达水平差异有统计学意义(t值分别为-3.778、-1.598,均P＜0.05)；肝转移灶旁组织(0.597±0.247)与正常肠黏膜组织比较,表达水平差异无统计学意义(t=-0.200、P＞0.05).趋化因子CCL20 mRNA在大肠癌肝转移组织及肝转移灶旁组织中高表达(分别为1.780±0.126,3.461±0.134),与正常肠黏膜组织(0.759±0.072)比较,表达水平差异有统计学意义(t值分别为-2.087、-5.607,P＜ 0.05).在大肠癌肝转移组织中,CCL20 mRNA的表达量明显高于无大肠癌肝转移组织,差异有统计学意义(t=8.357,P＜0.05).CCR6/CCL20轴的mRNA表达与患者性别(U值分别为0.360、0.530)、年龄(U值分别为0.089、0.436)及肿瘤分期(U值分别为0.063、0.129)无相关性(均P＞0.05),而CCR6及CCL20 mRNA的表达与大肠癌的远处转移(U值分别为0.002、0.032)及淋巴结转移(U值分别为0.013、0.007)有一定的相关性(均P＜ 0.05).结论 CCR6/CCL20信号轴在大肠癌组织中的表达与大肠癌肝转移的形成有相关性.
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模拟失重30d后再超重对猴舌黏膜中趋化因子CCL20及其受体CCR6表达的影响
目的：探讨模拟失重30 d后再超重对猴舌黏膜中趋化因子CCL20及其受体CCR6表达的影响。方法23只雄性猕猴采用随机数字表法分为对照组（A组，n＝3）、失重组（B组，n＝3）、超重组（ C组，n＝3）、失重30 d后再超重组（ D组，n＝14）；D组根据载荷量又分为4个亚组：＋11Gx/270s组（D1，n＝3）、＋13Gx/230s组（D2，n＝4）、＋15Gx/200s组（D3，n＝4）和＋13Gx/230s恢复9 d后组（ D4，n＝3）。采用组织学方法观察舌黏膜的形态学变化，通过免疫组织化学、实时定量PCR方法检测舌黏膜中CCL20、CCR6的表达情况。结果舌黏膜在各实验组中组织结构均未见明显损伤，但实验组中的淋巴细胞及中性粒细胞浸润均较对照组多。 C组、D2组及D3组CCL20的免疫组化评分分值分别为1.30±0.11、1.68±0.62和2.26±1.00，均显著高于A组的0.47±0.12，差异均有统计学意义（均P＜0.05），CCR6的免疫组化评分分值分别为4.40±1.48、6.67±2.04和7.02±2.11，也显著高于A组的1.33±0.66，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。在mRNA水平上，各组的CCL20和CCR6表达水平变化趋势与其蛋白水平变化一致。结论模拟失重30 d后再超重环境中，猴舌黏膜组织结构未见明显改变，但舌黏膜中趋化因子CCL20及其受体CCR6表达明显增强。
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CC亚族趋化因子配体20/CC型趋化因子受体6在肝癌及其他肿瘤中的作用
趋化因子/受体在炎症、组织损伤等病理生理活动中的作用已较为明确,近年来越来越多的研究集中其在肿瘤微环境中对肿瘤的影响.总结了近年来CC亚族趋化因子配体20(CCL20)及其受体CCR6在肝癌及其他肿瘤中的研究进展,分析其推动肿瘤进展的可能机制及其对肿瘤预后的影响.阻断CCL20/CCR6的相互作用,可能为肝癌的靶向治疗提供新的方向.
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HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清M30和CCL20水平变化及意义
目的 观察HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者血清M30、CCL20的水平及其与短期(3个月)预后的关系,分析其临床意义.方法 收集2014年10月-2017年1月在湖南省人民医院感染科诊治的HBV-ACLF患者51例(HBV-ACLF组);住院或门诊随访慢性乙型肝炎(CHB)患者30例(CHB组);健康体检者30例为对照组.HBV-ACLF患者随访3个月,根据随访结果分为存活组及死亡组.采用ELISA法检测各组基线及HBV-ACLF组患者治疗2周后外周血血清M30、CCL20水平.计量资料2组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析.结果 治疗前HBV-ACLF组、CHB组和对照组M30、CCL20水平[(591.54±262.06)、(241.58±120.33)、(114.35 ±52.09)U/L;(386.51 ±55.12)、(177.11±27.51)、(33.95±11.62) pg/ml]3组间差异有统计学意义(F值分别为22.75、51.47,P值均＜0.05).治疗2周后HBV-ACLF死亡组患者M30水平显著高于存活组[(648.17±285.55)U/L vs (426.43±217.64) U/L,t=2.37,P＜0.05],HBV-ACLF死亡组CCL20水平显著低于存活组[(232.28±39.28) pg/ml vs(352.29±52.43) pg/ml,t=-2.35,P＜0.05].治疗2周时与治疗前HBV-ACLF死亡组和存活组血清M30和CCL20水平的变化率[(0.08±0.04)vs(0.27±0.12);(0.39±0.06)vs(0.11 ±0.02)]差异均有统计学意义(t值分别为2.49、2.54,P值均＜0.05).结论 血清M30、CCL20水平在HBV-ACLF患者中显著升高,能够较为准确的反映肝脏的细胞凋亡及炎症程度.治疗过程中CCL20水平明显下降的患者病死率更高,M30水平明显下降的患者有相对较好的预后,动态观察M30、CCL20水平变化可能对预测HBV-ACLF患者的短期预后有一定价值.
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趋化因子受体6/趋化因子20生物轴在肝癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨趋化因子受体6/趋化因子20生物轴在肝癌组织中的表达情况和临床意义.方法 选择2003年3月至2005年12月肝癌患者48例,取其肝癌组织、癌旁组织配对标本各1份.另选取8例肝良性病变患者,取其手术切除的正常肝组织各1份.用实时荧光定量PCR法检测趋化因子受体6和趋化因子20 mRNA相对表达量.用免疫组织化学染色法检测趋化因子受体6和趋化因子20蛋白的表达情况.计量资料组间差异行单因素方差分析,率的比较行卡方检验,采用Spearman法计算相关系数,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存率的比较行Log rank检验.结果 肝癌组织的趋化因子受体6和趋化因子20的mRNA相对表达量(0.99±0.21和0.46±0.11)均高于癌旁组织(0.33±0.09和0.31±0.07)和正常肝组织(0.22±0.06和0.28±0.05),差异均有统计学意义(F=127.43和21.10,P均＜0.05).肝癌组织趋化因子受体6蛋白阳性表达率[54.17％(26/48)]高于癌旁组织[16.67％(8/48)]和正常肝组织(0/8),差异有统计学意义(x2=19.55,P＜0.05).肝癌组织趋化因子20蛋白阳性表达率[50.00％(24/48)]与癌旁组织[33.33％(16/48)]和正常肝组织(2/8)比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).肝癌组织中趋化因子受体6蛋白阳性表达率与趋化因子20蛋白阳性表达率之间存在相关性(r=0.42,P＜0.05).趋化因子受体6蛋白阳性表达率与肝癌pTNM分期、有否脉管癌栓、有否肝内转移、有否肺转移相关(x2=5.48、4.02、5.07、5.19,P均＜0.05).趋化因子20蛋白阳性表达率与肝癌肿瘤大径、pTNM分期相关(x2=4.09、4.00,P均＜0.05).趋化因子受体6蛋白阳性组的无瘤生存率和总体生存率均低于阴性组(x2=4.57和6.57,P均＜0.05).趋化因子20蛋白阳性组的无瘤生存率和总体生存率与阴性组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 趋化因子受体6/趋化因子20生物轴与肝癌的恶性生物学行为和预后相关.
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白细胞介素36α对小鼠银屑病样皮损及趋化因子CCL20的影响
目的 探讨白细胞介素(IL)36α对小鼠银屑病样皮损及CC趋化因子配体20(CCL20)的影响.方法 30只BALB/c雌性小鼠分为3组:凡士林空白对照组(对照组)、咪喹莫特模型组(模型组)以及IL-36α实验组(实验组).用小鼠银屑病皮损面积和疾病严重程度评分(PASI)观察银屑病样小鼠皮损动态变化.光镜下观察皮损组织形态学变化,并测量表皮层厚度.用实时荧光定量PCR、Western印迹检测对照组与模型组小鼠皮损中IL-36α表达情况,用实时荧光定量PCR、Western印迹法、免疫组化方法检测小鼠皮损中CCL20的含量变化.结果 模型组皮损中IL-36α mRNA表达水平明显高于对照组(△Ct值分别为0.0195±0.0059、0.0012±0.0004,两组比较,P＜0.05);模型组皮损中IL-36α蛋白表达水平明显高于对照组(分别为3.922±0.248、0.690±0.025,两组比较,P＜0.05).对照组、实验组CCL20 mRNA表达(△Ct值)分别为0.378±0.075、2.152±0.793,与模型组(0.999±0.178)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组、实验组CCL20蛋白表达结果分别为0.025±0.009、0.397±0.033,与模型组(0.145±0.030)比较,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化结果表明,实验组皮损中CCL20的含量较模型组显著增加,差异有统计学意义(Z=2.294,P＜0.05).结论 IL-36α可通过促进CCL20表达,加重银屑病样小鼠皮损病变.
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卡马拉素对HaCaT细胞体外增殖及对白细胞介素17C、CCL20、NF-κB表达的影响
目的 探讨卡马拉素对HaCaT细胞体外增殖及对白细胞介素17C(IL-17C)、趋化因子CCL20、NF-κB表达的影响.方法 用不同浓度卡马拉素组(0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L)、含与4.0 μmol/L卡马拉素等体积二甲基亚砜的RPMI 1640培养液(溶媒组)、RPMI 1640培养液(对照组)分别作用于HaCaT细胞.采用CCK8法检测卡马拉素作用于HaCaT细胞24、48、72 h对细胞体外增殖的影响;RT-PCR法检测卡马拉素对HaCaT细胞IL-17C和CCL20 mRNA表达的影响;Western印迹法检测卡马拉素对HaCaT细胞IL-17C、CCL20和NF-κB蛋白表达的影响.统计学处理采用重复测量的方差分析、单因素方差分析和Pearson相关分析.结果 各浓度组卡马拉素对HaCaT细胞增殖的抑制作用有随时间变化的趋势(F=126.936,P＜ 0.05),药物作用时间越长,抑制作用越强;HaCaT细胞增殖的抑制率也随卡马拉素浓度的增加而升高(F=838.308,P＜ 0.05);不同浓度卡马拉素组对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用随时间变化的趋势不同,药物浓度与时间存在交互作用(F=15.961,P＜ 0.05).不同浓度卡马拉素作用于HaCaT细胞48 h后,IL-17C mRNA及其蛋白、CCL20 mRNA及其蛋白、NF-κB蛋白表达量均随卡马拉素浓度的增加而不断降低,差异均有统计学意义(F值分别为206.041、233.887、143.883、162.431、577.915,均P＜0.05).结论 卡马拉素可抑制HaCaT细胞的体外增殖,并可在mRNA和蛋白水平下调IL-17C、CCL20的表达,而两者表达量的降低可能与NF-κB表达下调有关.
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窄谱中波紫外线对寻常性银屑病患者外周血纤溶酶及CC趋化因子配体20水平的影响
目的 研究窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗对寻常性银屑病患者外周血中纤溶酶及CC趋化因子配体20(CCL20)水平的影响.方法 60例进行期寻常性银屑病患者均采用NB-UVB照射治疗,每周3次,共治疗8周.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测银屑病患者NB-UVB照射前后及50例健康体检者(对照组)外周血血浆中纤溶酶和CCL20水平.结果 60例患者治疗后银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)评分(2.54±1.64)显著低于治疗前(10.26±3.14),差异有统计学意义(t=17.40,P＜ 0.05),且NB-UVB治疗的有效率达87％ (52/60).治疗前,银屑病患者外周血中纤溶酶[(180.07±40.62) μg/L]及CCL20水平[(422.41±129.87) pg/L]均显著高于对照组[(76.30±26.92) μg/L,t=15.45;(205.33±49.89) pg/L,t=11.15;均P＜0.05].治疗后银屑病患者外周血纤溶酶[(148.22±40.05) μg/L]及CCL20的表达量[(329.67±100.73) pg/L]均显著低于治疗前(t=4.97、6.44,均P＜0.05),但仍显著高于对照组(t=10.82、7.95,均P＜0.05).治疗前,银屑病患者外周血纤溶酶与CCL20水平呈正相关(r=0.57,P＜0.05),纤溶酶、CCL20水平均与PASI评分呈正相关(r=0.49、0.62,均P＜ 0.05).结论 NB-UVB照射可能通过降低银屑病患者外周血纤溶酶及CCL20的水平发挥治疗作用.
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小鼠CCL20mRNA 实时荧光定量PCR检测方法的建立
目的:建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20(CC chemokine ligand 20)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的方法.方法:分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA.采用qRT-PCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平.评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平.结果:建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green 实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带.检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P＜0.05).结论:建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础.
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CCR6-CCL20趋化轴在TH17细胞介导的肺纤维化大鼠肺组织中作用机制的研究
目的：探讨CCR6-CCL20趋化轴在Th17细胞介导的肺纤维化大鼠肺组织中作用。方法随机将63只雄SD大鼠为：N组(生理盐水对照组)、B组(肺纤维化模型组)、D组(地塞米松治疗组),采用经气管内注入博来霉素致大鼠肺纤维化模型,对各组大鼠肺组织,分别采用HE染色观察病理变化；流式细胞术计数Th17细胞；免疫组化法评价CCR6表达；酶联免疫吸附试检测 CCL20水平；结果 TH17细胞、CCR6、CCL20、在B、D组大鼠肺组织中不同时间点与N组相比较表达均明显增高(P<0．05),以造模7 d为显著。TH17细胞计数水平与 CCR6、CCL20表达有显著的相关性( Th17 vs． CCR6, r =0．693, P <0．01；Th17 vs CCL20, r=0．761,P<0．01)。结论 Th17细胞介导大鼠肺组织纤维化过程中,CCR6-CCL20起到重要的趋化Th17细胞作用。
关键词： 博来霉素 Th17细胞 肺纤维化 趋化因子CCL20 趋化因子受体CCR6 -
重组腺病毒载体Ad5-CCL20的构建及其表达
目的:构建表达趋化因子CCL20的重组腺病毒载体Ad5-CCL20,检测体外转染小鼠结肠癌细胞CT-26后的产物表达.方法:通过EcoR I/Sal l双酶切CCL20质粒和pDC316质粒,将获取编码CCL20的基因片段连接到pDC316重组穿梭质粒.将测序正确的穿梭质粒pDC316-CCL20与骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共同转染293T细胞,构建重组腺病毒载体Ad5-CCL20.予Ad5-CCL20体外转染结肠癌细胞CT-26,Western blotting和Elisa检测转染后不同时间段CCL20的表达情况,并以含CCL20的上清分别对mDC、iDC进行趋化实验.结果:成功构建表达趋化因子CCL20的重组腺病毒载体Ad5-CCL20;Western blotting和Elisa均检测到CCL20表达,且CCL20表达量随病毒转染CT-26细胞的时间延长而逐渐增加;趋化实验表明,趋化因子CCL20对iDC、mDC都有趋化作用,但对iDC的趋化作用更加明显(P＜0.05).结论:重组腺病毒载体Ad5-CCL20的构建及获取为后续开展肿瘤的免疫治疗提供实验基础.
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急性病毒性心肌炎患者外周血CCL20表达及其与Th17细胞比例的关系
[目的]探讨急性病毒性心肌炎(AVMC)患者外周血CC趋化因子配体20(CCL20)水平及与Th17细胞比例的关系.[方法]本院住院的AVMC患者54例作为观察组,分别于发病d2、d7、d14测定外周血CCL20水平和白细胞介素-17(IL-17)水平,检测外周血Th17细胞占CD4+T细胞比例、CC族趋化因子受体6阳性(CCR6+)细胞占Th17细胞比例,并分析外周血CCL20水平与Th17细胞比例的关系.以同期入院体检正常的健康志愿者50例作为对照组进行比较.[结果]随着入院时间延长,观察组患者外周血CCL20水平、IL-17水平、外周血Th17细胞占CD4+T细胞比例、CCR6+细胞占Th17细胞比例均降低,且观察组d2、d7、d14各指标明显高于对照组,两组比较差异均有显著性(P<0.05);相关性检测结果显示外周血CCL20水平、CCR6表达与Th17细胞比例均呈正相关关系(r=0.721、0.754,P均<0.05).[结论]AVMC患者外周血CCL20与Th17细胞比例均明显上升,且两者呈正相关关系,可能是AVMC病程进展的重要机制.
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血清趋化因子CCL20与非小细胞肺癌胸腔镜根治术后早期复发及转移的关系
目的 探讨CCL20作为非小细胞肺癌(NSCLC)患者术后早期复发和转移预测指标的意义和可行性.方法 选取Ⅰ或Ⅱ期NSCLC患者203例,随访至术后2年.记录术中出血量及手术时间,并检测患者术前当天及术后30、90、180 d的血清CCL20水平.结果 复发患者63例,复发率为31.0％.复发者术后180 d血清CCL20水平较非复发者明显升高.复发组与非复发组患者在年龄、性别、出血量、手术时间、组织学类型以及是否接受辅助性化疗方面差异无统计学意义.以术后180 d中位数CCL20水平将患者分为高水平者与低水平者,高水平者复发率明显高于低水平者.高水平者与低水平者总体无复发生存率差异有统计学意义.多元Cox回归分析表明只有术后180 d的血清CCL20水平与肿瘤早期复发或转移有关.肝转移和骨转移患者血清CCL20水平明显高于其他部位转移者.结论 NSCLC患者术后180 d的血清CCL20水平与肿瘤早期复发或转移有关.合并肝转移和骨转移的NSCLC患者术后180 d血清CCL20水平明显升高.
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细胞因子及相关受体在乳腺癌患者外周血中的表达及意义
目的：探讨乳腺癌患者外周血中肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、可溶性肿瘤坏死因子受体P55（sTNFR‐P55）、转化生长因子‐β1（TGF‐β1）及可溶性CD105（S‐CD105）、趋化因子CCL20（CCL20）及趋化因子CXC受体3（CXCR3）的表达水平及它们在疾病中的价值体现。方法乳腺癌患者91例为观察组，乳腺良性病患者71例为对照组，健康体检者62例为空白组，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）分别检测外周血 TNF‐α、sTNFR‐P55、TGF‐β1、S‐CD105、CCL20及CXCR3的水平。结果观察组 TNF‐α、sTNFR‐P55、TGF‐β1、S‐CD105、CCL20及CXCR3表达水平均高于对照组及空白组，对照组除了TGF‐β1和CXCR3外均高于空白组，差异均具有统计学意义（P＜0．05）。结论血清TNF‐α、sTNFR‐P55、TGF‐β1、S‐CD105、CCL20及CXCR3水平与乳腺癌密切相关，联合监测有利于乳腺癌早期诊断、评估及预后，具有一定的临床意义。
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趋化因子CCL20及CCL22在狼疮鼠浆膜腔液中的表达及意义
目的 探讨趋化因子CCL20及CCL22在狼疮鼠浆膜腔液中的表达及意义.方法 以9只B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠为观察组,6只同系C57BL/6J小鼠为对照组.取2组小鼠胸膜及腹膜腔液,用ELISA方法检测其中CCL20及CCL22的表达水平,并与小鼠血清中ANA、dsDNA抗体的含量以及小鼠24 h尿蛋白含量进行关联性分析.结果 CCL20在狼疮鼠浆膜腔液中高表达,与对照组相比两者差异有统计学意义(P＜0.05),而CCL22与对照组相比两者差异无统计学意义(P＞0.05)；狼疮小鼠浆膜腔液CCL20含量与血清ds-DNA和24 h尿蛋白量呈正相关(P＜0.05),与血清中ANA无明显相关性(P＞0.05)；而狼疮小鼠浆膜腔液CCL22含量与血清ds-DNA、ANA及24 h尿蛋白量均无明显相关性(P＞0.05).结论 趋化因子CCL20可能参与狼疮鼠浆膜腔病变的发生,与狼疮鼠的病情活动、肾损害有一定相关性.
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CCL20重组慢病毒对小鼠肿瘤生长的影响
目的 通过CCL20重组慢病毒整合的间充质干细胞,观察肿瘤原位高表达CCL20能否激发机体的抗肿瘤免疫.方法 构建小鼠CCL20重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导 BALB/c小鼠间充质干细胞(mMSCs),杀稻瘟素(blasticidin)筛选出稳定表达mCCL20的混合克隆,命名为lenti-mCCL20-mMSCs,与CT26混合后皮下接种至同系BALB/c小鼠,设lenti-null-mMSCs与CT26混合接种、mMSCs与CT26混合接种、CT26单独接种为对照,观察肿瘤生长情况.结果 构建了重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导 BALB/c小鼠MSCs,获得lenti-mCCL20-mMSCs,动物实验发现CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,但促进肿瘤生长.结论 CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,促进肿瘤生长,机制有待进一步研究.
