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噬菌体展示技术与肿瘤靶向治疗
噬菌体展示技术是通过基因工程手段将外源性基因与噬菌体基因融合,使外源基因编码的多肽或蛋白随噬菌体外壳蛋白的表达展示在噬菌体表面的生物技术.被展示的多肽或蛋白能够保持其相对独立的空间结构和生物活性,与靶分子识别、结合,因此,该技术可作为一种简单有效的筛选工具,成功用于肿瘤靶向肽的筛选、化疗药物的靶向运输、肿瘤抗体的制备等,在肿瘤的靶向治疗研究中发挥重要作用.
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NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用多肽的筛选及功能鉴定
目的以NF-κB p65亚基DNA结合域为诱饵蛋白,筛选能够与其发生相互作用的多肽,并鉴定这些多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.方法首先利用PCR搭桥扩增方法获取NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,后将其克隆到酵母双杂交pGBKT7 DNA-BD载体上,与GAL4 DNA-BD融合,形成GAL4 DNA-BD/p65BD融合蛋白;再以GAL4 DNA-BD/p65BD融合蛋白为诱饵蛋白行酵母双杂交实验,自16肽随机肽库中筛选与NF-κB p65亚基DNA结合域相互作用的多肽;后选择性人工合成筛选获得的多肽,并进行EMSA实验检测相互作用多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.结果扩增获得了NF-κB p65亚基DNA结合域的基因片段,并成功构建pGBKT7 DNA-BD/p65BD载体.自1.28×107个酵母转化子中终筛选获得5个阳性克隆,测序结果和同源氨基酸序列比对表明5个阳性多肽为p65BD新型相互作用多肽,其中4条多肽拥有一个共同的基序.EMSA实验结果表明合成的两条多肽对NF-κB的DNA结合活性均具有一定的抑制效应.结论经初筛、复选和假阳性鉴定,自16肽库中获得5个能与NF-κB p65亚基发生相互作用的新型多肽,并已证实其中两条多肽对NF-κB的DNA结合活性具有抑制效应.
