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活性氧在2-甲氧雌二醇诱导骨尤文肉瘤细胞凋亡中的作用
目的 研究在2-甲氧雌二醇(2-ME)诱导SK-N-MC尤文肉瘤细胞凋亡的过程中,调控细胞活性氧水平(ROS)的环节及ROS引发的下游事件.方法 利用流式细胞仪、clark氧电极等手段及撤药实验、线粒体通透性转换(PT)孔干预等方法检测2-ME作用下凋亡的可逆性及呼吸链活性、线粒体跨膜电势(△ψm)、细胞ROS水平等参数的变化,并考察它们之间的关系.结果 2-ME诱导SK-N-MC细胞发生依赖于ROS的细胞凋亡.2-ME作用3 h内撤药,至24 h无明显凋亡发生;3 h后撤药,至24 h有明显凋亡.2-ME作用下,线粒体呼吸链活性被抑制,ROS生成加速;△ψm经历"升高-降低"变化,3h时开始降低,PT孔稳定剂可维持△ψm不降低;ROS水平持续升高,3 h时有跳跃性增高,PT孔稳定剂对ROS升高趋势无明显影响.结论 2-ME作用引起SK-N-MC细胞呼吸链的抑制,引发△ψm的升高,由此造成ROS生成加速及ROS水平升高.当ROS水平突破一定阈值,引发了PT孔的不可逆开放及△ψm的消解乃至崩溃,并终使细胞走向凋亡.ROS是2-ME诱导凋亡信号传导中的一个环节.
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尤文联合地塞米松对大鼠急性肺损伤的疗效
目的 明确尤文联合地塞米松对大鼠急性肺损伤模型的效果及其相关机制. 方法 将96 只SD大鼠分别于气管内滴注LPS制备急性肺损伤模型,随机分为溶媒对照组( LPS组)、英脱利匹特组(ω-6 组)、尤文组(ω-3组)、地塞米松组( DXM组)、英脱利匹特+地塞米松组(ω-6 +DXM组)、尤文+地塞米松组(ω-3 +DXM组) ,分别给予相应的干预处理3 d后,HE染色检测肺组织病理改变,测定PaO2 及肺组织湿/干重比( W/D) ,ELISA法检测BALF中相关炎症因子的含量. 结果 LPS组与ω-6组大鼠肺泡隔增厚,肺组织出血、水肿及大量炎性细胞浸润,肺组织W/D比值明显高于其他各组;给予地塞米松或尤文后,模型大鼠死亡率降低,肺损伤程度减轻,PaO2 升高,BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6含量降低( P<0. 05 ). ω-3 组、DXM组、ω-6 +DXM组之间各检测指标无明显区别,而ω-3+DXM组肺组织基本正常,W/D比值低,PaO2 高,BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显低于其他各组;给予尤文后BALF中IL-10 明显增高,ω-3 组与ω-3 +DXM组BALF中IL-10 明显高于其他各组,差异均有统计学意义( P<0. 05 ). 结论 尤文联合地塞米松可通过调控TNF-α、IL-1β、IL-6 及IL-10等相关炎症因子的表达,减轻肺损伤.
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微RNA-29b抑制尤文肉瘤细胞的体外侵袭和血管拟态形成
目的:探讨微RNA-29b(microRNA-29b,miR-29b)在骨尤文肉瘤细胞中的表达及其对尤文肉瘤细胞体外侵袭和微血管拟态形成能力的影响.方法:采用实时荧光定量PCR法检测miR-29b在骨尤文肉瘤A673、SK-ES-1及RD-ES细胞中的表达水平.通过转染外源性miR-29b模拟片段(mimic)使A673和SK-ES-1细胞中miR-29b过表达,然后采用Transwell小室侵袭实验和体外血管拟态形成实验分别检测miR-29b过表达对A673及SK-ES-1细胞侵袭和血管拟态形成能力的影响,并采用蛋白质印迹法检测过表达miR-29b后尤文肉瘤A673和SK-ES-1细胞中信号转导与转录激活因子3 (signal transducer and activator factor of transcription 3,STAT3)及其磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3,p-STAT3)蛋白表达水平的变化.结果:与人间充质干细胞(对照组)相比,骨尤文肉瘤A673、SK-ES-1和RD-ES细胞中miR-29b表达水平呈下降趋势(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05).通过转染外源性miR-29b mimic,恢复A673及SK-ES-1细胞中miR-29b的表达后(P值均＜0.01),2种细胞的体外侵袭能力均较对照组明显降低(P值均＜ 0.01),体外新生血管形成能力也较对照组明显降低(P＜0.05,P＜ 0.01),而且尤文肉瘤细胞中STAT3及p-STAT3的表达水平均明显下调(P值均＜ 0.01).结论:尤文肉瘤细胞中miR-29b低表达,过表达miR-29b能够明显抑制尤文肉瘤细胞的体外侵袭及新生血管拟态形成,该作用可能与靶向调控STAT3通路有关.
