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SA脂质体介导血管抑素和/或内皮抑素基因治疗Lewis肺癌小鼠的实验研究
目的观察SA脂质体介导血管抑素和/或内皮抑素基因对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用.方法建立C57BL/6j小鼠肺癌模型,30只荷瘤鼠随机分空白对照组,SA脂质体对照组,血管抑素基因(pAng)治疗组,内皮抑素基因(pEnd)治疗组,血管抑素和内皮抑素基因联合治疗组,每组6只.以SA脂质体介导,将血管抑素和/或内皮抑素基因直接注入移植瘤内,每周2次,共6周,每周测瘤体大小2次,6周末处死所有小鼠,观察瘤体大小变化、肺表面转移灶数、生存期等.结果各治疗组均能抑制肿瘤增长及肺内转移,与对照组比较有统计学意义(P＜0.01),小鼠活动能力、饮食、对外界刺激的反应能力均无明显改变,生存期明显长于对照组.结论SA脂质体介导血管抑素和/或内皮抑素基因治疗可有效地抑制Lewis肺癌移植瘤的生长、转移,生存期明显长于对照组.
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应用阳离子脂质体介导内皮抑素和(或)p53基因治疗Lewis肺癌小鼠的实验研究
目的 观察SA阳离子脂质体介导内皮抑素基因和(或)p53基因对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用.方法 取Lewis肺癌细胞悬液建立C57BL/6j小黑鼠肺癌动物模型后,选择40只随机分成5组,每组8只,分别为空白对照组、实验对照组、p53治疗组、pEnd治疗组、pEnd+p53联合治疗组.小鼠成瘤后,瘤内注射SA阳离子脂质体介导的内皮抑素基因和(或)p53基因,每周2次,共6周.观察瘤体大小变化、小鼠营养状况、生存期等.结果 各治疗组均能抑制肿瘤生长及肺内转移,与对照组比较有统计学意义(P＜0.01),小鼠活动能力、饮食、对外界刺激反应能力等均优于对照组.结论 应用SA阳离子脂质体介导内皮抑素基因和(或)p53基因瘤内注射可有效地抑制Lewis肺癌移植瘤的生长、转移,小鼠生存期明显延长于对照组.内皮抑素基因与p53基因联合未发现协同作用.
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双血管抑制基因通过不同治疗方法对大鼠肝癌的抑瘤效果分析
目的 分析局部注射和肝动脉给予血管抑素基因(Angiostatin)和内皮抑素基因(Endostatin)重组质粒对大鼠肝癌治疗效果的差异.方法 将肝癌模型大鼠随机分为:局部治疗组、局部对照组、肝动脉治疗组、肝动脉对照组.治疗组给予200 μL质粒和脂质体复合物和对照组给予生理盐水200 μL.治疗后观测肿瘤大小、微血管密度、血管内皮生长因子、肿瘤凋亡指标的变化.结果 6 d开始基因治疗组各治疗指标与对照组相比均具有统计学差异,(P＜0.05-0.001).局部治疗组与肝动脉治疗组相比也具有统计学意义,(P＜0.05-0.01).结论 本研究的结果显示,重组质粒两种方式对于肝癌均有抑制效果,但肝动脉的抑瘤效果不如局部注射,主要与重组质粒进入肿瘤方式不同有关.
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腺病毒载体介导的内皮抑素基因的体外生物活性及其对小鼠黑色素瘤形成的影响
新生血管形成对肿瘤的生长具有重要意义.因此抑制血管生成成为肿瘤治疗研究的热点之一.
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肿瘤特异增殖腺病毒CNHK200-hEndo的构建及其抗裸鼠肺癌移植瘤疗效
目的:构建一种携带抗肿瘤血管生成基因Endostatin的新型肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo,观察其对人肺癌细胞裸鼠移植瘤的治疗效果.方法:克隆人抗血管生成基因Endostatin, 利用病毒重组技术将该基因插入肿瘤特异性增殖腺病毒CNHK200的基因组中,扩增并纯化CNHK200-hEndo病毒.建立裸鼠肺癌细胞移植瘤模型,观察CNHK200-hEndo抗肿瘤的效果,并与非增殖病毒Ad-hEndo对照.结果:成功构建一种新型的基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo,其E1b55kDa蛋白表达缺失.CNHK200-hEndo能在肿瘤细胞内大量增殖并高效表达Endostatin蛋白,表达量明显高于非增殖病毒Ad-hEndo(P<0.05).动物实验证实,CNHK200-hEndo对人类肺癌细胞的裸鼠移植瘤模型具有抑制肿瘤生长的疗效,与Ad-hEndo和空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论:构建的基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo能在肺癌细胞中增殖复制,提高Endostatin蛋白的表达,明显抑制肺癌细胞移植瘤的生长.
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内皮抑素基因对裸鼠移植骨肉瘤的抑制作用
目的:探讨内皮抑素(endostatin, ES)基因对裸鼠骨肉瘤细胞UMR106移植瘤的抑制作用.方法:携带ES基因重组质粒体外扩增后,应用脂质体法转染骨肉瘤细胞UMR106,Zeocin抗性筛选得到ES-UMR106细胞.MTT法观察ES基因对肿瘤细胞增殖的影响,ELISA法检测转染后肿瘤细胞的ES分泌情况.MTT法观察ES基因对血管内皮细胞增殖能力的影响.应用ES-UMR106和UMR106细胞制作裸鼠皮下移植瘤模型,观察两组动物移植瘤生长情况、瘤组织的病理变化及肺转移的情况.结果:ES基因转染不影响UMR106细胞的增殖能力;ES-UMR106细胞可表达有生物活性的ES,转染后48 h ES在培养液中超过350 ng/ml.ES-UMR106细胞分泌的ES可明显抑制血管内皮细胞增殖.与UMR106细胞相比,ES-UMR106细胞在裸鼠接种的移植瘤生长速度缓慢、包膜完整,病理组织学显示瘤体内血管稀少,肿瘤细胞广泛坏死;UMR106细胞移植瘤裸鼠肺组织出现转移灶(2/8),ES-UMR106细胞移植瘤裸鼠无肺转移灶.结论:携带ES基因重组质粒转染骨肉瘤UMR106细胞后可抑制该骨肉瘤细胞移植瘤的生长和转移.
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血管抑素基因和内皮抑素基因治疗裸鼠肺癌的初步研究
恶性肿瘤的发生、发展和转移均依赖于血管生成，以新生血管为靶点，抑制肿瘤血管生成已成为近年来癌症治疗的新策略。肿瘤血管生成是一个多步骤的复杂过程，并由多种血管生成因子和血管生成抑制因子共同调控所决定的。在血管生成抑制因子中，血管抑素(angiostatin)及内皮抑素(endostatin)起重要作用，两者均能强烈、特异性抑制血管内皮细胞增殖，阻断肿瘤的血管生成[1]。本研究应用人肺腺癌细胞系A549接种裸鼠成瘤，然后分别用血管抑素基因和内皮抑素基因瘤内注射进行治疗，以观察肿瘤生长受抑制情况。
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腺病毒携带凋亡素和内皮抑素双基因对小鼠肝癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨肝癌基因治疗的新方法 .方法 建立C57 BL/6j小鼠皮下种植性肝癌模型,随机分为A、B、C、D组各8只.A组注射腺病毒携带凋亡素和内皮抑素双基因,B组注射腺病毒携带凋亡素单基因,C组注射腺病毒携带绿色荧光蛋白基因,D组注射生理盐水.治疗后连续12 d监测各组肿瘤体积,计算抑瘤率,RT-PCR法检测肿瘤组织中凋亡素、内皮抑素mRNA表达;TUNEL染色法检测肿瘤组织的原位凋亡并计算凋亡指数. 结果 治疗后第7天A组肿瘤体积明显小于其他各组,抑瘤率明显高于其他各组(P均<0.05);A组肿瘤组织中有凋亡素和内皮抑素mRNA表达,B组肿瘤组织中有凋亡素mRNA表达;A组凋亡指数明显高于其他各组,P<0.05.结论 腺病毒携带凋亡素和内皮抑素双基因能显著抑制小鼠肝癌细胞生长并能诱导其凋亡;该病毒有望用于肝癌的基因治疗.
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双调控双功效溶瘤腺病毒的构建及意义
目的 构建表达Survivin基因小发卡RNA和内皮抑素基因的双调控双功效肿瘤特异性溶瘤腺病毒(CNHK500-shSRV-mE,以下简称双调控腺病毒),为肝癌的基因治疗奠定基础.方法 以人端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)调控腺病毒E1a基因,缺氧调控元件序列(HRE)调控E1b基因,重组双调控双功效的肿瘤特异性溶瘤腺病毒载体；于E1区插入Survivin基因序列设计特异shRNA和全长内皮抑素基因构建双调控腺病毒.将双调控腺病毒分别感染人肝癌细胞株SMMC-7721、BEL-7402,观察病毒的增殖活性.结果 双调控腺病毒能在肝癌细胞中特异性高拷贝增殖,而在正常细胞系中几乎不增殖.结论 双调控腺病毒成功构建；其为肝癌的基因治疗奠定了基础.
关键词： Survivin基因 小发卡RNA 内皮抑素基因 腺病毒 肝细胞癌 -
携带人内皮抑素基因的重组腺相关病毒感染对人脐静脉内皮细胞增生的影响
目的 评价携带人内皮抑素(endostatin,ES)基因的重组腺相关病毒(rAAV)感染对人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)增生的影响.方法 以不同感染复数的rAAV-ES感染ECV304细胞,Western blotting检测细胞裂解液中ES蛋白的表达,ELISA法检测ES蛋白的分泌情况,流式细胞仪分析感染后ECV304的细胞周期,MTT法检测ECV304增殖情况.结果 感染了rAAV-ES的ECV304细胞可表达并分泌ES蛋白,表达高峰在感染后96h,表达量为96.93μg·L-1;感染后的ECV304细胞增殖受到抑制,流式细胞仪分析其周期中G0与G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例显著减少;MTT检测显示以感染复数为5 ×105vg·cell-1感染96h时时ECV304细胞增殖的抑制率高(54.54±1.37)%.结论 rAAV-ES感染ECV304细胞后有高水平的ES蛋白表达并能显著抑制ECV304细胞的增殖.
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双调控双功效溶瘤腺病毒对肝癌的抑制作用
目的 观察表达Survivin基因小发卡RNA(shRNA)和内皮抑素基因(mE)的双调控双功效的肿瘤特异性溶瘤腺病毒在体内外实验中对肝癌的抗癌活性.方法 以重组的双调控双功效的肿瘤特异性溶瘤腺病毒感染肝癌细胞,Western blot鉴定肝癌细胞基因的蛋白表达,噻唑蓝(MTT)实验检测癌细胞增殖活性；建立肝癌裸鼠移植瘤模型,给予溶瘤腺病毒治疗,观察对移植瘤生长的抑制作用.结果 Western blot实验显示,CNHK500-shRNA-mE病毒增殖能够介导目的基因高效表达,有效抑制Survivin的表达；CNHK500-shRNA-mE感染肝癌细胞后,对肝癌细胞有特异性杀伤作用,在感染强度(MOI)=2时,CNHK.500-shRNA-mE感染组癌细胞存活率下降到50％以下,而对照病毒CNHK500-shRNA、CNHK500-mE、Ad-mE感染组癌细胞存活率均在80％左右；裸鼠SMMC-7721移植瘤模型经病毒治疗后,与对照组比较,CNHK500-shRNA-mE、CNHK500-shRNA、CNHK500-mE、Ad-mE的抑瘤率分别为77.41％ (P＜ 0.01)、59.27％ (P＜ 0.05)、35.96％ (P＜ 0.01)和25.94％ (P＜ 0.05),以CNHK500-shRNA-mE抑瘤作用强；CNHK500-shRNA-mE介导mE和shRNA高效表达,不但能够抑制间质肿瘤血管新生[对照组血管密度(MVD)=35.6±6.2,CNHK500-shRNA-mE组MVD=11.5 ±3.8,P＜0.01],而且大量诱导癌细胞凋亡[对照组凋亡率为(5.2±1.5)％,CNHK500-shRNA-mE组凋亡率为(26.3±7.5)％,P＜0.01].结论 携带shRNA和mE的双功效溶瘤腺病毒CNHK500-shRNA-mE比任一单功效腺病毒具有更强的肿瘤抑制作用.
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双靶向溶瘤腺病毒携带内皮抑素基因对肝癌的抑制作用
目的 构建双调控溶瘤腺病毒,携带小鼠内皮抑素基因(mE),研究其对裸鼠肝癌移植瘤的抗瘤活性.方法 以人端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)和缺氧调控元件序列(HRE)调控腺病毒E1a和E1b基因,基因组插入mE基因,构建双调控溶瘤腺病毒CNHK500-mE；在裸鼠模型中观察CNHK500-mE对肝癌移植瘤模型的疗效.结果 CNHK500能够在hTERT阳性的肝癌细胞中增殖[24 h:(16.67±4.04)％；48 h:(65.33 ±7.02)％;P＜0.01],并介导mE高效表达；与空白对照组( 1895.80±323.37) mm3比较,CNHK500-mE和Ad-mE的抑瘤率分别为50.95％[(929.80±211.10) mm3,P＜0.01]和29.99％[(1327.23 ±319.36) mm3,p＜0.05]；CNHK500-mE对癌组织间质血管的抑制作用明显强于Ad -mE(P ＜0.05).结论 将mE与溶瘤腺病毒结合,发挥病毒增殖的溶瘤作用和基因产物的血管抑制作用,表现出明显的协同抗瘤作用.
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新型血管生成抑制人内皮细胞抑制素-血管内皮细胞生长抑制因子151治疗胃癌的实验研究
目的研究重组腺病毒表达的人内皮细胞抑制素-血管内皮细胞生长抑制因子151(hENDO-VEGI151)融合蛋白对胃癌的抑制作用.方法构建携带hENDO-VEGI151融合基因的重组腺病毒载体,脂质体介导法包装重组腺病毒Ad IL-3/hENDO-VEGI151.体外检测融合基因的表达及融合蛋白的生物学活性.应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型及荷人胃癌裸鼠模型,进一步观察融合蛋白对活体血管生成的影响和融合基因治疗活体胃癌的疗效.结果用TCID50法测定携带融合基因的重组腺病毒滴度为4.2×1011TCID50/ml;用聚合酶链反应(PCR)、逆转录(RT)-PCR和免疫组织化学方法证实融合基因可被转导入SGC-7901细胞内并稳定高效地转录和表达;Western blot显示融合蛋白可被分泌到胞外发挥作用;融合蛋白可强烈抑制ECV-304细胞生长及鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成.Ad IL-3/hENDO-VEGI151治疗可强烈抑制裸鼠体内种植瘤生长,明显下调肿瘤微血管密度,促进胃癌细胞凋亡.结论 hENDO-VEGI151是一条新型强效的肿瘤血管生成抑制基因,其表达产物可能通过作用于肿瘤新生血管形成的不同环节强烈抑制新血管生成和肿瘤生长,值得进一步研究.
关键词： 内皮抑素基因 血管内皮细胞生长抑制因子基因 抗血管生成 胃癌 基因治疗 -
不同途径给予含血管内皮抑素基因的重组质粒的抑瘤作用研究
目的:比较局部注射和肝动脉灌注含内皮抑素基因的重组质粒抑制大鼠肝癌生长的差异.方法:将肝癌大鼠分为局部注射对照组、肝动脉灌注对照组、局部基因治疗组、肝动脉基因治疗组4组.分别给予200μl生理盐水及200μl质粒与脂质体的混合物(含20μg基因).结果:2个对照组之间的各项指标均未见到统计学差异,(P＞0.05).局部基因治疗组的抑瘤效果为明显,与对照组相比(P＜0.05).而且与肝动脉治疗组相比,在肿瘤体积增长率、生存时间、AI、VEGF表达率方面相比均具有统计学差异,[P＜(0.05-0.01)].肝动脉治疗组与肝动脉对照组相比,只有肺转移灶、AI具有统计学差异.结论:由于肝动脉给予基因药物受到血液容量、血液成分及脂质体转运效率影响,其抑瘤效果明显低于局部基因注射治疗组的抑瘤效果.采用正确的途径是影响基因治疗肿瘤的关键.
