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大鼠脑缺血后内质网伴侣蛋白GRP78和GRP94及胱冬酶12表达的改变
目的观察大鼠局灶性脑缺血时内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白(glucose-regulatedprotein GRP)78、GRP94及内质网凋亡因子胱冬酶(easpase)12的变化,探讨内质网分子伴侣及凋亡因子在脑缺血损伤中的作用.方法Wistar大鼠60只,雌雄各半,随机分为假手术组和缺血组,各为30只.采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血模型.应用免疫组织化学及半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测缺血6、12、24h大鼠纹状体GRP78、GRP94及caspase-12 mRNA表达变化.结果免疫组织化学和RT-PCR检测均发现缺血组GRP78、GRP94 mRNA表达低于假手术组(P＜0.05);其mRNA及蛋白表达在缺血12 h达峰值,与6、24 h比较差异有显著性(P＜0.05).缺血组缺血6h caspase-12表达升高,12 h达高峰,24h明显下降;假手术组未见caspase-12表达.结论大鼠纹状体缺血后可能通过GRP78、GRP94表达升高启动内质网自稳调节系统;严重的脑损伤GRP78、GRP94表达下降.内质网caspase-12凋亡通路的启动可能是脑缺血损伤的又一机制.
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PTSD样大鼠杏仁核内质网分子伴侣GRP 94和caspase-12表达的改变
目的 探讨杏仁核神经元内质网应激(ERS)相关因子葡萄糖调节蛋白94(GRP94)及胱冬酶12(c)在创伤后应激障碍(PTSD)大鼠发生发展中的作用.方法 建立无连续单一刺激(SPS)模型,随机分为SPS刺激后7天组(SPS7d)、14天组(SPS14d)及正常对照组.应用免疫组织化学、Western Blot、RT-PCR和透射电镜技术,检测和观察各组杏仁核神经元GRP94、caspase12 mRNA与蛋白表达及超微结构变化.结果 与正常对照组相比,SPS7d和SPS14d组神经元GRP94蛋白表达水平明显增加,GRP94 mRNA和caspase-12 mRA表达水平也明显增加(P＜ 0.05);SPS各组神经元均有核内异染色质凝聚、边集及粗面内质网扩张等不同程度的改变.结论 SPS刺激可能通过杏仁核神经元GRP94表达增加启动了内质网自稳调节系统及内质网相关的caspase-12凋亡径路,进而参与PTSD的发生.
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需肌醇酶1介导的内质网应激在暴发性肝功能衰竭肝细胞凋亡中的作用及其意义
目的 探讨需肌醇酶1(IRE1)介导的内质网应激肝细胞凋亡途径在暴发性肝功能衰竭中的作用及意义.方法 雄性Wistar大鼠共60只,暴发性肝功能衰竭模型组30只腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)+脂多糖(LPS),对照组30只腹腔注射0.9％氯化钠溶液,应用流式细胞技术观察两组大鼠肝细胞凋亡情况,分别采用免疫组织化学法及RT-PCR法动态观察肝组织中Caspase-12、IRE1蛋白及mRNA表达情况.多个独立样本采用Kruskal-Wallis H检验,同一时间点两两比较采用Mann-Whitney U检验,相关性分析采用秩相关.结果 模型组2、4、8和12h肝细胞凋亡率随着给药时间延长呈上升趋势(x2=25.475,P＜0.01),明显高于对照组(U=0,P＜0.01)；模型组随着给药时间的延长肝细胞胞质Caspase-12、IRE1α蛋白表达增多,对照组无表达；模型组Caspase-12、IRE1α mRNA表达随着给药时间的延长而增加,8h达高峰,以后逐渐下降,各时间点的差异均有统计学意义(x2=23.983,x2=24.820；均P＜0.01),明显高于对照组(U =0,P＜0.01)；IRE1与Caspase-12、细胞凋亡率均呈正相关(r=0.733,P＜0.01；r=0.715,P＜0.01),Caspase-12与肝细胞凋亡率呈正相关(r=0,586,P＜0.01).结论 IRE1介导的内质网应激肝细胞凋亡与暴发性肝功能衰竭的发生发展密切相关,早期干预内质网应激途径对防治肝功能衰竭可能具有保护作用.
