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去铁胺干预对大鼠ICH后水通道蛋白4表达变化的影响
目的观察水通道蛋白4(AQP4)在脑出血(ICH)模型组及去铁胺(DFO)干预组的表达变化及作用.方法采用自体血ICH模型,应用免疫组化及RT-PCR方法观察不同组别及时间段AQP4的表达.结果AQP4阳性细胞主要分布于脑内星形细胞足突与毛细血管接触区.AQP4蛋白表达在ICH模型组及DFO干预组均较假手术组明显增高且以第7天高,DFO干预组第7及第14天AQP4蛋白表达较同期ICH模型组显著降低.AQP4 mRNA表达在所有ICH组及DFO干预第3及第7天组较假手术组显著增高且以第3天高,ICH组第14与第7天AQP4 mRNA表达无显著差别.DFO干预各组与同期ICH模型组相比AQP4 mRNA表达显著降低,且DFO干预各组较前一时间点AQP4 mRNA表达呈显著下降趋势,DFO干预第14天组AQP4 mRNA表达与对照组无差别.AQP4蛋白表达与AQP4 mRNA表达呈正相关关系.结论AQP4在ICH后水肿的形成及消退中可能起重要作用,DFO可能对干预ICH后水肿形成有一定作用.
关键词： 脑出血 脑水肿 水通道蛋白4(AQP4) 去铁胺(DFO) -
去铁胺(DFO)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1的P15INK4B基因去甲基化
目的 探讨铁螯合剂去铁胺(deferoxamine,DFO)诱导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株SKM-1的P15INK4B基因去甲基化作用.方法以枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)和DFO处理SKM-1细胞,按不同铁负荷分成3组:对照组、FAC组和FAC+DFO组,分别检测不同铁负荷组细胞内可变铁池(labile ironpool,LIP)、细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)、P15INK4B基因甲基化状态、P15INK4B基因 mRNA表达情况、细胞增殖(CFSE的平均荧光强度MFI)、细胞早期凋亡率以及细胞周期.结果与对照组相比,FAC组的LIP (64.04%±2.12% vs.1.45%±0.65%)、ROS (45.57%±1.18% vs.33.38%±12.96%)、细胞增殖MFI (23.01%±5.20% vs.51.67%±1.61%)明显升高,P15INK4B基因mRNA表达水平(0.72±0.08 vs.1)和细胞早期凋亡率(13.97%±2.25% vs.22.53%±1.76%)明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与FAC组相比,FAC+DFO组的LIP (8.34%±4.21% vs.64.04%±2.12%)、ROS (34.39%±2.12% vs.45.57%±1.18%)、细胞增殖MFI (37.34%±6.61% vs.23.01%±5.20%)明显减少,P15INK4B基因mRNA表达水平(1.50±0.15 vs.0.72±0.08)和细胞早期凋亡率(55.07%±1.30% vs.13.97%±2.25%)明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);3组细胞周期的差异无统计学意义.结论 DFO可使LIP和ROS降低,诱导铁过载的SKM-1细胞P15INK4B基因去甲基化,使其mRNA重新表达,并可抑制铁过载的SKM-1细胞增殖,促进其凋亡.
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DFO、5-ALA不同浓度与pH值对大肠癌细胞原卟啉聚集的影响
目的:探讨DFO、5-ALA不同浓度和pH值对体外诱导大肠癌细胞原卟啉Ⅸ聚积的影响,为该药物诱导大肠癌组织原卟啉Ⅸ聚积用于大肠早癌的诊断提供铱据.方法:pH值分别为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8;5-ALA浓度分别为0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0moml/mL;DFO浓度分别为0.0、5、10、15、20、30moml/mL的诱导培养液分别培养2小时后终止培养.高效液相色谱一荧光检测仪测定细胞内原卟啉Ⅸ含量.结果:pH值为7.0时原卟啉Ⅸ含量高,与pH<6.5或pH≥7.5各组相比有显著差异(P<0.05);DFO浓度为10moml/mL时,5-ALA的适诱导浓度为1.5～2.0moml/mL:5-ALA浓度为2moml/mL时,DFO的适诱导浓度为10～20moml/mL.结论:5-ALA的适浓度为1.5～2.0moml/mL,DFO的适浓度为10～20moml/mL;诱导药物缓冲液的适pH值为6.5～7.
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DFO、5-ALA联合诱导大肠癌细胞原卟啉Ⅸ聚积的时间动力学研究
目的 探讨DFO、5-ALA联合体外诱导大肠癌SW480细胞原卟啉Ⅸ聚积随时间变化的规律,为该药物诱导大肠癌组织原卟啉Ⅸ聚积用于大肠早癌的诊断提供依据.方法 DFO、5-ALA浓度分别为10momL/mL、2 momL/mL的诱导培养液,作用SW480细胞2 h后,分别在2、3、4、5、8及10 h终止培养;SW480细胞用上述诱导培养液分别作用20、40、60、80、100及120 rain后终止培养;密度为1×10~6/mL的细胞悬液处理后.用高效液相色谱-荧光检测仪测定细胞内原卟啉Ⅸ含量.结果 SW480细胞株在药物作用2h后,细胞内原卟啉Ⅸ含量在第4h达到高峰;药物作用40min以后,原卟啉Ⅸ含量明显升高;60min以后各组间差异不明显.结论 DFO、5-AIA联合诱导时间短不得少于40min,药物作用后佳检测时间为第4小时.
