To date, it remains poorly understood whether astrocytes can be easily reprogrammed into neurons. Mash1 and Brn2 have been previously shown to cooperate to reprogram fibroblasts into neurons. In this study, we examined astrocytes from 2-month-old Sprague-Dawley rats, and found that Brn2 was expressed, but Mash1 was not detectable. Thus, we hypothesized that Mash1 alone could be used to reprogram astrocytes into neurons. We transfected a recombinant MSCV-MASH1 plasmid into astrocytes for 72 hours, and saw that all cells expressed Mash1. One week later, we observed the changes in morphology of astrocytes, which showed typical neuro-nal characteristics. Moreover,β-tubulin expression levels were signiifcantly higher in astrocytes expressing Mash1 than in control cells. These results indicate that Mash1 alone can reprogram astrocytes into neurons.

β-tubulin 在肾脏D5R 与CCKBR 相互调节中的重要作用

目的 探讨β-tubulin在胆囊收缩素B受体(cholecystokinin B receptor,CCKBR)和多巴胺D5受体(dopamine D5 receptor,D5R)相互作用的调节机制.方法 选用正常人和高血压患者肾脏近曲小管细胞(renal proximal tubular cells,RPTC),各分为3组:CCKBR激动剂(gastrin)处理组;D5R激动剂(fenoldopam)处理组;gastrin+微管抑制剂(nocodazole)组.免疫荧光法测定β-tubulin、CCKBR和D5R的定位,免疫印迹方法检测CCKBR、D5R和Na+,K+-ATP酶的表达.结果 Gastrin处理正常RPTC后D5R表达显著增加(P< 0.05),Na+, K+-ATP酶的表达降低(P<0.05),fenoldopam同样能够刺激CCKBR表达增加(P< 0.05),但nocodazole预处理后再加入gastrin并不能够增加D5R的表达,也不能降低Na+,K+-ATP酶的表达.高血压患者RPTC中CCKBR和D5R的相互作用以及Na+,K+-ATP酶的表达变化并不明显.免疫荧光结果显示,正常RPTC中CCKBR和D5R蛋白能够被诱导转移到细胞膜上,微管抑制剂能够显著阻断转移过程,但高血压患者RPTC中β-tubulin杂乱无章,CCKBR和D5R蛋白也没能有效转移到细胞膜上.结论 tubulin通过促进CCKBR和D5R从细胞质向细胞膜转运,从而发挥生物学功能,可能在二者相互作用和钠水代谢中起到重要作用.

Alzheimer病患者脑tau、β-tubulin的表达

目的观察Alzheimer病(AD)患者脑tau、β-tubulin的表达、分布与神经元骨架改变的关系.方法采用免疫组织化学方法观察tau、β-tubulin,在8例AD、5例非痴呆老人(ND)脑海马、嗅球、脑室周围皮质等部位的表达并进行半定量分析.结果 (1)AD组tau 蛋白与ND组相比表达明显增加(P<0.001),主要在额叶、颞叶、海马、脑室周及嗅球的表达增高(P<0.05);顶叶、枕叶无明显差异.大脑新皮层、海马神经元树突、胞膜均有表达,细胞核膜部分着色,部分神经元呈典型NFT样结构;星形胶质细胞也有表达.此外,神经毡细丝、老年斑亦有广泛表达.ND组tau散在表达,无NFT样神经元.(2) AD组的β-tubulin明显减少(P<0.001),额叶、颞叶、顶叶、海马及脑室周表达明显下降(P<0.05);而枕叶与嗅球无差异.β-tubulin在ND组,主要是海马及皮质神经元树突上广泛表达,白质区轴索结构也有阳性表达.结论 AD患者脑内tau表达增高且存在区域分布差异;而tau的过度产生与β-tubulin的表达减少和晚期AD脑内广泛的神经元丢失、结构破坏相一致,提示AD脑内神经原纤维缠结形成与二者改变的机制值得进一步探讨.

一种改良型的免疫印迹法

目的:蛋白免疫印迹法是现代生物实验过程中运用为广泛的实验技术,常规的免疫印迹法在应用过程中存在很多弊端,如浪费抗体等,因此非常有必要探索出一种新型的免疫印迹法,本文旨在探索一种能够节约抗体的免疫印迹实验方法.方法:将8只SD大鼠随机分常规组和改进组两组,每组4只,活取视网膜组织,进行组织匀浆、蛋白定量,取不同蛋白总量的匀浆变性液进行β-Tubulin的免疫印迹实验,比较两组之间β-Tubulin的蛋白表达量之间是否存在显著性差异,实验需重复三次.结果:不同总量蛋白的免疫印迹显示两组之间β-Tubulin的表达量并无显著性差异.但是,相比常规方法,改进法使用的抗体量更少,条带更容易检测得到.结论:改进后的免疫印迹法能有效的节约抗体,操作方便,实用性强.

构建Ad-XIAP感染原代培养老年性聋模型小鼠皮层神经细胞的实验研究

目的 构建携带绿色荧光(GFP)的X染色体连锁凋亡抑制蛋白基因的重组腺病毒载体(Ad-XIAP)感染体外原代培养老年性聋小鼠模型(C57BL/6J)皮层神经细胞,为后续体内基因治疗实验提供体外研究基础.方法 体外培养C57BL/6J小鼠皮层神经细胞,β-Tubulin鉴定其纯度；利用Ad-Easy载体系统通过细菌内同源重组法构建携带XIAP基因的腺病毒表达载体,筛选鉴定并线性化后获得重组腺病毒载体,TCID50法测定其滴度后转染体外原代培养的皮层神经细胞,观察其感染效率并用RT-PCR检测细胞内XIAP-mRNA表达量.结果 PCR及酶切鉴定穿梭质粒含有XIAP基因,经筛选和鉴定的Ad-XIAP感染皮层神经细胞72 h后观察到细胞携带绿色荧光强,此时XIAP-mRNA表达量高.结论 成功构建了携带XIAP基因的高滴度重组腺病毒载体,滴度高、皮层神经细胞感染率大于90％,为后续试验提供了体外研究基础.

原代培养大鼠皮质神经元中β-Tubulin的表达

目的 观察原代培养大鼠皮质神经元生长过程中β-Tubulin的表达变化并进行图像分析.方法 取孕13～14天胚鼠大脑皮质接种于覆有多聚赖氨酸的爬片上,培养液为添加了B27(v/v%:2%)和Glutamax(v/v%:1%)的Neurobasl Medium(Gibco).细胞爬片进行免疫细胞化学染色,显微镜观察,LeicaD MR+Q550图像分析系统进行图像分析.结果 β-Tubulin表达和分布随着神经元发育成熟而变化,生长初期主要分布于核周附近,随神经元的成熟散在分布于胞质及突起内,构成细胞骨架,维持细胞形态.结论 在神经元生长过程中伴随有β-Tubulin的表达变化,随神经元的成熟而构成细胞骨架,维持细胞形态.

脱氧新羟曲霉酸产生菌2101的分类鉴别

从土壤中分离到一株真菌菌株2101,经鉴定该菌株发酵产物2101C是新结构化合物-脱氧新羟曲霉酸.通过rDNA-ITS和(β-tubulin等基因序列的分析比对得到与Aspergillus属中相似性较高的3株菌株(Aspergillus persii,Aspergillus bridgeri和Aspergillus sclerotiorum),结合传统真菌分类方法与这三株菌进行比对,菌株2101定名为Aspergillus sclerotiorum.