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家兔死后心血氧化还原电位值变化与死亡时间的关系
目的：研究在不同温度条件下家兔死后心血氧化还原电位（oxidation reduction potential，ORP）值变化与死亡时间（postmortem interval，PMI）的关系。方法随机将48只家兔分为6组，以空气栓塞法处死后，取家兔右心室血液分别置于10、15、20、25、30和35℃温度下的水浴中，自取血即刻（0 h）至死后132 h内，每4 h用PB-21型电化学分析仪测定样本的ORP值。应用SPSS 17.0软件建立曲线回归方程，再应用MATLAB 7.10.0软件建立曲面方程和三维曲面图。结果不同温度条件下家兔心血ORP值变化与PMI具有高度相关性，温度高时，ORP值上升明显，温度低时，ORP值上升缓慢，并获得拟合的曲面方程以及三维曲面图。结论拟合的ORP值与PMI的曲面方程及三维曲面图可进行温度变化条件下的PMI推断。
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兔死后角膜厚度与死亡时间的关系
目的 研究兔死后角膜厚度变化规律与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系. 方法 用空气栓塞法建立兔死亡模型.在兔死后0～72h,每隔6h进行角膜取材,切片后常规HE染色,用光学显微镜摄取全角膜图像,结合Motic Images Plus 2.0图像分析软件观察角膜上皮层厚度(x1)、角膜基质层厚度(x2)、全角膜厚度(x3)3项指标的变化值,并作统计学分析,建立与PMI(y)的回归方程.结果 在兔死后72h内,角膜基质层厚度和全角膜厚度均在死后12h开始增加,并在死后54h达到高峰,两者与PMI正相关,回归方程分别为y=-0.0702 x22+11.398 x2+1 634 (R2=0.7122,P＜0.05),y=-0.0749 x32+12.036 x3+1 819.4 (R2=0.6750,P＜0.05).结论 角膜基质层厚度和全角膜厚度与PMI之间呈较好的线性关系,且角膜基质层厚度优于全角膜厚度,可作为推断死亡时间的指标.
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窒息死大鼠肝脾傅里叶变换红外光谱变化与死亡时间的关系
目的 应用傅里叶变换红外(Fourier transform infrared,FTIR)光谱技术观察窒息死大鼠肝、脾组织的光谱变化规律,寻找推断死亡时间的新方法. 方法 将大鼠机械性窒息处死后,尸体保存于(20±2)℃的环境下,提取死后15d内各时间点肝、脾组织样本,进行红外光谱测量,运用统计软件推导大鼠死后肝、脾组织不同区域的吸收峰吸光度(A)比值(x)对死亡时间(y)拟合的数学模型. 结果 吸光度比值随大鼠死亡时间的延长呈上升、下降及保持稳定3个趋势.佳拟合曲线为三次方曲线,肝较脾的拟合相关系数高,其中肝A1541/A1396的相关系数高(r=0.966).大多数吸光度比值从死后6～7 d开始呈平台期. 结论 FTIR 光谱技术作为推断死亡时间的新方法,在推断7d以内的死亡时间具有一定的应用价值.
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窒息死大鼠肌肉傅里叶变换红外光谱变化与死亡时间的关系
目的 应用傅里叶变换红外(Fourier transform infrared,FTIR)光谱技术分析大鼠死后心肌及骨骼肌随死亡时间推移的化学降解过程,为死亡时间推断提供新的途径与方法.方法 大鼠机械性窒息处死后,在不同死亡时间点提取左心室心肌及骨骼肌,用FTIR光谱仪测定不同化学基团的变化,计算不同吸收峰吸光度(A)的比值,将吸光度比值(x)和死亡时间(y)进行曲线拟合建立6种数学模型.结果 大鼠肌肉组织FTIR光谱的主要吸收峰随着死亡时间延长表现为增强、下降和稳定3种变化方式.三次方曲线有佳的拟合相关系数,骨骼肌A1080/A1396相关系数高(r=0.832),推断PMI更准确.结论 应用FTIR光谱技术检测死后心肌和骨骼肌组织的光谱学改变在法医病理学死亡时间推断中具有一定的应用价值.
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超声法测量角膜厚度推断死亡时间
目的 用超声法测量角膜厚度,探索其死后变化规律.方法 11只家兔随机分为两组,分别为角膜上皮完整组及去角膜上皮组.后者采用机械刮除法去除角膜上皮.利用超声测厚仪连续监测两组动物的死后多个时间点的角膜厚度,并对角膜厚度变化与死亡时间进行相关回归分析.结果 超声法测量角膜上皮完整组死后兔角膜厚度的变化值与死亡时间呈非线性相关,且具有较强的相关性,相关系数为0.922,而去角膜上皮组的相关系数为0.822.结论 超声法测量角膜厚度对推断早期死亡时间具有较可靠的应用前景.完整的角膜上皮对于超声测量角膜厚度具有关键作用.
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实时RT-PCR常用内对照在死亡早期人心肌内的稳定性
目的 探讨实时RT-PCR方法常用内对照表达水平在死亡早期人体心肌组织中的稳定性.方法 选取10例具有一致的外界环境(平均存放温度25℃)、不同死亡时间(4.3～22.3 h)的个体,提取心肌组织的总RNA.选择6个常用内对照:β-actin、GAPDH、B2M、U6、18S rRNA、HSA-miR-1,通过实时RT-PCR检测其在心肌组织的表达水平.利用genormPLUS软件评估内对照在死亡早期表达水平的稳定性,挑选出稳定的内对照并且分析其表达水平与相关因素(年龄、性别、死因)的关系. 结果 死亡早期心肌组织中U6表达水平稳定,其表达量与年龄、性别及死因无关(P＞0.05).结论 U6可以作为实时RT-PCR方法研究死亡时间与心肌组织中核酸降解之间规律的理想内对照.
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水中尸体软组织生物力学性状时序性变化用于死亡时间推断
目的 探讨水中浸泡尸体软组织生物力学性状的时序性变化规律及其用于PMI推断的价值. 方法 SD大鼠颈椎脱臼处死后恒温下置于自来水中浸泡,按死后0、6、12、18、24、30、36、42、48、60、72、96、120、144、168、192h时间点分组,分别取血管壁、皮肤、肌肉、小肠和结肠组织,应用万能材料试验机检测各组织的极限载荷、应变、大应力等生物力学参数. 结果 除血管壁外,皮肤、肌肉、小肠和结肠等软组织的生物力学性状均随死亡时间呈逐渐下降时序性变化,存在各自不同的与PMI明显线性关系的“窗口期”. 结论 水中尸体软组织的生物力学性状的时序性变化与PMI之间存在一定规律性相关,可作为推断PMI的一种简便和量化的新技术手段.尸体周围散热介质的比热容可能是影响尸温、组织自溶腐败及其生物力学性状的物理学因素之一.
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家兔死后心肌酰胺A带的傅里叶变换红外光谱图像分析
目的 应用傅里叶变换红外光谱成像系统研究家兔心肌酰胺A带变化与死亡时间的关系.方法 将32只家兔处死后取出心脏,20℃保存,于48h内不同时间点取样并制作切片.用傅里叶变换红外光谱成像系统绘制酰胺A带图像,分析研究死后酰胺A带阳性与阴性面积比的变化规律. 结果 48h内随死亡时间(x)的延长,酰胺A带的阳性与阴性面积比(y)逐渐下降,二次曲线回归方程为y,=0.001 x2-0.038 x+0.747(R2=0.940). 结论 酰胺A带的阳性与阴性面积比与死亡时间有明显的相关性,可望用于推断早期死亡时间.
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小鼠死后脑RNA降解与死亡时间的相关性
目的 探讨小鼠死后不同时间和温度下脑组织β-actin mRNA、18S rRNA的降解规律与死亡时间的关系.方法 将24只健康成年C57BL/6小鼠随机分为2组,每组12只,断颈法处死后分别置于不同的环境温度中(4℃、37℃),恒定环境湿度为80%.分别于死后即刻和0.5、2、6、24、48h取小鼠脑组织进行总RNA提取.利用RT-PCR技术和实时荧光定量PCR技术测定每一样本中β-actin mRNA和18S rRNA的Ct值,进一步计算每个样本中18S rRNA与β-actin mRNA的含量比值,对二者含量比值与死亡时间的关系进行统计学回归分析.结果 37℃下,RNA降解速度明显快于4℃,表明温度与死后RNA的降解速度呈正相关.与β-actin mRNA的稳定性相比,18S rRNA更为稳定.结论 通过采用实时荧光定量PCR技术研究小鼠死后脑组织中β-actin mRNA和18S rRNA的降解规律,可为法医学死亡时间推断提供新的理论基础.
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猪眼玻璃体液钾离子、次黄嘌呤浓度变化与PMI推断
目的 研究猪眼玻璃体液成分变化及其与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系.方法放血处死家猪后取带眼睑的眼球96只,随机分为24组,在避光、温度(15±2)℃、湿度(50±5)%条件下分别放置2～96h,采集玻璃体液,运用全自动生化检测仪、超高效液相色谱检测K+、Na+、Cl-及次黄嘌呤(hypoxan-thine,Hx)浓度:用SPSS统计软件检测数据进行统计分析.结果玻璃体液中K+、Hx的浓度与PMI呈线性相关,R2分别为0.767和0.793;K+和Hx两者浓度与PMI经二元线性回归分析,R2为0.866;玻璃体液中Na+、Cl-浓度与PMI无明显相关性.结论 玻璃体液K+、Hx浓度变化可作为较为客观的推断PMI的参考指标.两者与PMI的二元回归方程推断死亡时间有更高的准确性.
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大鼠死后脑、心肌和肾组织β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系
目的 研究SD大鼠脑、心肌和肾组织细胞内β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断寻找新的指标.方法 大鼠处死后置于20℃的环境中,分别于死后不同时间点提取脑、心肌、肾的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测总RNA中β-actin mRNA的水平(Ct值),分析死后经过时间与Ct值的线性关系.并建立推断早期死亡时间的线性回归方程.结果 随死亡时间的延长,3种组织内β-actin mRNA的水平均发生了显著的下降,心肌和肾组织中β-actin mRNA死后24h内的降解速率更显著,而脑组织中β-actin mRNA的降解速率变化不明显.各组织的Ct值变化与死亡时间之间存在一定的线性关系.结论 大鼠死亡早期脑、心肌和肾组织内β-actin mRNA降解明显,可以通过其降解规律来推断早期死亡时间.
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猪眼房水中K+、Na+质量浓度与死亡时间的关系
目的 探讨房水中K+、Na+质量浓度与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系. 方法 利用Z-500原子吸收分光光度计检测在4℃、28℃下猪死后48h内眼房水中的K+、Na+质量浓度. 结果 4℃温度下,死后48h猪眼房水中K+、Na+质量浓度与PMI相关.推定方程为PMI=-0.178[K+]2+49.978(R2=0.995).PMI=120.987/[Na+/K+]-28.834(R2=0.905). 结论 房水中K+质量浓度变化可作为推断低温环境下尸体PMI的参考指标之一.
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大鼠肌肉中微生物ATP含量及其在死亡时间推断中的应用
目的 研究死后大鼠肌肉组织中微生物ATP浓度变化及其与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系. 方法取健康SD大鼠处死,死后不同时间取肌肉组织,用生物发光法检测微生物ATP浓度,对所得数据进行统计学处理.结果 死后肌肉组织中微生物ATP含量随时间延长而增加,于7d达到高峰,随后逐渐降低,并于10d再次略微升高.PMI在0～9d内与肌肉中微生物ATP含量变化拟合优.以PMI为自变量的三次多项式回归方程为:y=0.020x3-0.166x2-0.666x+13.412(r2=0.989,P<0.01).结论 死后肌肉组织中微生物ATP含量变化可用于PMI推测;本检测方法所需检材量小,不受组织自身降解的影响.
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大鼠死后脑组织的傅里叶变换红外光谱变化
目的 应用傅里叶变换红外(Fourier transform infrared, FTIR)光谱技术分析大鼠死后脑组织随死亡时间推移的化学变化过程,为死亡时间推断的研究提供新的途径与数据.方法 大鼠断颈处死后置于(30±2)℃环境下,在不同时间点提取大鼠脑皮质,运用FTIR光谱仪检测不同化学基团的变化.结果 随着死亡时间的推移,大鼠脑组织FTIR光谱的主要吸收峰峰住没有明显变化,而其峰强有明显差异:(1)与核酸有关的谱带的相对峰强呈明显下降趋势;(2)酰胺Ⅰ、Ⅱ的峰强比(I1647/I1541)呈下降趋势;(3)1456和1398cm-1谱带的峰强各自呈下降和上升趋势;(4)2852、2871、2923和2958cm-1谱带的峰强相对于1647cm-1而言,呈上升趋势.结论 脑组织可以作为FTIR光谱技术分析死亡时间的适用检材.
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大鼠死后肌动蛋白降解与死亡时间的相关性
目的 观察大鼠死后不同时间心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌肌动蛋白(actin)的降解规律,为晚期死亡时间(postmortem interval, PMI)的推断寻找客观指标.方法 28只SD大鼠随机分为7组,经机械性窒息致死后,分别置于20℃恒温箱内,于0、24、48、72、96、120和168h后剖取以上器官,应用免疫印迹技术检测各组织内actin的含量,SPSS11.5软件对所得数据进行方差分析.结果 大鼠死后上述各器官actin含量均随PMI的延长而逐渐下降,与PMI相关,决定系数(R2)均在0.75以上.但actin在上述各器官内的降解速度有显著差异(P<0.05),在脑组织中降解速度快,其余依次为肺、脾、肝、肾、心肌和骨骼肌.结论 尽管大鼠死后心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌actin的降解规律具有组织差异性,但是actin在上述组织中的含量变化与PMI相关,有助于较晚期PMI的推断.
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磁共振波谱技术推测不同温度下的死亡时间
目的 利用单体素质子磁共振波谱技术推断不同温度下的死亡时间(postmortem interval,PMI),探讨不受外界环境温度影响下推断PMI的可行性.方法 选取24只白兔,分为A组(100C)、B组(300℃),利用磁共振单体素波谱测定死后0.5、1、2、4、6、8、12、16和24h脑内N-乙酰天冬氨酸(N-acetyl-aspartate,Naa)、胆碱复合物(Choline,Cho)、磷酸肌酸和肌酸(phosphocreatine and creatine,Cr峰下面积(相对含量)及各代谢物之间相对含量的比值.结果 在死后24h内Naa和Cr峰下面积随PMI的延长而减少,Naa/Cr、Cho/Cr随PMI的延长而降低.回归分析:自变量为Naa/Cr的二次多项式方程为:y=0.001x2-0.803x+1.4498(R2=0.962):自变量为Cho/Cr的二次多项式方程为:y=-0.0024x2+0.926x+1.1777(R2=0.986).用Naa/Cr的方程推测PMI,当PMI<24h时,平均偏离时间为2.10～37.90min,用Cho/Cr的方程推测PMI,当PMI<24h时,平均偏离时间为1.69～40.87min.结论 Naa/Cr、Cho/Cr的死后变化与时间呈强相关性且受环境温度影响不大,可用于不同温度下PMI推断.
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家兔死后玻璃体液电导率变化与死亡时间的关系
目的 探讨家兔死后玻璃体液电导率变化与死亡时间的相关性.方法 采用电导分析法检测家兔30℃下死后48h内及20 ℃下死后120h内玻璃体液电导率变化.结果 30℃和20℃下家兔死后玻璃体液电导率随死亡时间延长而持续升高.经统计分析得到抛物线型二项式回归方程,其相关系数分别为0.970和0.983,两式P＜0.01.结论 家兔死后玻璃体液电导率升高程度可以作为推断死亡时间的参考指标.
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利用多体素氢质子磁共振波谱推测死亡时间
目的 利用多体素氢质子磁共振波谱推断死亡时间.方法 选取12只白兔,利用多体素磁共振波谱测定死后0.5、1、2、4、6、8、12、16、24h脑内N-乙酰天冬氨酸、胆碱复合物及磷酸肌酸和肌酸的代谢值.结果 在死后24h内Ana/Kr、Naa/Ch随死亡时间的延长而降低;Ch/Cr先升高再下降,然后持续升高.结论 经多体素质子磁共振研究,Naa/Cr、Naa/Ch、Ch/Cr死后改变呈现一定规律,可用于推断死亡时间.
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大鼠死后骨骼肌FTIR光谱变化与死亡时间的关系
目的 应用傅立叶变换红外光谱(FFIR)分析大鼠死后骨骼肌随死亡时间推移的化学降解过程,为死亡时间推断提供新的研究方法 .方法 大鼠断颈处死后置于(20+2)℃环境,不同的死亡时间点提取大鼠大腿骨骼肌组织,并运用FTIR光谱仪测定不同化学基团随死亡时间的变化.结果 随着死亡时间的推移,大鼠骨骼肌组织不同吸收峰的峰强随着死亡时间增加呈现出四种不同的变化方式:增加、下降、稳定、波动,且不同峰强比显示了相似的时间变化趋势.结论 FTIR光谱分析技术有望成为法医实践中推断死亡时间的新方法 .
关键词： 傅立叶变换红外光谱(FFIR) 死亡时间 骨骼肌 化学基团 -
大鼠死后腓肠肌内糖原含量变化与死亡时间的关系
目的 研究大鼠死亡后腓肠肌内糖原含量变化与死亡时间之间的关系.方法 采用断颈、机械性窒息、失血性休克三种方法 分别处死大鼠,于死亡后0、0.5、1、1.5、2、3、4、8、12、18和24h时间点取腓肠肌,利用PAS染色方法 并结合计算机图像分析技术分析糖原含量变化.结果 大鼠腓肠肌内糖原含量和阳性面积随死亡后时间的延长而呈线性减少.结论 腓肠肌内糖原含量和阳性面积可作为死亡时间推断的参考指标.
