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耐药性癫(癎)患者颞叶中细胞周期依赖性蛋白激酶5的表达
目的 研究细胞周期依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinases 5,CDK5)在耐药性癫(癎)患者颞叶中的表达,探索其在耐药性癫(癎)发病机制中的作用.方法 收集耐药性癫(癎)患者术后脑组织,用荧光定量PCR、免疫组化和Western blot 3种检测方法从基因和蛋白水平分别测定CDK5在耐药性癫(癎)患者颞叶中的表达,并与对照组进行比较.结果 荧光定量PCR发现CDK5 mRAN比对照组明显增加,免疫组化检测显示这种基因的蛋白表达产物主要分布在神经元轴突和胶质细胞中,Western blot检测在相对分子质量35 000处有一蛋白条带,并且可见实验组(颞叶和海马中分别为1.4293±0.1839和2.0733±0.4738)高于对照组(颞叶和海马中分别为0.9680±0.4147和1.403±0.6163,P＜0.05).结论 CDK5在耐药性癫(癎)患者颞叶中表达增强,提示他们可能参与了耐药性癫(癎)的形成.
关键词： 癫(癎) 颞叶 细胞周期蛋白质依赖性激酶类 抗药性 -
细胞周期蛋白依赖性激酶7基因沉默或敲除抑制卵巢癌细胞增殖及其机制探讨
目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶7 (cyclin-dependent kinase 7,CDK7)对卵巢癌细胞增殖的作用.方法:应用特异性siRNA转染法沉默卵巢癌OVCA433、TOV-112D和IGROV1细胞中CDK7基因表达后,采用CCK-8法检测细胞增殖能力.应用成簇的规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)及其相关核酸内切酶9(CRISPR-associated endonuclease 9,Cas9)基因编辑系统敲除卵巢癌HEY、OVCA420、OVCA433和IGROV1细胞中的CDK7基因后,采用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力.用CDK7抑制剂THZ1处理卵巢癌TOV-112D、IGROV1、OVCA433、OVCAR8、OV90、SKOV3和COV413B细胞后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测TOV-112D、IGROV1、OVCA433、OVCAR8和OV90细胞增殖和克隆形成能力,蛋白质印迹法检测IGROV1、OVCA433、SKOV3和COV413B细胞中CDK7蛋白表达水平和RNA聚合酶Ⅱ磷酸化水平.结果:沉默或敲除CDK7基因后,卵巢癌细胞的增殖和克隆形成能力均明显减弱(P值均＜ 0.05).THZ1处理可抑制卵巢癌细胞的增殖和克隆形成,并下调CDK7蛋白表达和RNA聚合酶Ⅱ磷酸化(P值均＜0.05).结论:CDK7可能通过调控RNA聚合酶Ⅱ磷酸化,促进卵巢癌细胞的增殖.
关键词： 卵巢肿瘤 细胞增殖 基因沉默 基因敲除技术 细胞周期蛋白质依赖性激酶类 -
p16和CDK4在子宫内膜腺癌中的表达及其临床意义
目的:探讨p16和细胞周期素依赖性激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)在子宫内膜腺癌中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组化SP法检测32例子宫内膜腺癌中p16和CDK4蛋白的表达.结果:32例子宫内膜腺癌中p16蛋白表达阳性率为43.8%,p16阳性表达与子宫内膜腺癌的组织学分级、肌层浸润深度和淋巴结转移呈负相关(P＜0.05),但和临床分期无关(P＞0.05).CDK4在子宫内膜腺癌中的阳性表达率为68.8%(22/32),CDK4阳性表达与子宫内膜腺癌的浸润深度和淋巴结转移呈正相关(P＜0.05),与组织学分级和临床分期无关(P＞0.05).p16和CDK4的表达呈负相关(P＜0.05).结论:p16和CDK4作为细胞周期调控因子可能参与了子宫内膜腺癌的发生发展.
关键词： 子宫内膜癌 基因 p16 细胞周期蛋白质依赖性激酶类 免疫组织化学 -
血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞肥厚过程中MAPK对细胞周期素依赖性激酶抑制因子的调节作用
目的观察在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)肥厚过程中,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性和细胞周期素依赖性激酶抑制因子p27、p21、p57蛋白表达量的变化,探讨MAPK对细胞周期素依赖性激酶抑制因子的调节作用.方法分离SD大鼠主动脉中层平滑肌,贴壁法培养平滑肌细胞,无血清培养基培养静止后,加入AngⅡ1×10-6mol/L和/或豆蔻酸佛波酰乙酯(PMA)20 nmol/L,以无血清培养基培养的VSMC作对照.在刺激后90 min收集细胞,用免疫沉淀法检测MAPK活性的改变.在刺激后6和24 h收集细胞,用Western blotting法检测p27、p57和p21蛋白表达量.结果AngⅡ可以使MAPK活性升高,但其升高幅度较低(仅较对照组增加了138%),未能抑制p27蛋白的表达,不能使VSMC增殖.PMA和AngⅡ共同作用时,可以轻度抑制p27蛋白的表达,但仍未能使VSMC增殖.结论MAPK通路是VSMC胞外增殖肥厚刺激信号进入核内的一条重要信息传导通路.
