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应用多重连接依赖性探针扩增定量技术检测假肥大型肌营养不良重复突变及携带状态
目的 应用多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术对假肥大型肌营养不良(DMD及BMD)患者及其家系成员进行dystrophin基因分析,探讨MLPA定量技术在本病重复突变及携带者检测中的优势.方法 以355例DMD及BMD患者、46名缺失型患者之母和8名重复型患者之母为研究对象,应用MLPA技术对dystrophin基因全长外显子进行分析,对于单一外显子缺失的样本采用PCR及测序进行验证.结果 经MLPA分析,全部355例患者中190例为dystrophin基因缺失型患者,在其余非缺失型患者中检测出34例重复型突变.此外,在46名缺失型患者的母亲中发现了28名携带者,在8名重复型患者的母亲中发现了6名携带者,两组患者母亲携带者频率差异无统计学意义.经过测序验证,在1例单一外显子缺失的患者中发现17号外显子存在AGGGAACAGATCCTGGTAAAGCA小片段缺失.结论 与传统的定量方法相比,MLPA定量技术可对DMD及BMD患者全长外显子区域同时进行缺失、重复分析,并能对患者家系成员的携带状态进行判定.此外,MLPA检测结果受模板DNA的浓度及纯度影响较小.
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假肥大型肌营养不良基因诊断技术研究进展
假肥大型肌营养不良是由于Dystrophin基因突变而导致的X-连锁隐型遗传病，目前对这种疾病还没有有效的治疗方法。通过基因诊断技术对假肥大型肌营养不良患者以及携带者进行准确、全面的突变检测，进而进行产前诊断避免患儿的出生是目前解决这一问题的有效途径。近几年来，一些常规的Dystrophin基因突变检测技术有了新的进展，同时也出现了一些全新的技术。该文对几种重要检测技术的研究进展进行综述。
关键词： 假肥大型肌营养不良 Dystrophin基因 基因诊断技术 -
河南省杜氏肌营养不良患者dystrophin基因突变的MLPA检测
目的:探讨多重连接依赖式探针扩增技术(MLPA)在杜氏肌营养不良(DMD)患者基因诊断中的应用价值,了解河南省DMD患者dystrophin基因突变热点.方法:采用MLPA检测48例河南省DMD患者及13例缺失型患者母亲dystrophin基因突变.结果:48例DMD患者中,有31例(64.6％)检测出dystrophin基因外显子缺失,4例(8.3％)检测出外显子重复.河南省DMD患者dystrophin基因缺失/重复热点区域为第46～53外显子和第8～18外显子.13例患者母亲有11人检测出杂合突变,突变类型与患者相同,余2人未检测出突变.河南省DMD患者基因外显子缺失、重复分布与北京相似(x2=0.256,P=0.880),但与香港和台湾地区有着较大差异(x2分别为11.470和11.303,P分别为0.003和0.004).结论:MLPA在DMD患者及携带者基因诊断中有很高的应用价值.河南省DMD患者dystrophin基因的突变热点与国内其他地区有差异.
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12例DMD患者Dystrophin基因的突变分析
目的 探讨Dystrophin基因的突变特点、分布模式以及所导致的氨基酸变化.方法 应用高通量测序技术对符合临床诊断但未发现Dystrophin基因外显子缺失或重复的12例Duchenne型肌营养不良患者进行测序分析.选取50名成年男性志愿者作为正常对照.结果 12例患者均检测出Dystrophin基因点突变,其突变位点分别为c.33C>G、c.583C>T、c.1333C>T、c.2593C>T、c.5731A>T、c.7288 G>T、c.2803+1G>T、c.10034G>A、c.4289A>G、c.1905_1906delAG、c.5017delC、c.5768_5771 delAAGA、c.6261_6262insA,均为未报道过的新突变.在50名正常对照中未检测到相同的突变.结论 检测到Dystrophin基因的13个新的突变位点,丰富了Dystrophin基因突变谱,为临床基因诊断提供了重要的依据.
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Dystrophin基因外显子无缺失或重复家系的基因诊断及产前诊断
目的 对一个Dystrophin基因外显子无缺失或重复家系进行基因诊断及产前诊断.方法 首先应用多重连接依赖探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术检测该家系成员Dystrophin基因外显子缺失或重复情况,然后应用PCR-测序技术分析患者及孕妇Dystrophin基因79个外显子编码序列及其碱基突变情况.后,根据上述检测结果确定该家系Dystrophin基因致病突变并指导其产前诊断.结果 MLPA结果显示患者及其家系成员Dystrophin基因外显子未见缺失或重复;PCR-测序结果显示患者Dystrophin基因第70外显子第22位存在无义突变C＞T,使密码子由CGA突变为终止密码子TGA,孕妇及其女儿该位点为杂合突变(C/T).羊水标本Y染色体性别决定基因阳性,Dystrophin基因外显子未见缺失或重复,第70外显子第22位存在纯合突变(C＞T),且连锁分析显示其继承的母源X染色体与患者相同.结论 明确了该家系Dystrophin基因的致病突变,并对其进行了产前基因诊断.
关键词： 杜氏肌营养不良 Dystrophin基因 点突变 产前诊断 多重连接依赖探针扩增 -
多重连接依赖的探针扩增技术在Dystrophin 基因外显子拷贝数异常临床检测中的研究
目的 阐明多重连接依赖的探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)在Dystrophin基因外显子拷贝数异常检测中的优势和局限,探讨MLPA单外显子异常结果的处理方法.方法 应用MLPA对70例确诊的Duchenne/Becker肌营养不良(Duchenne/Becker musculardystrophy,DMD/BMD)患者进行Dystrophin基因外显子缺失及扩增的检测.对于单外显子异常结果通过PCR、测序和荧光定量PCR进行进一步验证.结果 在70例样本中,MLPA检出外显子缺失42例(60％),其中12例为单一外显子缺失,1例为单一外显子可疑缺失；检出外显子扩增7例(10％),其中2例为单一外显子扩增；21例样本未检出外显子拷贝数异常(30％).在12例MLPA提示的单一外显子缺失中,11例PCR验证结果与MLPA一致,1例为微缺失突变(c.4470-4471delAA)；在1例MLPA提示单外显子疑似缺失,经测序确定为既往未报道的微缺失突变(c.4746-4747delCT)；在2例MLPA提示单一外显子扩增的样本荧光定量PCR结果与MLPA一致.结论 MLPA技术应成为Dystrophin基因外显子拷贝数异常的首选检测方法;MLPA提示的单外显子异常结果必须结合其他检测方法进行进一步验证.
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杜兴肌营养不良症治疗进展及前景
目的 综述杜兴肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)治疗的新研究进展.方法 广泛查阅近年来相关文献,对DMD治疗的研究进展进行综述.结果 目前对DMD的治疗主要有基因治疗、细胞治疗和药理学治疗,基因治疗和细胞治疗通过传递正常基因或修正突变基因以及移植正常细胞,如干细胞来进行治疗;而药理学治疗主要针对dystrophin基因缺陷引起的下游事件,运用各种药物来减缓DMD病理进程,从而改善患者的生活质量,延长寿命.结论 针对DMD的各种治疗手段均存在一定困难,目前尚不能有效治疗此病,还需要研究探索更有效的治疗途径.
关键词： Dystrophin基因 肌营养不良 基因治疗 细胞治疗 药理学治疗 -
中国西南地区170例杜氏/贝氏肌营养不良症dystrophin基因变异谱分析
目的 构建中国西南地区杜氏/贝氏肌营养不良症(DMD/BMD) dystrophin基因变异谱,探讨dystrophin基因型与临床表型之间的关系.方法 采用多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)对170例DMD/BMD患者进行dystrophin基因分析,其中3例怀疑点突变患者采用Sanger 测序分析基因突变位点.结果 Dystrophin基因突变MLPA检出率为72.94％,其中基因缺失、重复及点突变所占比例分别为62.35％ (106/170),8.82％ (15/170)及1.76％ (3/170).共发现64种不同类型突变,连续外显子44～55缺失突变型占全部缺失型患者的75.47％.大部分5'端断裂点集中在2个热区(主热区:内含子43～55;次热区:内含子1～20).基因型-表型分析显示DMD/BMD严重程度与基因缺失型或重复型无关,而与改变开放阅读框架型突变有关(r=0.640,P＜0.001).结论 连续外显子缺失或重复是dystrophin基因突变的主要类型,DMD/BMD严重程度与其改变开放阅读框架型突变有关.
