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反义miR-30a-5p抑制人脑胶质瘤细胞U87生长的体外实验研究
目的 前期发现miR-30a-5p在胶质瘤中表达明显上调,本实验探究敲低miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U87细胞生物学特征的影响.方法 real-time PCR检测转染miR-30a-5p I(miR-30a-5p抑制物)后U87细胞的miR-30a-5p表达水平,流式细胞术、MTT、Transwell、Annexin V法检测细胞周期、生长、侵袭及凋亡的改变;Western blot检测相关蛋白.结果 real-time PCR结果显示miR-30a-5p I可有效降低U87细胞中miR-30a-5p表达,抑制细胞增殖活性,使细胞周期阻滞在G0/G1期,侵袭能力明显受抑,凋亡增加,促增殖蛋白PCNA、促细胞周期进展蛋白Cyclin D1及促侵袭蛋白MMP-9的表达明显下调,而抑制侵袭蛋白TIMP-1及凋亡相关蛋白p53表达明显上调.结论 敲低U87细胞的miR-30a-5p表达可抑制胶质瘤的增殖及侵袭,诱导凋亡;miR-30a-5p可成为人脑胶质瘤基因治疗的潜在候选靶点.
关键词： MiR-30a-5p 神经胶质瘤 细胞增殖 侵袭 细胞凋亡 -
miR-30a-5p靶向作用蛋白激酶B基因促进骨关节炎患者软骨细胞的凋亡
目的 观察miR-30a-5p在骨关节炎(OA)患者软骨组织中的表达及其对软骨细胞凋亡的作用机制.方法 2015年5月至2016年12月,收集南京中医药大学附属常州中医医院骨科289例OA软骨组织标本.聚合酶链反应(qPCR)检测不同患者软骨组织中miR-30a-5p以及蛋白激酶B(Akt) mRNA的表达情况,Tunel法检测软骨细胞凋亡情况,免疫印迹法组织和细胞中相关蛋白的表达,流式细胞仪检测不同细胞凋亡情况和细胞周期.结果 OA患者软骨组织miR-30a-5p相对表达量显著高于非OA[(3.64±0.95)比(1.03±0.31),P＜0.05],Akt基因表达较非OA显著下调[(0.41±0.17)比(1.08±0.26),P＜0.05];miR-30a-5p在OA患者软骨组织中的表达与Akt mRNA表达呈负相关(r =0.729 3,P＜0.001),与细胞凋亡率呈正相关(r=0.847 5,P＜0.001);在SW1353细胞内miR-30a-5p靶向负调控Akt基因表达,高表达的miR-30a-5p显著下调p-Akt,IkB-α,p-IkB-α,p65,p-p65和mTOR基因,p-mTOR蛋白表达(P＜0.05);与正常SW1353细胞相比,转入miR-30a-5p-mimics的SW1353细胞凋亡率增加9.65倍,G0/G1期细胞增加1.37倍,S期细胞降低了60.94％,G2/M期细胞降低了19.53％.结论 miR-30a-5p在OA患者软骨组织中呈现高表达,并且其高表达可以通过靶向作用Akt基因而将软骨细胞阻滞在G0/G1期,进而诱导软骨细胞的凋亡.
关键词： 软骨细胞 骨关节炎 软骨组织 MiR-30a-5p 蛋白激酶B -
反义miR-30a-5p抑制脑胶质瘤生长的体内实验研究
目的 探讨敲低微RNA (miR)-30a-5p表达对裸鼠荷人脑胶质瘤细胞U87移植瘤生长的抑制作用及其机制.方法 建立裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤模型,采用随机数字表法将其分为对照组、无义序列治疗组和miR-30a-5p反义寡聚核苷酸(AS-miR-30a-5p)治疗组(每组8只).分别给予相应治疗,隔日测量肿瘤大小以评估其疗效.治疗结束后处死动物,剥离肿瘤组织,提取RNA和蛋白,采用实时PCR方法检测治疗后miR-30a-5p表达水平,采用石蜡切片苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及Western blot检测,评价治疗后肿瘤组织形态以及增殖、凋亡等生物学性状等相关指标的变化,包括隔蛋白7(SEPT7)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)以及凋亡相关因子P53、bcl-2、caspase3等；应用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 AS-miR-30a-5p治疗组肿瘤生长速度及体积明显小于对照组与无义序列组,差异有统计学意义(F=7.167,P＜0.05)；其miR-30a-5p表达下调为对照组的0.297±0.051；肿瘤细胞恶性生物学表型相关蛋白PCNA、cyclin D1等表达明显下调,P53、SEPT7、caspase3等肿瘤生长抑制因子表达上调；细胞凋亡数明显增加.结论 miR-30a-5p为靶点的治疗能有效抑制异种移植U87人脑胶质瘤生长,肿瘤恶性表型有明显逆转,可作为人脑胶质瘤靶向治疗的侯选靶点.
关键词： 神经胶质瘤 寡核苷酸类 反义 药物疗法 MiR-30a-5p -
miR-30a-5p在肾癌中的表达分析及临床意义研究
目的:本研究通过检测32对肾细胞癌组织标本及相应癌旁正常组织标本中miR-30a-5p的表达水平,然后分析miR-30a-5p的表达量与患者临床特征之间的关系,为更深一步研究miR-30a-5p在肾细胞癌的发病机制的作用和功能的研究打下基础.方法:收集32对经手术切除的肾细胞癌及相应的癌旁组织标本,提取标本的总RNA,经反转录获得cDNA,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测miR-30a-5p的表达水平,利用统计学方法分析其表达量与患者临床特征之间有无相关性.结果:32对组织标本中有27例(84.38％)肾细胞癌组织的miR-30a-5p表达水平下降(P＜0.01),且统计学分析表明其下降和患者的年龄、性别、组织学分型及临床分期等临床特征无明显相关性(P＞0.05).结论:miR-30a-5p在肾癌组织中表达明显下调,提示其可能与肾癌的发生发展有一定的相关性.
关键词： microRAN MiR-30a-5p 肾细胞癌 肿瘤分期 -
miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制
目的 研究miR-30a-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制.方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应(real time-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别测定两组泛素蛋白连接酶(UBE3C)mRNA和蛋白质表达水平.结果培养48 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组[(203.7±16.8)%vs(330.4±20.7)%(=0.000)];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比(258±30.2)%,对照组相对活细胞百分比(403.4±28.4)%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组(=0.001).细胞划痕实验示:miR-30a-5p组划痕愈合率为(23.2±2.7)%,对照组划痕愈合率为(89.2±4.8)%,miR-30a-5p组划痕愈合率低于对照组(=0.000).real time-PCR显示,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平为(0.15±0.02),对照组UBE3C mRNA表达水平为(1.03±0.09),miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组(=0.000);Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C蛋白表达水平为(1.57±0.26),对照组UBE3C蛋白表达水平为(5.32±0.42),miR-30a-5p组UBE3C蛋白表达水平低于对照组(=0.000).结论miR-30a-5p抑制NSCLC增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关.
关键词： MiR-30a-5p 非小细胞肺癌 增殖 迁移 -
小儿原发性肾病综合征患者血清和尿液miR-30a-5p水平增加及临床意义
目的 检测分析原发性肾病综合征(NS)患儿血清全基因组微小核糖核酸(miRNA)表达谱,验证其中表达上调的miR-30a-5p,探讨其作为NS分子诊断指标的可能性.方法 收集南京军区南京总医院2010～2011年期间33例住院NS患儿未经治疗前血清和尿液样本,同时以30例年龄、性别匹配的健康儿童作对照.用高通量的TaqMan低密度芯片技术分别检测NS患儿和健康儿童的混合血清全基因组miRNA的表达量,再用TaqMan实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对在患儿血清中表达上调的miR-30a-5p进行验证,同时测定miR-30a-5p在尿液中的含量.结果 低密度芯片结果显示,30种miRNA在患儿血清中的表达量是健康儿童的2倍以上,其中miR-30a-5p为正常对照的104倍.qRT-PCR检测证实,miR-30a-5p在患儿血清中的含量4.34±0.08,显著高于对照组1.00±0.02(Z=5.916,P<0.000 1),在患儿尿液中的水平也明显升高(3.44±0.05 vs 1.00±0.04)(Z=3.312,P=0.001).用于诊断NS的血清miR-30a-5p ROC曲线下面积(AUCROC)为0.960(95% CI,0.915～1.000),敏感度和特异度均为98.3%.相关性分析显示,血清或尿液中的miR-30a-5p含量与患儿年龄、性别、肾功能及血脂水平均无明显关联(P>0.05).结论 NS患儿血清miRNA表达谱与健康儿童有明显差异,miR-30a-5p在患儿血清及尿液中水平显著升高,与NS密切相关,是NS潜在的分子诊断指标.
关键词： 原发性小儿肾病综合征 血清 尿液 微小核糖核酸 MiR-30a-5p
