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RANTES与SPARC基因在大鼠角膜移植排斥反应中的表达
目的:动态检测激活正常T细胞表达和分泌的调节物(regulated on activation normal T expressed and secreted,RANTES)和酸性富含胱氨酸分泌型蛋白(secreted protein,acidic and rich in cysteine,SPARC)在异体角膜移植排斥反应中的表达,为角膜移植排斥反应的早期诊断提供依据.方法:首先建立大鼠异体角膜移植动物模型,并设同体角膜移植、角膜碱烧伤模型为对照组,在不同时间段提取各组角膜上皮细胞总RNA.分别进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、电泳、半定量检测RANTES和SPARC mRNA的表达水平.然后酶切验证表达结果.结果:(1)正常角膜上皮细胞未见RANTES基因表达,可见SPARC基因的低表达;(2)异体角膜移植3天后各时间点均见排斥眼RANTES基因的高表达,同体移植及碱烧伤后未见表达;(3)SPARC在角膜移植及碱烧伤后均见较高水平表达,且与正常细胞表达有显著差异;(4)用RT-PCR方法检测基因变化诊断排斥反应早于裂隙灯检查结果.结论:大鼠角膜上皮RANTES mRNA表达上调与角膜移植排斥反应特异性相关.同时,SPARC在角膜移植排斥反应、碱烧伤和创伤过程中具有高水平表达.依时间顺序,RANTES和SPARC早期高表达早于临床观察的排斥反应至少一周.由此,选择性对细胞因子mRNA扩增,是早期诊断角膜移植排斥反应的有效方法.
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经不同途径注射的绿色荧光蛋白基因在大鼠颌下淋巴结的表达
目的 研究阳离子聚合物梭华-Sofast基因转染试剂(sofast gene transferreagent,Sofast)介导的绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein gene,PEGFP-N2)经不同途径注射后在大鼠颌下淋巴结(submandibular lymph nodes,SMLN)的表达情况,并寻求将外源基因转染到颌下淋巴结的佳途径.方法 经右眼前房、结膜下、颞下方穹隆部和下睑皮下给大鼠注射Sofast基因转染试剂和PEGFP-N2的复合物Sofast/DNA,通过荧光显微镜检查和流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测各组大鼠同侧的颌下淋巴结PEGFP-N2基因的表达分布和表达量.结果 注射Sofast/DNA复合物48 h后,前房注射组、结膜下注射组、颞下方穹隆部注射组和下睑皮下注射组的同侧颌下淋巴结均可检测到荧光表达.颞下方穹隆部注射组[(12.86±1.59)%]和下睑皮下注射组[(13.83±2.61)%]的流式细胞仪检测的阳性表达细胞的百分比高于结膜下注射组[(5.74±1.59)%]和前房注射组[(6.53±1.56)%](P＜0.01).结论 经Sofast介导的PEGFP-N2在大鼠颞下方穹隆部注射和下睑皮下注射后可以直接有效地在同侧颌下淋巴结表达.
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高表达吲哚胺2,3-二氧化酶的树突状细胞对角膜植片存活时间的影响
目的 研究高表达吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)的树突状细胞(dendritic cells,DC)对角膜植片存活时间的影响.方法 采用脂质体转染的方法将质粒CTLA4Ig转入F344大鼠(供体)DC,用荧光显微镜观察目的 基因的表达,采用RT-PCR方法检测转染前后DC中IDOmRNA的表达变化,应用流式细胞仪检测转染前后不同时间的DC对同种异体T细胞的影响.以F344大鼠为供体、Lewis大鼠为受体建立大鼠同种异体角膜移植模型,将基因修饰后高表达IDO的DC在术后立即注入Lewis大鼠体内(实验组),注射转染前DC的受体为对照组.用裂隙灯观察角膜植片的存活情况,术后第7天用八肽胆囊收缩素测定受体鼠T淋巴细胞对供体抗原的反应.结果 转染CTLA4Ig促进了树突状细胞IDO的表达(P＜0.05),并且转染后48 h的DC能显著引起T细胞凋亡(P＜0.5),注射高表达IDO的DC能明显延长角膜植片的存活时间(P＜0.01),治疗组Lewis大鼠T淋巴细胞对供体的抗原刺激的反应明显低于对照组(P＜0.05).结论 高表达IDO的供体DC能特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应,明显延长角膜植片存活时间.
