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改良K液的动物试验
本文用硫酸软骨素取代MK液中的低分子右旋糖酐并加入胰岛素、营养物质及抗氧化剂等配制成一种新的改良K液,以K液作对照,采用随机匹配比较的方法,通过动物试验对保存在二组液中的角膜组织进行内皮细胞活性检测及组织形态学分析.各项实验资料证明:改良K液配方合理,性质稳定,不仅具有比K液配制简单、经济、安全可靠等优点,更主要的是延长了角膜保存时间,提高了角膜保存质量.
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免疫荧光双重标记结合激光共聚焦扫描显微镜观察Ⅰ型胶原和硫酸软骨素在人牙本质中的分布
目的 介绍牙本质在不完全脱矿下免疫荧光双标染色方法,研究Ⅰ型胶原和硫酸软骨素在人牙本质中的分布情况,以期进一步理解牙本质湿粘接的机制.方法 选取新鲜拔除的无龋第三磨牙8颗,制备30 μm厚的牙本质切片40张,用37％磷酸凝胶酸蚀15 s,应用免疫荧光双重标记方法和激光共聚焦扫描显微镜,观察硫酸软骨素经甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮(tosyl-phenylalanyl chloromethyl ketone,TPCK)处理的胰蛋白酶消化去除前后相对胶原纤维的分布位置.结果 硫酸软骨素分布于牙本质小管管腔以及管周牙本质,Ⅰ型胶原纤维在管间牙本质和管周牙本质均存在;经特异性酶处理去除硫酸软骨素后,荧光强度明显减弱甚至消失.结论 免疫荧光双重标记结合激光共聚焦扫描显微镜可以在牙本质不完全脱矿的情况下研究其内部有机成分的分布;硫酸软骨素分布于牙本质小管管腔及管周牙本质,Ⅰ型胶原纤维分布于管间牙本质和管周牙本质.
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硫酸软骨素对HL60细胞增殖分化的影响
背景:硫酸软骨素是细胞基质的重要成分,可促进肿瘤细胞的增殖,抑制其转移.目的:观察硫酸软骨素对阿霉素作用下HL60细胞增殖分化的影响.设计:开放性实验.单位:青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室.材料:实验于2003-09/2004-12在青岛大学医学院生物化学与分子生物学研究室完成.HL60细胞株购于中国医学科学院上海细胞库,为人类早幼粒白血病细胞.牛软骨硫酸软骨素(Sigma).方法:①细胞传代培养后将进入对数增殖期的细胞用含体积分数0.1灭活胎牛血清的RPMI1640培养液配制成1×108 L-1的细胞悬液,分装于45个培养瓶中,4 mL/瓶.②取分装好的细胞悬液15瓶,按照0,5,25,50,75 mg/L浓度加入硫酸软骨素,每个浓度平行3瓶,空白对照组加入等量的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液.采取细胞计数法测定硫酸软骨素处理后的HL60细胞密度的变化.③取分装好的细胞悬液30瓶,分为硫酸软骨素+阿霉素组、硫酸软骨素组,各15瓶.按照0,5,25,50,75 mg/L浓度向两组加入硫酸软骨素,每个浓度平行3瓶,空白对照组加入等量的0.01 mmol/L磷酸盐缓冲液.用MTT法测定硫酸软骨素处理后的HL60细胞加入阿霉素后细胞存活率的变化.④取分装好的细胞悬液15瓶,按照0,5,25,50,75 mg/L浓度加入硫酸软骨素,每个浓度平行3瓶,空白对照组加入等量的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液.用酶联免疫反应测定各组细胞的酸性磷酸酶活性,观察其对细胞分化的影响.主要观察指标:①硫酸软骨素对HL60细胞增殖的影响.②硫酸软骨素+阿霉素对HL60细胞存活率的影响.③硫酸软骨素对HL60细胞酸性磷酸酶活性的影响.结果:共制备细胞悬液45瓶,全部进入结果分析.①与空白对照组比较,不同浓度硫酸软骨素处理24 h后HL60细胞密度均显著升高(P＜0.01);且50,75 mg/L硫酸软骨素浓度组的细胞密度升高尤为明显,但两组间比较基本相似(P＞0.05),说明在这个浓度范围内硫酸软骨素对细胞生长的促进作用变化不大.②与空白对照组比较,加入不同浓度硫酸软骨素后,硫酸软骨素+阿霉素组细胞存活率均有不同程度的降低,硫酸软骨素浓度超过25 mg/L时降低明显(P＜0.01).③与空白对照组比较,5,25,50 mg/L硫酸软骨素浓度组HL60细胞酸性磷酸酶吸光度值均明显升高(1.268±0.038,1.305±0.101,1.321±0.021,1.354±0.013,P＜0.01或0.05),尤其是75 mg/L硫酸软骨素浓度组HL60细胞酸性磷酸酶吸光度值高达1.406±0.113,与空白对照组比较差异有极显著意义(P＜0.001).结论:硫酸软骨素在适当浓度时对HL60细胞的增殖产生促进作用,可提高HL60细胞对阿霉素的敏感性,促进细胞分化.
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硫酸软骨素和硫酸氨基葡萄糖对成人大骨节病的疗效分析
目的 观察硫酸软骨素和硫酸氨基葡萄糖对大骨节病的疗效.方法 2007年7月,在黑龙江省尚志市光辉村按<大骨节病诊断标准>检出患者80例.按病情等级、年龄、性别将80例患者分成治疗组、对照组.每组40人.治疗组给予硫酸软骨素和硫酸氨基葡萄糖治疗,对照组给予安慰剂(等量淀粉).在治疗前及治疗后(第8个月)对患者进行直立体位的膝关节X线拍片,利用刻度放大镜测量X线膝关节腔宽度.结果 对照组治疗前、后的X线膝关节腔宽度分别为(4.30±2.14)、(4.10±2.07)mm,治疗组分别为(4.17±2.15)、(4.16±2.11)mm.药物对X线关节腔宽度没有影响(F=0.50,P>0.05),时间、药物与时间的交互作用对X线关节腔宽度有影响(F值分别为67.66、46.74,P均<0.05).治疗组X线关节腔宽度治疗前低于对照组(P<0.05),治疗后高于对照组(P<0.05);对照组治疗前X线关节腔宽度高于治疗后(P<0.05).结论 硫酸软骨素和硫酸氨基葡萄糖减缓了成人大骨节病患者膝关节间隙继续变窄的进程,对关节软骨起到了保护作用,为成人大骨节病治疗在药物选择和疗效判定上提供了依据.
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高效液相色谱柱后衍生荧光法测定尿液中硫酸软骨素分解产生的不饱和双糖
目的 探讨高效液相色谱柱后衍生荧光法测定尿液中硫酸软骨素(CS)分解产生的不饱和双糖的效果.方法 分别用离心过滤法和常规沉淀法进行尿液的预处理,处理后的样品加CS裂解酶消化,用高效液相色谱柱后衍生荧光法测定分解产生的不饱和双糖(ADi-0S、△Di-4S、ADi-6S)的量,比较两种预处理方法中CS标准品回收率的差别.结果 高效液相色谱柱后衍生荧光检测系统运转效果良好,该法对于双糖的低检出量为10 ng.尿样经离心过滤法处理后,CS标准品分解产生的△Di-0S、△Di-4S、△Di-6S的回收率分别为86.93%、87.28%、85.03%;而在常规沉淀法中,3种双糖的回收率仅为75.09%、72.96%、77.70%.结论 高效液相色谱柱后衍生荧光法较为灵敏,可用于测定CS分解产生的不饱和双糖.在尿液样品的预处理方法中,离心过滤法优于常规沉淀法,可应用于尿液中CS的微量测定.
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复方盐酸氨基葡萄糖治疗骨关节炎的多中心随机双盲试验
目的:观察并验证复方盐酸氨基葡萄糖胶囊和片剂治疗骨关节炎的疗效及安全性.方法:360例骨关节炎病人采用多中心、随机、双盲的研究方法,分为胶囊剂、片剂及安慰剂3组,按照1:1:1的对照原则,每组120例.分别口服复方盐酸氨基葡萄糖胶囊、片剂和安慰剂,每次3粒,每日3次,连续服用3 mo,随访并观察其临床疗效及不良反应.结果:胶囊剂组与片剂组治疗骨关节炎总有效率为92.5%及93.3%,病人生活质量明显提高,临床上2组间疗效比较无显著差异(P＞0.05).安慰剂组有效率为20.8%,与试验组比较有显著差异(P＜0.05).胶囊剂组和片剂组的不良反应发生率分别为0.8%和3.3%,差异无显著意义(P＞0.05).结论:复方盐酸氨基葡萄糖胶囊和片剂治疗骨关节炎疗效好,安全性高.
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新生鼠脑损伤后神经蛋白聚糖的变化
目的 观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑内神经蛋白聚糖的动态变化,探讨神经可塑性相关抑制因素在发育期脑损伤后的改变. 方法 7 d龄SD大鼠随机分为假手术组和HIBD组,于脑缺氧缺血术后1,4,7,14,28 d分别取脑组织进行H-E染色和免疫组织化学染色观察组织病理变化及神经蛋白聚糖蛋白表达,并以RT-PCR法检测其mRNA表达. 结果 假手术组神经蛋白聚糖的表达于术后7 d达到高峰(P<0.05),此后阳性表达逐渐减少;HIBD组术后4 d、7 d的神经蛋白聚糖蛋白及其mRNA表达均低于假手术组(P<0.05),至术后14 d、28 d表达增高,均高于假手术组(P<0.05). 结论 新生大鼠HIBD后脑组织神经蛋白聚糖蛋白及其mRNA表达随着时间推移发生变化.提示HIBD后神经可塑性调控的关键时期为损伤后2周内.
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主动脉夹层中硫酸软骨素含量和结构改变的初步研究
目的:比较正常主动脉壁和主动脉夹层瘤壁中硫酸软骨素的含量及结构,探讨硫酸软骨素在主动脉夹层发生和进展中的可能作用.方法:收集主动脉夹层瘤壁标本(实验组)10例和正常主动脉壁标本(正常对照组)7例,提取两组标本中的糖胺聚糖,采用DEAE Sephacel离子交换层析法分离纯化硫酸软骨素.以硫酸软骨素酶ABC将硫酸软骨素裂解为不饱和二糖,应用高效毛细管电泳法进行测定.结果:实验组中硫酸软骨索含量较正常对照组明显升高(P<0.01).实验组中硫酸软骨素二糖包括△ di-di(2,6)S、△di-di(2,4)S、△di-di(4,6)S、△di-mono6S、△di-mono4S和△di-nonS,其中除△di-di(2,4)S含量较正常对照明显降低(P<0.05)外,其余5种二糖均明显升高(P<0.05).结论:主动脉夹层瘤壁中硫酸软骨素的含量和分子结构均发生明显异常.这些异常可能在主动脉夹层的发病和进展过程中发挥重要作用.
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大鼠脊髓挤压伤后硫酸软骨素蛋白多糖NG2在时间和空间的变化
目的：探讨大鼠脊髓挤压伤后硫酸软骨素蛋白多糖（CSPGs ）在时间和空间的变化。方法：①采用大鼠脊髓挤压伤模型，实验动物随机分为脊髓压迫后0h、8h、24h、48h、72h、1周、2周组。对不同时间点的脊髓标本进行 HE染色；计算脊髓损伤区的实际面积；②探讨脊髓挤压伤后CSPGs在时间和空间分布的变化，并观察CS-56在损伤后的表达及其和GFAP的关系。结果：CSPGs在脊髓损伤后表现出强大的抑制作用，免疫荧光染色结果显示，CS-56表达于24h内开始升高，3d后CS-56呈环状分布于损伤区周围，GFAP有少量表达，1周时空洞逐渐出现，2周时空洞轮廓明显，CS-56充填于空洞腔内。结论：分析硫酸软骨素蛋白多糖NG2在时间和空间分布的变化有助于确定抑制其分泌的时间窗，为细胞移植治疗脊髓损伤提供一定的内环境支持。
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硫酸软骨素对人肺癌A549细胞增殖及侵袭能力影响
目的 探讨硫酸软骨素(CS)对人肺癌A549细胞增殖及侵袭能力的影响及可能的分子机制.方法 常规方法培养人肺癌A549细胞,并给予含不同剂量CS的培养液培养,采用噻唑盐(MTT)法检测CS对A549细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)碘化丙啶染色法检测CS对A549细胞周期的影响;采用Transwell侵袭实验检测CS对A549细胞侵袭能力的影响.结果 CS各浓度组干预A549细胞后,与对照组相比细胞生长均受到限制,差异具有显著性(F=10.39,q =6.45～17.48,P＜0.05).24 h细胞被抑制25％和50％时CS的浓度为6.6和28.4 g/L.以7和30 g/L的CS干预A549细胞24 h后,FCM检测结果显示,与对照组相比,G0/G1期和G2/M期比例明显降低,S期比例明显升高,差异有显著性(F=16.29～38.01,q=6.15～16.38,P＜0.05).Transwell侵袭实验显示,实验组A549细胞穿膜细胞数明显少于对照组,差异有显著性(F=3.19,q=4.89、15.38,P＜0.01).结论 CS对人肺癌A549细胞具有抑制增殖和侵袭的作用,其机制可能与抑制细胞分裂周期有关.
