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MicroRNA-20a对干细胞增殖和骨向分化调控作用的研究进展
miRNA是一种非编码小RNA.MiR-20a是miR-t7-92家族一员,位于13号染色体上,此家族的成员在组织和器官发育中具有重要作用,是脊椎动物发育所必须的.而miR-20a作为miR-17-92家族一员,其不仅是重要的癌基因,而且在干细胞增殖分化中也有重要作用,故本文主要对miR-20a对干细胞增殖,成骨分化及骨代谢的影响及机制做一综述.
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微小RNA-20a对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨微小RNA-20a(miR-20a)在膀胱癌中的表达情况及其对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 收集2015年11月至2016年10月本院收治的65对膀胱癌组织和癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测癌组织和癌旁组织的miR-20a水平.采用LipofectamineTM 2000脂质体法将miR-20a模拟物(mimics组)和抑制剂(inhibitor组)转染人膀胱癌T24细胞,以不行任何转染的T24细胞为对照组,采用QPCR法检测各组转染48 h后的miR-20a水平,采用CCK-8法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测各组的增殖和凋亡情况.采用生物信息学软件Targetscan预测miR-20a的靶基因并利用cytoscape 3.5.1软件及其插件CluGO对靶基因进行GO功能注释.结果 膀胱癌组织的miR-20a水平为3.181±1.669,高于对应癌旁组织的1.198±0.756(P<0.05).对照组、mimics组和inhibitor组转染48 h后的miR-20a水平分别为1.024±0.468、2.756±0.941和0.412±0.075,与对照组相比,mimics 组的 miR-20a 水平升高而 inhibitor组的 miR-20a 水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,mimics组转染24、48、72h后的吸光值和增殖倍数均升高,而inhibitor组的吸光值和增殖倍数均降低,差异有统计学意义(P<0.05).对照组、mimics组和inhibitor组的转染48 h凋亡率分别为(12.16±1.67)％、(7.22±0.97)％和(36.13±4.15)％,与对照组相比,mimics组的凋亡率降低而inhibitor组的凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05).MiR-20a的预测靶基因共筛选出147个,GO功能主要富集于细胞周期、磷脂酰肌醇Akt信号通路和细胞代谢过程.结论 MiR-20a在膀胱癌组织中表达上调并可以促进癌细胞的增殖,发挥类似促癌基因的作用,有望成为膀胱癌的新型生物治疗靶点.
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卵巢浆液性囊腺癌组织中 miR-20a、Let-7a表达变化及与患者预后的关系
目的：观察卵巢浆液性囊腺癌组织中微小RNA-20a（ miR-20a）和Let-7a的表达变化，并探讨二者与患者预后的关系。方法卵巢浆液性囊腺癌患者93例，术中留取肿瘤组织。分别留取同期手术治疗的卵巢交界性肿瘤患者（43例）及卵巢浆液性囊腺瘤患者（48例）的肿瘤组织，留取正常卵巢组织（40例份）。采用real-time PCR技术检测不同组织中的miR-20a和Let-7a。采用Kaplan-Meier法分析卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a、Let-7a表达与患者预后的关系。结果各种卵巢肿瘤组织中miR-20a表达量高于正常卵巢组织、Let-7a表达量低于正常卵巢组织（P均＜0．05）；卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a表达量高于卵巢交界性肿瘤组织及卵巢浆液性囊腺瘤组织、Let-7a表达量低于卵巢交界性肿瘤组织及卵巢浆液性囊腺瘤组织（ P均＜0．05）。 miR-20a、Let-7a与卵巢浆液性囊腺癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移和远处转移发生情况有关（ P均＜0．05）。卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a与Let-7a表达呈负相关关系（r＝－0．489，P＜0．05）。卵巢浆液性囊腺癌患者随访至2014年2月28日， miR-20a表达量＞1．42者中位生存时间短于miR-20a表达量≤1．42者，Let-7a表达量＜0．98者中位生存时间短于Let-7a表达量≥0．98者（ P均＜0．05）。结论卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a呈高表达、Let-7a呈低表达，二者可能共同参与了卵巢浆液性囊腺癌的发生、发展，并与患者预后有关。
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微小RNA-20a对人胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性的影响
目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-20a在替莫唑胺(TMZ)耐药的胶质瘤细胞株中的表达,探讨胶质瘤产生TMZ耐药的机制.方法 通过浓度梯度递增法建立人脑胶质瘤TMZ耐药模型细胞株,并命名U251/TMZ.实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞株中miR-20a的表达.Western blot技术检测细胞株中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号及其下游信号的磷酸化.对U251/TMZ细胞株转染miR-20a inhibitor,并检测其细胞存活率、miR-20a表达及mTOR信号通路磷酸化.结果 与U251细胞株比较,U251/TMZ细胞株中miR-20a的表达水平明显升高(2.28 ±0.18比1.03±0.05,P＜0.05),同时mTOR通路的磷酸化水平也升高.并且抑制miR-20a表达后,U251/TMZ细胞株的细胞存活率明显下降(P＜0.01),mTOR信号通路的磷酸化水平下降.结论 miR-20a的表达可能与胶质瘤细胞对TMZ的耐药性相关,其可能通过mTOR信号通路发挥作用.
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微小RNA-20 a对脂多糖诱导A549细胞炎症反应的作用及机制研究
目的 探讨微小RNA-20a(microRNA-20a,miR-20a)在脂多糖诱导肺泡上皮细胞A549炎症反应中的作用及可能机制.方法 首先将miR-20a类似物(mimic)/抑制剂(inhibitor)转染至A549细胞,再用脂多糖共同刺激24 h后,用实时定量聚合酶链反应检测白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和IL-8 mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测IL-6和IL-8蛋白的表达情况,并用Western blot检测细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal regulating kinase 1,ASK1)、P38、P-P38、JNK及P-JNK蛋白的表达.结果 mimic组IL-6、IL-8 mRNA和蛋白表达水平低于mimic阴性对照组,inhibitor组IL-6、IL-8 mRNA和蛋白表达水平高于inhibitor阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);mimic组ASK1、P-P38及P-JNK蛋白表达低于mimic阴性对照组,inhibitor组ASK1、P-P38、P-JNK蛋白表达高于inhibitor阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-20a对ASK1的靶向调控可能在急性呼吸窘迫综合征的炎症发生过程中发挥作用.
