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Nfic基因的研究进展
核因子I(Nfi)家族具有DNA结合蛋白特异结合位点,在动物生理学、生物化学和病理学上起着重要的作用,参与调控DNA复制和基因表达,Nfi蛋白与细胞生长状态变化、致癌过程和疾病状态均有密切关系.其中,Nfic是核因子家族的一员,大量实验研究发现其参与多种信号通路,本文总结了近来关于Nfic的主要研究方向,进一步探讨Nfic在各信号通路内的作用及相互联系.
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糖尿病大鼠Nfic与成骨相关基因表达的研究
目的:探究糖尿病大鼠Nfic的表达状况及其与其他成骨相关基因表达改变.方法:6周龄Wistar 雄性大鼠30只,随机分为对照组和糖尿病模型组.模型组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(65mg/kg)建立1型糖尿病模型.观察两组大鼠体重、血糖变化;模型建成后8周处死大鼠,Q-PCR法检测双侧股骨Nfic、Runx2、OSX(Osterix)、COL2A1(Ⅰ型胶原)、OC(骨钙素)、ALP、BMP-2、IGF-1(胰岛素样生长因子)的mRNA表达水平.结果:8周后,模型组大鼠体重降低或保持不变,对照组大鼠体重持续稳定增长;模型组血糖持续保持在高血糖水平,对照组血糖位于正常范围;Q-PCR检测发现,Nfic、Runx2、OSX、COL2A1、OC、IGF-1、BMP-2基因mRNA表达中,模型组明显低于对照组.ALP基因的mRNA表达中,模型组显著高于对照组(P＜0.01).结论:1型糖尿病大鼠的高糖状态使得Nfic等成骨相关基因表达下降,成骨标记产物降低.
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Nfic基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-20a靶向关系的验证
目的：构建核因子C（nuclear factor I-C，Nfic）基因3′非编码区（3′UTR）荧光素酶报告质粒，利用双荧光素酶报告基因验证microRNA-20a（miR-20a）与其潜在靶基因Nfic的靶向关系。方法通过microRNA靶基因预测软件Targetscan获取miR-20a与Nfic基因3′UTR潜在的互补结合位点；PCR扩增出Nfic基因3′UTR序列，将此序列克隆至荧光素酶报告载体pMIR-Report Luciferase；将重组荧光素酶报告质粒与miR-20a mimics（实验组）或NC mimics（对照组）共同转染293-AD细胞，收集细胞后通过双荧光素酶报告系统检测2组细胞的荧光素酶活性，从而对Nfic与miR-20a的靶向调节关系进行鉴定。将miR-20a mimics和NC mimics分别转染骨髓基质细胞系ST2，裂解细胞提取蛋白后采用Western blotting检测NFIC蛋白的表达水平。结果构建的重组荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确。双荧光素酶报告基因检测显示，与对照组相比，miR-20a可以抑制Nfic 3′UTR报告基因载体的荧光素酶活性（P<0.05）；Western blotting结果显示，与对照组相比，ST2细胞转染miR-20a mimics后NFIC蛋白表达水平明显下调。结论成功构建了Nfic基因3′UTR荧光素酶报告质粒,而miR-20a可以直接作用于Nfic基因3′UTR，抑制其荧光素酶活性。
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转录因子NFIC在cAMP信号通路调控根尖牙乳头干细胞分化中的作用
目的 通过慢病毒转染过表达NFIC基因,研究NFIC在cAMP信号通路促进根尖牙乳头干细胞(SCAPs)分化中的作用.方法 采用酶消化法培养SCAPs,将SCAPs分别于普通矿化诱导液(对照组)、cAMP信号通路激动剂(Forskolin组)、转染空病毒载体协同Forskolin(Forskolin+LV-empty组)、转染过表达NFIC慢病毒协同Forskolin(Forskolin+ov-NFIC组)的矿化诱导液中培养.矿化诱导10 d后茜素红染色检测各组矿化结节形成情况,QPCR法检测7 d Runt相关基因2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)mRNA的表达.结果 Forskolin作用SCAPs后矿化结节形成增多,相关矿化基因表达增高,而Forskolin+ov-NFIC组矿化结节进一步增多,矿化基因表达进一步上调.结论 转录因子NFIC能够促进cAMP信号通路介导的SCAPs分化.
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出生后大鼠牙胚组织中nfic基因多种选择性剪接体的克隆研究
目的:研究nfic基因在牙齿发育中的作用.方法:提取出生后 SD 大鼠磨牙牙胚组织总mRNA, 反转录合成cDNA.根据NCBI GeneBank中nfic cDNA序列,分别设计2 对PCR引物,进行nfic基因部分序列的扩增,扩增产物与T载体进行T/A连接,然后转化高效感受态大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行酶切鉴定,并对扩增产物进行序列测定.结果:P1、P2为引物进行PCR扩增,可见大小约350 bp的特异扩增产物;以P3、P4为引物进行PCR扩增,电泳可见大小不同的3条特异扩增产物,经克隆后的序列测定,为大鼠nfic基因的3 种可变剪接体.结论:nfic基因在大鼠牙齿发育后期、牙根的发育前期有表达,并且存在至少3 种大鼠nfic基因选择性剪接体.
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Nfic在牙根发育中的调控作用研究进展
牙齿的发育形成是复杂的上皮、间充质相互作用的过程,是发育生物学中器官形成的典型模型.目前已证实,多个重要的信号通路参与了牙齿早期发育的调控,其中核因子I (nuclear factor I,NFI) 家族成员C (Nfic) 存在于牙根发育时期的牙乳头间充质细胞内,对根部牙本质形成起到重要作用.本文就近年来关于Nfic对牙根发育的调控作用研究进展情况作一综述.
